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La leptospirose est l’une des zoonoses les plus courantes à travers le monde. Actuellement, la protection contre la leptospirose peut être induite par un vaccin constitué de germes leptospiraux entiers. De ce fait, la préparation et la formulation d’une nouvelle génération de vaccins capable de favoriser une immunité à long terme sont essentielles pour le contrôle de cette maladie. L’objectif de cette étude était de préparer et caractériser un nouveau système de délivrance composé de microsphères d’alginate pour l’immunisation contre la leptospirose. Pour la préparation des antigènes, 5 sérotypes de Leptospira interrogans à savoir Icterohaemorrhagiae, Grippotyphosa, Serjo harjo, Pomona, et Canicola on été utilisés. Les microsphères d’alginate contenant les antigènes leptospiraux (AL) ont été préparées par émulsification et ensuite analysées en termes de morphologie, granulométrie, efficacité de chargement (EC), capacité de chargement (CC) et profil de libération. De plus, l’influence des concentrations en alginate et en émulsifiant a également été étudiée. Enfin, les conditions optimales de préparation pour les microsphères d’alginate chargées d’AL ont été déterminées. Selon nos résultats, les concentrations optimales de préparation étaient respectivement de 3,65% p/v (pourcentage de poids par volume) d’alginate dans l’émulsifiant, 0,24% v/v de Span 80 et 3,85% v/v de Tween 80. De plus, le taux d’homogénéisation approprié a été obtenu à 500 rpm. La taille moyenne des particules générées était de 200 nm avec un EC de 97,41% et un CC de 8%. Les testes de libération des AL à partir des microsphères d’alginate montrent un profil de libération étendu sur une période prolongée de 216 heures. Pa conséquent, sur le plan technique, les microsphères d’alginate semblent représenter un système de délivrance prometteur pour le vaccin leptospiral.