فهرست مطالب

Archives of Razi Institute
Volume:69 Issue: 1, Spring 2014

  • تاریخ انتشار: 1393/03/15
  • تعداد عناوین: 14
|
  • سیدعلی پوربخش صفحات 1-14
    شناسایی مایکوپلاسما سینوویه با استفاده از روش های کشت و واکنش زنجیره ای پلیمراز از مزارع ماکیان تجاری استان های مختلف ایران گزارش شده است. آنالیز فیلوژنتیک جدایه های مایکوپلاسما سینوویه بر اساس ژن های 16S rRNA و هماگلوتینین (vlhA)، طی مطالعاتی بررسی گردیده است. محصولات واکنش زنجیره ای پلیمراز مربوط به قطعات ژن 16S rRNA که از جدایه های ایران بدست آمده بودند، تعیین توالی گردید و سپس با قطعات مربوط به 16S rRNA موجود در بانک ژن مقایسه شدند. تغییرات، تنوع و تفاوت بین نوکلئوتید های همه جدایه ها مورد بررسی قرار گرفتند و مطالعه فیلوژنتیک نشان داد که توالی مایکوپلاسما سینویه های جدا شده از ایران بیشترین نزدیکی را با توالی های مایکوپلاسما سینوویه از کشور برزیل داشتند. همچنین بررسی توالی انتهای N-terminal مربوط به ژن کد کننده vlhA به عنوان یک جایگزین برای ردیابی و تایپینگ اولیه سویه های فیلدی مایکوپلاسما سینوویه، در طیور صنعتی به کار برده شده است. مطابقت کاملی بین توالی همه جدایه های ایران و عدم تغییر در توالی ناحیه انتهای vlhA همه جدایه های مایکوپلاسما سینوویه مشاهده گردید و همچنین تمایز بین جدایه های ایران و سویه واکسینال MS-H نشان داده شد. اخیرا«یک ناحیه مربوط به قسمت محافظت شده ژن vlhA در مایکوپلاسما سینوویه به منظور تعیین تیپ مایکوپلاسمای فیلدی در ایران و تمایز سویه واکسن زنده MS-H، تعیین توالی و بررسی گردید. علاوه بر آن، یک روش RFLP بر مبنای پلی مورفیسم تک نوکلئوتیدی که در تمامی جدایه های فیلدی ایران وجود دارد و بین جدایه های فیلدی و سویه MS-H تمایز ایجاد می کند، راه اندازی شده است. این روش PCR-RFLP قادر به تفریق همه جدایه های فیلدی از سویه واکسینال بود.
    کلیدواژگان: مایکوپلاسما سینوویه، توالی 16S rRNA، ژن vlhA، آنالیز فیلوژنتیک، RFLP، ماکیان تجاری، ایران
  • زهرا بزرگخو، رضا پیله چیان لنگرودی*، پژواک خاکی، احمد رضا جباری، سهیلا مرادی بیدهندی، محسن موسوی شوشتری صفحات 15-20

    کلستریدیوم سپتیکوم یک باکتری گرم مثبت بی هوازی است که تعدادی توکسین از جمله آلفا، بتا، گاما و دلتا را تولید می کند. آلفا توکسین کلستریدیوم سپتیکوم کشنده بوده و مسئول بیماری بسیار خطرناک قانقرایای گازی است. هدف مطالعه حاضر کلونینگ ملکولی و توالی یابی ژن آلفا توکسین کلستریدیوم سپتیکوم سویه واکسینال(CN913) است. از سوسپانسیون کشت شبانه باکتری، DNA ژنومیک به وسیله روش استاندارد فنل کلروفرم تخلیص و ژن آلفا توکسین با استفاده از پرایمرهای اختصاصی طراحی شده و به روش واکنش زنجیره ای پلیمراز تکثیر شد. کمیت و کیفیت محصول واکنش زنجیره ای پلیمراز با استفاده از الکتروفورز ژل آگارز تعیین و به روش اسپکتروفوتومتری تائید گردید. محصول واکنش زنجیره ای پلیمراز تخلیص ودر وکتورکلونینگ pJET1.2blunt لایگیت شد. سپس سلول مستعد E. coli/TOP10 به وسیله آن ترانسفورم گردید. پلاسمید نوترکیب pJETαsep از کلونE. coli/TOP10/pJETαsep تخلیص و ژن آلفا توکیسن به وسیله پرایمرهای یونیورسال توالی یابی شد. توالی یابی و آنالیز بلاست ژن csa بیش از 99% تشابه را با سایر ژنهای csa موجود در بانک ژن نشان داد. این توالی با شماره JN793989 در بانک ژن ثبت گردید. از سویه E. coli/TOP10/pJETαsep می توان به عنوان یک کلون نوترکیب باکتریائی برای تخلیص ژن csa و بیان آن در میزبان مناسب استفاده نمود.

    کلیدواژگان: کلستریدیوم سپتیکوم، سویه واکسن، ژن آلفا توکسین(csa)، کلونینگ، توالی یابی
  • عبدالرضا نبی نژاد، همایون مهروانی، وحید نعمان، نوشین عسکری صفحات 21-26
    نشخوار کنندگان استان اصفهان بیش از پنجاه سال است که از بیماری تب برفکی متاثر می شوند، یک رخداد شدید بیماری تب برفکی در سال 2005 در استان اصفهان به وقوع پیوست و حتی حیوانات واکسینه را نیز در گیر نمود. در مطالعه حاضر مولکولار اپیدمیولوژی ویروس های تب برفکی جدا شده از دامهای استان اصفهان درسال 2006 تا 2009 با استفاده از تکنیک RT-PCR چند قطعه از ژنوم ویروس، توالی یابی و میزان ضریب همبستگی r در مقایسه با سوشهای واکسینال انجام گردید که ویروس های تشخیص داده شده عبارت از ویروس O، ویروس تیپ A87 و ویروس نوظهور تیپ A87 بود. بر اساس نتایج پس از دو ماه از ورود ویروس از طرف غرب به استان اصفهان در شهرستان نجف آباد سویه بسیار پاتوژن A05 جدا شد و در ادامه به 10 شهر دیگر استان وارد گردید، که با ویروس واکسن A05IR فقط معادل 1% تفاوت داشت و در مقایسه با ویروسA22 معادل 65% متفاوت بود، همچنین بر اساس مقایسه توالی قطعه 600 bp ژنوم VP1، ویروس تیپO جدا شده از استان اصفهان، 3% تفاوت ژنتیکی را با ویروس O شبستر(واکسینال) نشان داد. میزان ضریب همبستگی r تصادفی سویه A05 جدا شده از نجف آباد در ارتباط با ویروس A87IR معادل 35/. و در ارتباط با A05IR معادل 73/. بود. میزان ضریب هممبستگی r تصادفی حاصل از مقایسه جدایه O اصفهان با ویروس O واکسینال (شبستر) 76/0 و در مقایسه با ویروس O967 (پان آسیا) 88/0 بود. بر اساس نتایج با بهبود واکسنهای دوگانه قبلی (A87 و O شبستر) با افزایش ویروس A05/Ir، بیماری تب برفکی در دامهای استان اصفهان کنترل شد.
    کلیدواژگان: تب برفکی، اصفهان، مولکولار اپیدمیولوژی
  • نسیم وکیلی، بهمن مصلی نژاد*، رضا آویزه، مسعودرضا صیفی آباد شاپوری، مهدی پورمهدی صفحات 27-33

    پاروویروس تیپ-2 همواره به عنوان یکی از مهمترین ویروس های مسوول، در ایجاد آنتریت هموراژیک حاد در سگ ها به شمار می رود. تشخیص سریع و دقیق عفونت ناشی از پاروویروس تیپ-2، بویژه در کنل ها (لانه سگ)، جهت جداسازی سگ های آلوده مهم است. هدف از انجام مطالعه حاضر، مقایسه دو تست آزمایشگاهی یعنی واکنش زنجیره ای پلی مراز و ایمونوکروماتوگرافی اسی بود که بیشتر جهت تشخیص عفونت ناشی از پاروویروس در سگ های خانگی بکار برده می شود. نمونه های مدفوع از 55 قلاده سگ (50 مورد مبتلا به اسهال خونی و 5 قلاده سالم) در فاصله سال های 91-1390 در منطقه اهواز، جنوب غرب ایران جمع آوری شده بود. سگ های مورد مطالعه، به دو گروه سنی (کمتر از 6 ماه و بالای 6 ماه)، 4 نژاد مختلف (تریر، ژرمن شفرد، دوبرمن پینچر و مخلوط) و بر اساس محیط به دو گروه (باز و بسته) تقسیم بندی شدند. تمام نمونه ها با دو روش ایمونوکروماتوگرافی و واکنش زنجیره ای پلی مراز مورد ارزیابی قرار گرفته و نتایج با استفاده از روش های آماری کاپا، مک نمار و مربع کای آنالیز شدند. ایمونوکروماتوگرافی اسی و واکنش زنجیره ای پلی مراز قادر بودند که آنتی ژن یا اسید نوکلئیک پاروویروس تیپ-2 را به ترتیب در 33 و 50 مورد از نمونه های اسهالی تعیین کنند. نمونه های سگ های سالم با هردو آزمایش منفی بودند. اگرچه حساسیت روش ایمونوکروماتوگرافی اسی در مقایسه با واکنش زنجیره ای پلی مراز 66 درصد تعیین شده بود (واکنش زنجیره ای پلی مراز حساس تر از ایمونوکروماتوگرافی اسی)، با این وجود آنالیز آماری نشان داد که تفاوت بین دو تکنیک معنی دار نبودند (P>0.05). آزمایش کاپا بین دو روش 38/0بدست آمد. آزمایش خون نیز نشان داد که اکثر سگ های آلوده دچار لکوپنی، لنفوپنی و نوتروپنی بودند (82%، 41 مورد از 50 نمونه). نتایج حاصل از این بررسی نشان داد که استانداردسازی دقیق روش های آزمایشگاهی برای تشخیص عفونت های پاروویروسی لازم هستند تا یک ابزار مناسب جهت تشخیص عامل اتیولوژیک گاستروآنتریت هموراژیک را فراهم نمایند. اگرچه ایمونوکروماتوگرافی، روشی ساده و سریع جهت تفریق نمونه های مشکوک به پاروویروس است، اما واکنش زنجیره ای پلی مراز نسبت به ایمونوکروماتوگرافی اسی حساس تر و قابل اعتمادتر است. علاوه بر این تحت تیپ های پارووویروس بعد از تایید این ویروس با روش واکنش زنجیره ای پلی مراز تعیین شدند. در این آزمایش 48 نمونه CPV-2b و 2 نمونه دیگر CPV-2a بودند. نتایج ما نشان داد که CPV-2b تحت تیپ غالب بود.

    کلیدواژگان: پاروویروس، واکنش زنجیره ای پلی مراز (PCR)، ایمونوکروماتوگرافی(ICA)، سگ
  • رحیم قدیمی پور، ایرج خلیلی، علی آمقی، شهین مسعودی، سعید صدیق اعتماد، محمد مجید ابراهیمی صفحات 35-39
    بیماری آنفلوانزای پرندگان سویه H9N2، به دلیل میزان اپیدمی بالا و خسارات اقتصادی حاصل از تاثیر ویروس بر رشد و تولید گله ها و تلفات شدید، مشکلی جدی در صنعت طیور به حساب می آید. در حال حاضر مناسب ترین روش پیشگیری از این بیماری، واکسیناسیون طیور است که واکسن غیر فعال آن با تکثیر ویروس در جنین تخم مرغهای نطفه دار تولید می شود. برای تولید واکسنی با بالاترین تیتر ویروسی و بیشترین قدرت ایمنی زایی، اطلاع دقیق از منحنی رشد ویروس ضروری به نظر می رسد. به این منظور در مطالعه حاضر سویه واکسینال ویروس آنفلوانزای پرندگان H9N2 در تخم مرغ های SPF تلقیح گردید. تلقیح از رقت 5-10 به میزان 1/0 میلی لیتر و بصورت داخل آلانتوئیک در 336 تخم مرغ جنین دار 11 روزه صورت پذیرفت. انکوباسیون در دمای 37 درجه سانتی گراد و رطوبت 60 درصد انجام گردید و در نهایت تخم مرغ ها به صورت تصادفی در گروه های 7 تایی تقسیم بندی شدند. مایع آمنیو آلانتوئیک و پرده های کوریوآلانتوئیک هر گروه هر 2 ساعت یکبار تا 96 ساعت نمونه برداری شدند و به روش HA و EID50 مورد ارزیابی قرار گرفتند. نتایج اخذ شده نشان دادند تیترهای HA و EID50پرده های کوریوآلانتوئیک به ترتیب در ساعت های 26 و 24 بعد از تلقیح به تیتر مناسب برای تولید آنتی ژن رسید. همچنین تیترهای HA و EID50 مایع آلانتوئیک به ترتیب در ساعت های 66-38 و 58-28 بعد از تلقیح در تیتر مناسب استحصال آنتی ژن قرار گرفت. بنابراین بهترین زمان برای برداشت ویروس آنفلوانزای پرندگان سویه H9N2 به منظور ساخت واکسن مابین ساعات 50 الی 60 بعد از تلقیح می باشد. بهینه سازی زمان برداشت ویروس در تولید واکسن می تواند منجر به افزایش میزان تولید، ایمنی زایی بیشتر و صرفه اقتصادی گردد.
    کلیدواژگان: رشد ویروس، انکوباسیون، آنفلوانزا، واکسن
  • فریبا گلچین فر، رسول مدنی، تارا امامی، سیدعلی پوربخش، عبدالحمید شوشتری صفحات 41-45
    آنفلوانزای مرغی (AI) یک بیماری بسیار مسری در طیور است که شیوع بیماری می تواند پیامدهای چشمگیری در اقتصاد و سلامت داشته باشد. جهت نظارت موثر بر بیماری ها، نیاز به سنجش سریع و حساس آنتی بادی علیه پروتئین ویروس آنفولانزا جهت تشخیص می باشد. به منظور ریشه کن کردن عفونت آنفلوانزای مرغی در طیور و اجرای واکسیناسیون با پیشنهاد سازمان های بین المللی بکارگیری استراتژی DIVA، امکان تمایزطیور آلوده از واکسینه شده را فراهم می کند. بدین منظور سیستمی بر اساس تشخیص آنتی بادی علیه پروتئین های غیر ساختاری (NS1) ویروس آنفولانزای پرندگان پیشنهاد شده است، تادر صورت بروز بیماری در گله ی واکسینه شده امکان تشخیص طیور آلوده وجود داشته باشد. در این پروژه از دو پپتید حفاظت شده پروتئین NS1 جهت طراحی یک روش الایزا بهره برداری شده است. این روش الایزا که بر مبنای پپتید می باشد، می تواند سرم آلوده و واکسینه شده را با توجه به تیتر آنتی بادی تفکیک نماید. تجربه حاضر نشان میدهد با تست الایزا بر پایه پپتید پروتئین NS1 می توان تیتر آنتی بادی در طیور واکسینه و آلوده را سنجش نمود. این یافته ها تفاوت قابل توجهی در تکرار ویروسی در جوجه ها را نشان می دهد که نتیجه تنوع در تولید آنتی بادی علیه NS1 است که به عنوان روش تشخیصی برای شناسایی، مبتنی بر پپتید می باشد. این نتایج روشی اختصاصی جهت تشخیص آنتی بادی را ارائه می دهد که ارزش تشخیصی برای صنایع مرغداری دارد.
    کلیدواژگان: آنفلوانزای مرغی، الایزا، NS1، پپتید، آلوده، واکسینه
  • مجید ولدان، احمدرضا جباری، محی الدین نیرومند، یحیی تهمتن، سید رضابنی هاشمی صفحات 47-55
    این تحقیق با هدف جداسازی و شناسایی عامل (عوامل) پنومونی پاستورلائی در گوسفند و بز در ایران، با استفاده از آزمون های باکتری شناسی و بیوشیمیائی انجام شد، تا جدایه ها، متعاقبا در تحقیقات بعدی تعیین هویت شده و در تولید واکسن پاستورلوز مورد استفاده قرار گیرند. بدین منظور در فاصله زمانی بهار 1387 تا بهار 1390 اقدام به نمونه گیری از دام های دارای علائم بالینی یا کالبدگشائی پاستورلوز از هشت استان بوشهر، اصفهان، کرمان، کهگیلویه و بویراحمد، فارس، قم، تهران و قزوین شد. نمونه ها بر حسب شرایط، متفاوت و در دام زنده شامل سواب بینی یا حلقی (از Palatine tonsil) یا نمونه خون از ورید وداج و در دام تلف یا ذبح شده، شامل نمونه ریه یا غدد لنفاوی نواحی فوقانی دستگاه تنفس بود. در مجموع 1454 نمونه (1120 نمونه از گوسفند و 334 نمونه از بز، 1084 نمونه از دام زنده و 370 نمونه از دام تلف یا ذبح شده) تحت آزمایش قرار گرفت. با توجه به نتایج آزمایشات، صرفا 54 نمونه (71/3%) پاستورلا و گونه تمامی آنها مولتوسیدا تشخیص داده شد.
    کلیدواژگان: جداسازی، شناسائی، پاستورلا مولتوسیدا
  • منیره خردادمهر، مهدی نام آوری، عزیزالله خداکرم تفتی صفحات 57-62
    نئوسپورا کنینوم (Neospora caninum) یک تک یاخته داخل سلولی اجباری و عامل بیماریزای مهم در گاو و سگ بشمار می رود. امروزه به طور گسترده ای از کشت سلولی به منظور جداسازی و تکثیر نئوسپورا کنینوم برای اهداف مختلفی استفاده می شود. در اکثر مطالعات، سلول Vero (با منشا سلول های کلیه میمون سبز آفریقایی) به عنوان بهترین سلول برای جداسازی و تکثیر نئوسپورا معرفی شده است. در این مطالعه حساسیت سلول های مختلف به این انگل و توان تکثیر آن در رده های مختلف سلولی مورد ارزیابی قرار گرفته است. بدین منظور در ابتدا تاکی زوئیت های انگل به منظور آداپته سازی به رده های سلولی SW742،Vero، TLI، MA-104، MDCk، McCoy افزوده شد و به مدت دو هفته کشت داده شد. سپس میزان یکسانی از تاکی زوئیت در مجاورت میزان یکسانی از هر کدام از رده های سلولی نامبرده قرار گرفت و تا زمان ایجاد CPE کامل در همه سلول ها، روزانه (به مدت 5 روز) 10 فیلد از فلاسک کشت سلولی در زیر میکروسکوپ اینورت مشاهده و تاکی زوئیت های رها شده در آن، شمارش شدند. در روز چهارم بیشترین میزان تاکی زوئیت های رها شده از سلول ها مشاهده شد و در روز پنج رو به کاهش رفت. میانگین تاکی زوئیت های رها شده از سلول ها در روز چهارم بعد از انکوباسیون، حساسیت خوبی را در سلول (24.2×104)Vero، (22.1×104)MA-104، (21.2×104) SW742 و (20.58×104) TLI نشان می دهد. در حالیکه سلول های (MDCK 8125) و (McCoy 9375) حساسیت و توان تکثیر کمی برای نئوسپورا از خود نشان دادند. با توجه با این نتایج سلول MA-104 و TLI و SW742 سلول های مناسبی جهت جداسازی و تکثیر نئوسپورا می باشد. در ضمن با توجه به این که سلول TLI (لنفوسیت ترانسفورم شده با تیلریا) یک سلول معلق می باشد کار کردن با این سلول به مراتب راحت تر، سریعتر و کم هزینه تر از سلول های چسبنده می باشد.
    کلیدواژگان: نئوسپورا کانینوم، Vero، TLI، MA، 104، SW742، McCoy، MDCK
  • سمیه بهرامی، آناهیتا رضایی، علیرضا البرزی صفحات 63-67
    حیوانات آزمایشگاهی نظیر موش صحرایی نقش مهمی را در انجام مطالعات و پیشرفت های بیومدیکال دارند. به همین دلیل مدیریت و بهداشت آنها حائز اهمیت می باشد. از آنجا که ممکن است نماتد تریکوسموئیدس کراسیکودا بر مطالعاتی که روی کلونی های موش صحرایی صورت می گیرد اختلال ایجاد کند. بنابر این بررسی میزان آلودگی و ضایعات پاتولوژیک ناشی از آن ضروری به نظر می رسد. در این مطالعه 275 موش صحرایی آسان کشته شده و مثانه های آنها جمع آوری گردید. در زیر استریومیکروسکوپ نماتدهای جمع آوری شده از هر مثانه شمارش و بر اساس کلیدهای تشخیصی شناسایی گردید. مقاطع بافتی جمع آوری و پس از طی مراحل روتین برای مطالعات هیستوپاتولوزیک آماده گردیدند. از 275 مثانه ی موش های صحرایی آزمایشگاهی مورد مطالعه 156 عدد (72/56%) آلوده به نماتد بودند. میزان آلودگی به نماتد در نرها 26/80 و در ماده ها 73/47 درصد بود. میزان آلودگی در دو جنس تفاوت آماری معنی داری داشت. دامنه تعداد کرم های جدا شده یک تا چهارده عدد و به طور متوسط سه نماتد در هر حیوان بود. در بررسی هیستوپاتولوژیک مقاطع متعدد انگل به همراه ضایعات مختلف در مثانه تشخیص داده شد. مقاطع انگل بر روی اپیتلیوم قرار داشتند یا این که درون اتاقک هایی که در بین سلول های اپیتلیوم تشکیل شده دیده شدند. همچنین تخم های نابالغ و جنین دار در درون بدن کرم ماده روئت شد. دیگر ضایعات شامل هیپرپلازی اپیتلیوم، زخم و التهاب ائوزینوفیلیک مثانه می باشند. با توجه به آلودگی موش های صحرایی به تریکوسوموئیدس کراسیکودا، مد نظر قرار دادن این موضوع در استفاده کردن از این حیوانات در تحقیقات لازم و ضروری بنظر می رسد.
    کلیدواژگان: موش صحرایی ویستار، تریکوسموئیدس کراسیکودا
  • رامین سیدیان، سید مهدی حسینی، مصطفی کمیاب، رضا منصوری، نیلوفر سیدیان، سمیه غریبی، عباس زارع میرک آبادی صفحات 69-76
    یکی از سمی ترین کژدم های موجود در مناطق جنوب غربی ایران همی اسکورپیوس لپتوروس متعلق به خانواده اسکورپیونیده است که موجب هموگلوبینوری و ضایعات پوستی می گردد. در این بررسی خواص همولیتیک آن در چند گونه مختلف حیوانی با توجه به میزان های متفاوت اسفنگو میلین غشایی انجام شده و نیز اثرات آن بر لیز پلاکت ها و عوامل انعقادی و در آخر تغییرات قدرت همولیتیک آن به دنبال مجاورت با پروتئازها وعوامل محیطی مرور شد. در کنار این بررسی قابلیت حفظ قدرت همولیتیک سم به دنبال تغییرات دما و اسیدیته جهت یافتن بهترین شرایط نگهداری سم انجام شد. خاصیت همولیتیک ونوم با انکوباسیون در دمای 100 درجه به مدت زمان 60 دقیقه به 26% رسیده و پاپایین با غلظت 10 واحد بین الملل در میلی لیتر توانست آن را به 38%تقلیل دهد درحالی که این خاصیت در محدوده اسیدیته 4 تا 11 ثابت باقی ماند. قابلیت همولیتیک ونوم بر اسب و گوسفند کمترین و بیشترین میزان بود (61 در مقابل 100درصد). کلسیم و منیزیم میزان همولیز را به شدت افزایش داده و شلاتورها ان را کاهش دادند. در دمای صد درجه و اسیدیته معادل 1 و انکوباسیون با پاپایین هیچ گونه تاثیر همولیتیک مشاهده نشد. سم تاثیرات معنی دار بر آزمونهای انعقادی داشت ولی ما لیزپلاکت را با انکوباسیون مشاهده نکردیم. به نظر می رسد که این سم به علت تقویت تاثیراتش در کنار منیزیم و کلسیم یک متالوپروتئیناز بوده و باعث ایجاد سلول های روحی به علت خروج هموگلوبین در بررسی ما شده است.
    کلیدواژگان: همی اسکورپیوس لپتوروس، پایداری، همولیز، سلول های روحی، متالوآنزیم
  • غلامرضا معتمدی، مجتبی محرمی، حبیب الله پایکاری، محمد اسلام پناه، علی عمرانی نوا صفحات 77-81
    استفاده از حیوانات آزمایشگاهی در تحقیقات و آموزش علوم زیستی بسیار با اهمیت می باشد اما شواهد مستندی وجود دارد که عفونت در حیوانات آزمایشگاهی می تواند در نتایج بیولوژی تاثیر گذارد. تمامی عفونت آشکار یا پنهان، به احتمال زیاد باعث تغییر پذیری زیستی می شوند. لذا بررسی انگلهای داخلی خوکچه هندی و خرگوش در یک سیستم تحقیق و پرورش حیوانات آزمایشگاهی جهت یافتن آلودگی های انگلی و بکارگیری روش های استاندارد توصیه شده جهت پیشگیری و کنترل آنها در نظر گرفته شد. تعداد 105 سر خوکچه هندی (از 1500 سر) و 87 سر خرگوش (از 700 سر) به صورت تصادفی از یک مرکز پرورش و نگهداری حیوانات آزمایشگاهی انتخاب شدند. نمونه ها بین اسفند 1389 لغایت اردیبهشت 1391 جمع آوری و با روش های آزمایش شناورسازی (فلوتاسیون) مدفوع و کالبدگشایی بررسی شدند. در خرگوش تک یاخته) 21.8%= Eimeria spp. (و نماتود (Passalurus ambiguus = 6.9%) و در خوکچه هندی نیز تک یاخته =11.4%) (Balantidium coli و نماتود= 24.7%) Paraspidodera uncinata (و مشاهده گردیدند. در این گروه از حیوانات آزمایشگاهی هیچگونه سستود و یا ترماتودی مشاهده نگردید.
    کلیدواژگان: خرگوش، خوکچه هندی، انگل های دستگاه گوارش
  • فاطمه عابدینی، مجتبی محرمی، پگاه شمس، محمد اسلام پناه، حمیده عادلدوست، محمد ابراهیمی، اسد وزیری، فاطمه طالب لو صفحات 83-88
    با وجود تحقیقات مختلف، درک علت و پیشرفت سرطان پستان ناتمام مانده است. تحقیقات بیشتر روی ویروس های مرتبط با سرطان پستان برای کمک به محققین جهت درک بهتر پیشرفت های سرطان پستان لازم است. اخیرا سیتومگالوویروس انسانی به عنوان یک عامل خطر برای ابتلا به سرطان پستان گزارش شده است. هدف از این مطالعه این است که بدانیم آیا سرطان پستان بوسیله سیتومگالوویروس ایجاد می شود یا خیر؟ در این تحقیقات هفده نمونه از موش های سویه RAZI/A که بطور خودبخود دچار سرطان پستان شده اند از بخش حیوانات آزمایشگاهی جمع آوری شده است. آزمایشات هیستوپاتولوژی و واکنش زنجیره ای پلیمراز بر روی نمونه های بافت پستان انجام شده است. تعداد 17 نمونه از بافت پستان موشهای سالم و 17 نمونه از بافتهای توموری ن موش جهت انجام بررسی های هیستوپاتولوژی در فرمالین فیکس شده است. نتایج هیستوپاتولوژی تشخیص آدنوکارسینوما (type B) را در نمونه های تومور پستانی موشها نشان داده است. جهت تشخیص ویروس سایتومگالو موشی از پلاسمید pUC57-MCK-2 استفاده شده است. داده های ما نشان داد که تفاوت قابل ملاحظه ای بین موش های شاهد و مبتلا به تومورهای خودبخود (طبیعی) پستان به وسیله تست آماری Chi-Square (Value: 17.000b and P=0.000) وجود دارد. تحقیقات بیشتری لازم است تا اثبات شود که سیتومگالوویروس در بروز سرطان پستان نقش دارد.
    کلیدواژگان: سیتومگالو ویروس موش، سرطان پستان، سیتومگالو ویروس انسان، ژن MCK، 2
  • یحیی تهمتن، معصومه حیاتی، محمد مهدی نام آوری صفحات 89-93
    شیوع پاستورلوز در گوسفند و بز در استان فارس، ایران مورد بررسی قرار گرفت. پاستورلوز، یک بیماری نگران کننده در منطقه مورد مطالعه است. در طول مدت یک سال از 1389 تا 1390 نمونه از حیوانات مشکوک گرفته و به آزمایشگاه منتقل شد. با توجه به تستهای بیوشیمیائی در 6/16٪ از حیوانات باکتری پاستورلا مالتوسیدا تشخیص داده شد. میزان شیوع زیادتر پاستورلا مالتوسیدا در جنوب استان جایی که منطقه گرم بود به دست آمد. مدت زمان مرگ موش در بین جدایه ها بین 12-18 و 24-19 ساعت بود. تنها سروتیپ کپسولی A در بین جدایه تشخیص داده شد که با یافته های دیگران مطابقت دارد. آنها نشان دادند سروتیپ سویه A در مناطق آب و هوایی نیمه گرمسیری و گرمسیری غالب است.
    کلیدواژگان: پاستورلا، واکنش زنجیره ای پلیمراز، سمی، نوع، ایران
  • محمد جواد قراگزلو، محسن نوری، وحید پورحاجتی صفحات 95-97
    عفونت توام کریپتوسپوریدیایی و باکتریایی در یک طوطی استرالیایی کوچک مبتلا به علائم و نشانه های بالینی عفونت دستگاه تنفسی و سپتی سمی گزارش می شود. در آزمایش ریزبینی علاوه بر حضور کلونی های باکتریایی در پیرامون پارابرونشیول شماری از اجرام گرد تا بیضی کریپتوسپوریدیایی با ندازه قطر 5-2 میکرون که برروی سلول های اپی تلیال پارابرونشیول قرار گرفته بودند در بافت ریه یافت شدند. با احتمال زیاد تصور می شود که کریپتوسپوریدیوم بایلی (C. baileyi) علت کریپتوسپوریدیوزیس تنفسی در این پرنده باشد.
    کلیدواژگان: طوطی استرالیایی کوچک، دستگاه تنفسی، کریپتوسپوریدیوم، باکتری
|
  • S.A. Pourbakhsh Pages 1-14
    Detection of Mycoplasma synoviae (MS) by culture and polymerase chain reaction (PCR) has been reported from commercial chicken farms in different provinces of Iran. In some reports the phylogenetic analysis of MS isolates based on 16S rRNA and variable lipoprotein hemagglutinin (vlhA) genes have been carried out. The PCR product containing partial 16S rRNA genes of Iranain isolates was sequenced، and compared with 16S rRNA gene of MS sequences which were available in GenBank. Variations، polymorphisms، and differences between nucleotides of all isolates were observed. Phylogenetic analysis of these sequences showed that all MS isolates from Iran were most closely related to sequences of MS from Brazil. Sequence analysis of the N-terminal end of the hemagglutinin encoding gene vlhA were also used as an alternative for the detection and initial typing of field strains of MS in commercial poultry. The results showed that there was a complete concordance between all Iranian isolates nucleotide sequence and the 5́-vlhA region sequence remained unchanged in all MS isolates and demonstrated differentiation between Iranian isolates and live commercial MS-H vaccine strain. More recently، the single-copy domain of the conserved region of vlhA gene in MS was sequenced، analyzed and verified to type MS field isolates in Iran and live vaccine MS-H strain. In addition، a restriction fragment length polymorphism (RFLP) method was established based on single nucleotide polymorphism that existed in all field isolates of Iran to differentiate between these field isolates and MS-H. This PCR-RFLP method allowed differentiating all MS field isolates from the vaccine strain.
    Keywords: Mycoplasma synoviae, 16S rRNA sequences, vlhA gene, Phylogenetic analysis, RFLP, commercial chickens, Iran
  • Z. Bozorgkhoo, R. Pilehchian Langroudi, P. Khaki, A.R. Jabbari, S. Moradi Bidhendi, M. Moosawi Shoshtari Pages 15-20

    Clostridium septicum a Gram positive anaerobic bacterium produces several toxins including alpha، beta، gamma and delta. C. septicum alpha toxin is lethal and is responsible for a serious disease known as gas gangrene. The aim of the present study was to molecular cloning and sequencing of C. septicum vaccine strain alpha toxin gene. Genomic DNA was extracted using standard phenol and chloroform extraction method، and the target gene was amplified through PCR by specific primers. Quality and quantity of PCR product was evaluated using agarose gel electrophoresis and confirmed with spectrophotometry. The PCR product was purified and was ligated in pJET1. 2blunt cloning vector and was used for E. coli/TOP10 competent cells transformation. pJETαsep recombinant plasmid was purified and sequenced using universal primers. Sequencing and BLAST analysis of csa showed over 99% identity to other previously deposited csa in the GenBank. The csa sequence was deposited in the GenBank under accession number JN793989. E. coli/TOP10/pJETαsep as a recombinant bacterium could be used for purifying of recombinant csa gene and its expression in the suitable prokaryotic hosts.

    Keywords: Clostridium septicum, vaccine strain, alpha toxin gene (csa), cloning, sequencing
  • A. Nabinejad, H. Mahravani, V. Noaman, N. Askarani Pages 21-26
    It is about 50 years that FMD affected the ruminants of Isfahan. Last outbreaks of FMD were happened at 2005 even vaccinated animals، so in current work using RT-PCR، sequencing and regression «r» values، the isolated strains in Isfahan were identified. The aim of this study was molecular epidemiology of FMDV in Isfahan province as the central part of Iran in 2006-2009. According to the result، a highly pathogen A05 strain was isolated from west (Najafabad city) about 2 months after the entrance of this virus to Iran through the west and north west margins toward central part and then distributed around 10 cities of Isfahan province. Here it is obvious that the A05 strain of Isfahan just showed 1% difference with A05IR (vaccine strain)، in which for A22 were 65 %. Also based on the alignment of 600 bp of 3΄ end of the VP1 sequences of isolated type O comparing with representative of type O Shabestar vaccine strain and the other provinces of Iran، the Isfahan O isolate was 3% distinct from O shabestar vaccine strain. In a random «r» value detection of west isolate strain (A /Najafabad/Isfahan/Iran/ 05) against A87IR were 0. 35 and against A05IR were 0. 73; For O strain، randomly «r» value of center isolate (O/Isfahan/Isfahan/Iran) obtained against Iranian O vaccine strain (O Shabestar) were 0. 76 and with O 967 (Panasia) were 0. 88. Regarding to the conclusion، the FMD lived vaccine for Isfahan was improved with A05/Ir FMDV by Razi Vaccine and Serum Research Institute (RVSRI).
    Keywords: Foot, and, Mouth disease, Molecular epidemiology, Isfahan, \r\ value
  • N. Vakili, B. Mosallanejad, R. Avizeh, M.R. Seyfiabad Shapouri, M. Pourmahdi Pages 27-33

    Canine parvovirus type 2 (CPV-2) is one of the most common viruses responsible for acute hemorrhagic enteritis in dogs. A rapid and accurate diagnosis of CPV-2 infection is especially important in kennels in order to isolate infected dogs. The aim of the present study was to compare two laboratory tests i. e.، Polymerase Change Reaction (PCR) and Immunochromatography assay (ICA) most commonly used for the diagnosis of canine parvovirus infection in companion dogs. Fecal samples were collected from fifty five dogs (50=hemorrhagic diarrheic and 5= healthy) between 2011 and 2012 in Ahvaz district، southwest of Iran. The studied dogs were divided into two age groups (<6 months، and>6 months)، four different breeds (Terriers، German shepherds، Doberman pinschers and Mixed) and based on environment into two groups (open and close) also. All samples were tested by ICA and PCR methods and the results were analyzed by using Kappa test، Mc Nemar and Chi-square analysis. ICA and PCR were able to detect CPV-2 antigen or nucleic acid in 33 and 50 of the hemorrhagic diarrheic samples، respectively. Samples of healthy dogs were negative by both tests. Although sensitivity of ICA compared with PCR method was determined to be 66% (PCR more sensitive than ICA)، nevertheless statistical analysis showed that the difference between two techniques were not significant (P>0. 05). Kappa test was obtained 0. 38 between two techniques. CBC showed that most infected dogs had leucopenia، lymphopenia and neutropenia also (82%; 41 out of 50 samples). Obtained results of this survey showed that accurate standardization of laboratory tests is required to provide veterinarian with an effective tool for a precise etiological diagnosis of hemorrhagic gastroenteritis due to CPV infection. Although Immunochromatography is a simple and quick method for screening of fecal samples of dogs suspected of CPV infection، but PCR is more sensitive and reliable than ICA. Moreover، the subtypes of the virus determined by PCR test after verifying parvovirus. In this test 48 samples were CPV-2b and another 2 samples were CPV-2a. Our results showed that CPV-2b was the predominant subtype.

    Keywords: parvovirus, Polymerase Chain Reaction (PCR), Immunochromatography assay (ICA), dog
  • R. Ghadimipour, I. Ghadimipour, A. Ameghi, S. Masoudi, S. Sedigh-Eteghad, M.M. Ebrahimi Pages 35-39
    Knowledge of virus and replication kinetic is one of the most important issues in the vaccine production. The present study aimed to evaluate the best harvesting time of H9N2 avian influenza virus (AIV) vaccine strain inoculated in specific pathogen free (SPF) embryonated chicken eggs (ECE) s. For this purpose، 10-5 dilution of AIV (A/Chicken/Iran/99/H9N2) was inoculated into 336، 11-day old ECEs at the rate of 0. 1 ml/ECE via intera-allantoic. Amnio-allantoic fluid (AAF) and chorioalantoic membranes were collected at 2 hours intervals up to 96 post inoculations from 7 eggs in each trial. The presence of virus in the harvested suspensions was evaluated by Hemagglutination assay (HA) and Egg infective dose 50 (EID50) assays. Our results showed that، the best virus harvesting time for vaccine production is between 50 – 60 hours post inoculation (hpi) in ECEs. This finding may provide possibility of the sufficient and increasing rate of production، immunogenicity and economic factors in H9N2 influenza vaccine production.
    Keywords: Virus growth, Incubation, Influenza, Vaccine
  • F. Golchinfar, R. Madani, T. Emami, S.A. Pourbakhsh, A.H. Shoushtary Pages 41-45
    Avian influenza (AI) is a highly contagious disease in poultry and outbreaks can have dramatic economic and health implications. For effective disease surveillance، rapid and sensitive assays are needed to detect antibodies against AI virus (AIV) proteins. In order to support eradication efforts of avian influenza (AI) infections in poultry، the implementation of “DIVA” vaccination strategies، enabling the Differentiation of infected from Vaccinated Animals have been recommended by international organizations. A system، based on the detection of antibodies to the Non-Structural (NS1) protein of AI has been proposed to enable the detection of field exposure in vaccinated flocks، and through this detection، infected flocks may be properly managed. In this project we have used two conserved peptides of NS1 protein to develop a peptide based ELISA method. This ELISA could screen the infected and vaccinated sera due to their titer of antibody. Following experimentally infection and vaccinate of chickens، antibodies to the peptides of the NS1 protein were detected by enzyme-linked immuno sorbent assay (ELISA). These findings indicate that there is a significant difference in the viral replication in chickens، resulting in a variation in the production of antibodies to NS1، as detected by the peptide- based ELISA used. These results demonstrate the specific ELISA for anti NS1 antibodies that have diagnostic value for the poultry industries.
    Keywords: Avian influenza, ELISA, NS1, Peptide, infected, vaccinated
  • M. Valadan, A.R. Jabbari, M. Niroumand, Y. Tahamtan, S.R. Bani Hashemi Pages 47-55
    This study has been carried out with the objective of isolation and identification of agent (s) of pasteurella pneumonia in sheep and goat in Iran using bacteriological and biochemical assays to be identified in the pursuant researches to be used in pasteurellosis vaccine production. To accomplish this objective، samples were gathered from areas suspicious to pasteurellosis infection and industrial abbatoirs according to clinical and autopsy symptoms from eight provinces of Bushehr، Esfahan، Kerman، Kohgilooyeh & Boyr Ahmad، Fars، Qom، Tehran and Qazvin in a period from spring 2008 to spring 2011. Samples were different in sort due to the existent condition but generally were comprised of palatine tonsil swabs or blood samples taken from jugular vein in live animals and lungs or upper respiratory tract lymph glands in dead or slaughtered animals. Totally، 1454 samples (1120 samples of sheep، 334 samples of goat composed if 1084 samples of live animals and 370 samples of dead or slaughterd animals) were tested. Considering results obtained from assays، only 54 samples (3. 71%) were assessed as being pasteurella، genus of which was totally identified as multocida.
    Keywords: Isolation, Identification, Pasteurella multocida
  • M. Khordadmehr, M. Namavari, A. Khodakaram-Tafti Pages 57-62
    Neospora caninum is a coccidian protozoan parasite which is a major cause of bovine abortions and neonatal mortality in cattle، sheep، goat and horse. Occasionally، cultured cells are used for isolation and multiplication of the agent in vitro with several purposes. In this study the tachyzoite yields of N. caninum were compared in various cell cultures as the host cell lines. Among the cell cultures tested، two presented good susceptibility to the agent: cell lines Vero and MA-104. SW742 and TLI (in vitro suspension culture of lymphoid cells infected with Theileria lestoquardi) showed moderate sensitivity. No viable tachyzoite were detected in the culture of MDCK and McCoy cell lines. These results demonstrate that MA-104 and SW742 cells present adequate susceptibility to N. caninum compared to Vero cells، which have been largely used to multiply the parasite in vitro. Moreover، these have easy manipulation، fast multiplication and relatively low nutritional requirements. In addition، the result of this study showed that TLI cell line as a suspension cell culture is susceptible to Nc-1 tachyzoites infection and could be used as an alternative host cell line for tachyzoites culture in vitro studies.
    Keywords: Neospora caninum, Vero, TLI, MA, 104, SW742, McCoy, MDCK
  • S. Bahrami, A. Rezaei, A.R. Alborzi Pages 63-67
    Laboratory animals، including rats، play an important role in biomedical research and advances. The human care and management of these animals is an ongoing concern. Since، Trichosomoides infections in rat colonies can interfere with research protocols it is important to know rate of infection and pathology of the infection in the animals used in experimental studies. 275 rats were eviscerated and urinary bladders were collected. The numbers of collected nematodes from each of the urinary bladders were counted under a stereomicroscope and identified on the basis of morphological criteria. Tissue sections were collected and processed routinely for histopathological studies. Out of 275 urinary bladder of adult laboratory Wistar rats examined، 156 (56. 72%) were infected with the nematode، Trichosomoides crassicauda. There was significant difference (P<0. 05) in infection in female and male rats، with rate of 47. 73% and 80. 26%، respectively. The number of nematodes collected from each infected rats ranged from one to fourteen with an average of three nematodes per animal. Histopathological evaluation revealed multiple parasites with variable degree of lesions in transitional epithelium of urinary bladder. Parasites were lying upon the epithelium or located in chambers between epithelial cells. Also immature and embryonated eggs were seen in female worms. Other lesions were as follow: Hyperplasia of epithelium، erosions، ulcers and eosinophilic cystitis. This study reports the data on the presence of helminth parasites in laboratory rat colonies، and suggests paying attention on controlling the sanitary conditions of animal houses.
    Keywords: Wistar rats, Trichosomoides crassicauda
  • R. Seyedian, S.M. Hoseiny, M. Kamyab, R. Mansury, N. Seyedian, S. Gharibi, A. Zare Mirakabadi Pages 69-76
    Hemiscorpius lepturus belonging to Hemiscorpiidae family is the most venomous of all types of scorpion existing in south west of Iran causing hemoglobinuria and dermal lesions by envenomation. We compare the hemolytic pattern upon time in different domestic animals upon time according to their different sphingomyelin contents. In addition other in vitro hematologic parameters، platelet lysis، coagulation changes and finally preservative factors (temperature، pH، protases) are discussed. The hemolytic activity was inhibited significantly by heating at 100 °C for 60 minutes (26%) and reached 38% via incubation with papain (10U/ml) while retained over a pH range of 4-11. Horses and sheep have the lower (61%) and upper (100%) rate of hemolysis. Calcium and magnesium ions could increase rate of hemolysis and EDTA solution had significantly decresing effect. The venom significantly changed in vitro coagulation factors (PT and APTT) from base line levels and had no effect on platelet lysis. It seems that our venom belongs to metalloproteinases due to potentiation effects of bivalent cations (calcium and magnesium) and ghost cell formation in our study indicatiing hemoglobin efflux.
    Keywords: Hemiscorpius lepturus, Stability Hemolysis, Ghost cell, Metalloenzyme
  • G. Motamedi, M. Moharami, H. Paykari, M. Eslampanah, A. Omraninava Pages 77-81
    There is documented evidence that infection in laboratory animals can often influence the outcome of experiments. All infections، apparent or inapparent، are likely to increase biological variability. As a research project concerning the diversity and distribution of parasites of rabbit and guinea pig in a conventional laboratory animal house، about 87 rabbits (from 700) and 105 guinea pigs (from 1500) were selected randomly from a Research، Production & Breeding of Laboratory Animals Department. Samples were collected between 19. 02. 2010 and 20. 05. 2011. The samples and animals were examined by dissection and flotation methods. In this study only one species of nematodes (Passalorus ambiguus: 6. 9%); one species of protozoa (Eimeria spp.: 21. 8%) in rabbits and one species of nematodes (Paraspidodera Uncinata: 24. 7%); one species of protozoa (Balantidium coli: 11. 4%) in guinea pigs were identified. However، there was not any cestodes or trematodes identified from this group of laboratory animals.
    Keywords: Gastrointestinal parasites, Rabbit, Guinea pig
  • F. Abedini, M. Moharrami, P. Shams, M. Eslampanah, H. Adeldost, M. Ebrahimi, A. Vaziri, F. Talebloo Pages 83-88
    Despite a lot of research، the etiology and progression of breast cancer remain incompletely understood. Recently، human cytomegalovirus (HCMV) was reported as a risk factor for breast cancer. The aim of this study was to know whether breast cancer could be caused by cytomegalovirus or not? In this experiment seventeen samples of RAZI/A mice with spontaneous breast cancer were being gathered from laboratory animals department. Histopathology and polymerase chain reaction (PCR) tests were done on breast tissue samples. Formalin-fixed tissue specimens were obtained from mouse normal breast tissues (n: 17) and mouse mammary tumors (n: 17). Detection of mouse cytomegalovirus was done by the pUC57-MCK-2 plasmid. Our histopathology data showed Adenocarcinoma type B in mouse with mammary tumors. There was a significant difference between mice with spontaneous breast cancer and control by Pearson Chi-Square (Value: 17. 000b and P=0. 000). More research will be needed to determine the effect of cytomegalovirus on breast cancer.
    Keywords: Mouse Cytomegalovirus, Breast Cancer, Human cytomegalovirus, MCK, 2 Gene
  • Y. Tahamtan, M. Hayati, M.M. Namavari Pages 89-93
    During one year period from 2010 to 2011 the samples from pneumonic animals were taken and transported to the laboratory. Pasteurella multocida were identified in 16. 6% of animal by biochemical test. The high incidence of P. multocida was obtained in the south of Fars province، where the area was warm region. The Mean Death Time between the isolates was 12-18 and 19-24 hours. Only the capsular type A was identified in all the isolates and it is agreement with the finding by others، they indicated type A is the dominant type of Pasteurella multocia in tropical and sub tropical climate.
    Keywords: Pasteurella, PCR, Toxigenic, Type, Iran
  • M.J. Gharagozlou, M. Nouri, V. Pourhajati Pages 95-97
    Cryptosporial and bacterial co-infection is reported in a budgerigar with clinical manifestations of septicemia and respiratory tract infection. Microscopically large number of round to oval 2-5μm cryptosporidial organisms were found to be lodged on the parabronchial epithelial cells of the respiratory tract. The bacterial colonies were seen around the parabronchial spaces of the lung tissue. It is suggested that the C. baileyi is the most likely cryptosporidium species which caused respiratory cryptosporidiosis in the budgerigar.
    Keywords: budgerigar, respiratory, cryptosporidium, bacteria