فهرست مطالب
مجله سلول و بافت
سال هشتم شماره 4 (زمستان 1396)
- تاریخ انتشار: 1396/11/20
- تعداد عناوین: 8
-
-
صفحات 303-313هدفدر این مطالعه، ترکیبی از روش آنزیمی و اکسپلنت را برای جداسازی و کشت سلول های بنیادی چربی مورد استفاده قرار گرفت.مواد و روش هابافت چربی ناحیه ی شکم از رت های نر نژاد ویستار جدا شد. بافت ها به قطعات کوچک (mm2≈( تقسیم شدند، سپس آنزیم Trypsin –EDTA با غلظت 25/0 درصد به بافت ها افزوده شد و بهدنبال آن بهمدت 30 دقیقه در دمای 37 درجه سانتی گراد در انکوباتور شیکردار قرار داده شدند. سپس بافت تیمار شده با آنزیم سانتریفیوژ شده و قطعات شناور کشت داده شدند. آنالیزهای آماری مربوط به تعداد سلول ها با استفاده از نرم افزار GraphPad Prismv6 مورد بررسی قرار گرفت.نتایجنتایج نشان داد که جمعیت سلول های بنیادی چربی جداسازی شده توسط این روش ترکیبی، تحت تاثیر تنش کمتری قرار خواهند گرفت و جمعیت سلولی همگن و مشابهی را از لحاظ ظاهری و ریخت شناسی نشان خواهند داد و نیز آنالیز فلوسایتومتری مارکر های سطحی نشان داد که این سلول ها برای CD73، CD105، CD44 و CD90 مثبت و برای CD34، CD45 و CD11b منفی بودندنتیجه گیریدر این مطالعه نشان داده شد که سلول های بنیادی مشتق از بافت چربی رت می تواند با روش جدید اکسپلنت_آنزیمی جداسازی شوند که این روش، یک روش کشت سلولی با قابلیت تکرارپذیری بالا و بسیار به صرفه از لحاظ اقتصادی برای کاربردهای کلینیکی می باشد.کلیدواژگان: سلول های بنیادی مزانشیمی، بافت چربی، اکسپلنت، رت
-
صفحات 314-321هدفدر این مطالعه اثرات ویتامین D3 بر غلظت کل پروتئین و بیان پروتئین اصلی میلین (MBP) در جسم پینهای مغز موشهای دمیلینه شده توسط کاپریزون تحقیق شد.
مواد و روشها: جهت القا دمیلینه شدن، موشها برای پنج هفته با کاپریزون تیمار شدند. سپس موشها به سه گروه تقسیم شدند. به اولین گروه از طریق داخل صفاقی ویتامین D3 به میزان 5 میکروگرم بر کیلوگرم وزن بدن بهطور روزانه تزریق شد. به گروه دوم (گروه شم) بافر فسفات سالین و به گروه سوم یا گروه کنترل هیچ تزریقی انجام نشد. بعد ازپنج هفته موشها کشته شده و غلظت کل پروتئین و بیان MBP توسط وسترن بلاتینگ بررسی شد.نتایجهیچ تغییری در غلظت کل پروتئین در جسم پینهای موشهای گروه تزریق شده با ویتامین D3 در مقایسه با گروه شم و کنترل مشاهده نشد. همچنین این نتایج نشان داد که بیان MBP در جسم پینهای مغز موشهای تزریق شده با ویتامین D3 بهطور قابل ملاحظهای بیشتر از آن در گروه کنترل و شم است.
نتیجه گیری: نتیجه گیری میشود که ویتامین D3 باعث افزایش بیان MBP در جسم پینه ای مغز موشهای دمیلینه شده میشود. همچنین پیشنهاد میشود که ویتامین D3 با افزایش بیان MBP ممکن است در فرایند ایجاد دوباره میلین نقش داشته باشد.کلیدواژگان: ویتامین D، میلین سازی، پروتئین اصلی میلین، جسم پینه ای، کاپریزون -
صفحات 322-331هدفهدف از این مطالعه بررسی اثر Resveratrol (RSV) بهعنوان یک پلیفنول طبیعی دارای اثرات بیولوژیکی مختلف، بر تکثیر و توانایی تشکیل کلنی سلول های بنیادی جنینی انسانی (hESCs)منفرد شده می باشد.مواد و روش هادر مطالعه ی حاضر از رده ی hESCsبهنام RH6 استفاده شد. سلول ها بر ماتریژل و در محیط غنی شده ی اختصاصی hESCs کشت شدند. میزان تکثیر سلولی با استفاده از روش شمارش سلولی و تکنیک الحاقی BrdU سنجیده شد.
میزان بیان عوامل دخیل در تشکیل کلنی (E-cadherinو (β-catenin با استفاده از وسترن بلات مورد ارزیابی قرار گرفت و مکان قرار گیری β-catenin نیز با رنگ آمیزی ایمنوسیتوشیمی بررسی شد.نتایجنتایج نشان دادند که RSV بدون تاثیر بر توانایی تشکیل کلنی موجب پیشبرد تکثیر hESCs منفرد شده می شود.نتیجه گیریبا توجه به افزایش میزان تکثیر hESCs در حضور RSV می توان این ترکیب را بهعنوان مکمل جدیدی برای محیط کشت hESCs معرفی نمود.کلیدواژگان: سلول های بنیادی جنینی انسانی، تشکیل کلنی، تکثیر، Resveratrol -
صفحات 332-353فریز موثرترین روش نگهداری طولانی مدت اسپرم است. روشهای متعددی برای فریز – ذوب مایع منی وجود دارد که ممکن است هر کدام آسیبهایی را به عملکرد اسپرم، حیات اسپرم و در نهایت کیفیت و توانایی باروری وارد نماید. علاوه بر اینکه درصد حیات و تحرک اسپرم پس از فریز – ذوب کاهش مییابد، درصد آسیب DNA نیز بهدلیل سطح بالای استرس اکسیداتیو افزایش مییابد. برای به حداقل رساندن این آسیب، ما باید بینش خود را در رابطه با روشهای مختلف فریز، مکملهای آنتی اکسیدانت و حفظ فریز، افزایش دهیم تا بتوان غشای اسپرم را در طی فریز حفظ نمود و از طریق این درک، کارایی این روشها را بهبود بخشید. در این مقاله مروری، در رابطه با اصول فریز، انواع روشهای فریز-ذوب، مزایا و معایب هر یک از این روشها، اثرات انجماد بر روی پارامترهای اسپرم، نتایج بالینی و در نهایت نقش آنتی اکسیدانتها در حفظ یکپارچگی اسپرم در طی فریز-ذوب بحث شد. برای این مقاله مروری از اطلاعات و داده های مرتبط و حاصل از جستجوی پایگاه داده PubMed و موتور جستجوگر Google Scholar، بین سال های 1966 تا 2016، استفاده شد.کلیدواژگان: فریز اسپرم، ازت مایع، آسیبDNA، باروری، ترکیبات محیط فریز
-
صفحات 354-363هدفدر این مطالعه تاثیر ژنوتوکسیک امواج الکترومغناطیس در طول موج مشابه امواج تلفن همراه بهعنوان یک منبع رایج در تولید این امواج بههمراه یک آنیوژن شناخته شده (وین بلاستین) در سلولهای در محیط کشت بررسی شد.
مواد و روشها: سلول های L929 بهمدت 2 ساعت تحت تاثیر میدان الکترومغناطیس بهدو شکل ثابت و منقطع با طول موج تقریبی MGh900 در حضور و عدم حضور ng/ml 5/1 وین بلاستین قرار گرفتند. بررسی صدمات کروموزومی با استفاده از آزمون میکرونوکلئوس در سلولهای دو هسته ای و توانایی زنده ماندن سلولها در تمامی تیمارها توسط آزمون MTT انجام شد.نتایجفراوانی میکرونوکلئوس در سلولهای تحت تاثیر میدان الکترومغناطیسی منقطع و پیوسته در مقایسه با میدان خاموش و گروه شاهد افزایش معنی داری را نشان داد. تیمار همزمان سلولها با وین بلاستین باعث افزایش بیشتر این فراوانی نگردید. بررسی ها نشان داد که در هیچ یک از گروه های تیمارشده، کاهش قدرت زندگی رخ نداده است.نتیجه گیرینتایج بیانگر توانایی میدان الکترومغناطیس، بهخصوص بهصورت منقطع، در ایجاد صدمات کروموزومی است. تیمار همزمان میدان الکترومغناطیس و وین بلاستین، باعث افزایش بیشتر این صدمات نشد.کلیدواژگان: آزمون میکرونوکلئوس در سلول های دو هستهای، امواج الکترومغناطیس، وین بلاستین، سلول L929 -
صفحات 364-373هدفهدف از این مطالعه بررسی اثرات سمیت سلولی داروی اگزالی پلاتین بر رده سلولی سرطان کولون (HT29) و آنالیز بیان ژن های آپوپتوزی کاسپاز 3 و 9 می باشد.
مواد و روشها: در این مطالعه، ابتدا سمیت سلولی داروی اگزالی پلاتین بر روی رده سلولی HT29 با استفاده از روش MTT در غلظتهای 100، 50، 25، 5/12، 25/6 و 125/3 میکروگرم در میلی لیتر بررسی شد و غلظت 50 درصد کشندگی (IC50) آن تعیین شد. پس از تیمار سلولها با غلظت IC50، RNA سلولها استخراج شده و به cDNA تبدیل شد و میزان بیان ژنهای آپوپتوزیسی کاسپاز 3 و 9 نسبت به ژن مرجع β-actin با استفاده از روش Real Time PCR بررسی شد.نتایجتیمار سلولها در غلظت های مختلف نشان داد که داروی اگزالی پلاتین در غلظت 100 میکروگرم در میلیلیتر بیشترین اثر سمیت سلولی را دارد که از لحاظ آماری معنیدار میباشد و میزان IC50 μg/ml 6 محاسبه شد. همچنین، نسبت بیان ژنهای آپوپتوزیسی کاسپاز 3 و 9 به ژن مرجع در رده سلولی HT29 تیمار شده با اگزالی پلاتین بهترتیب بهمیزان (001/0p<) 72/0±69/2 و (001/0p<) 56/0±26/3 افزایش یافت.نتیجه گیریبا توجه به سمیت سلولی و القای فرایند آپوپتوزیس در رده سلولی سرطان کولون توسط داروی اگزالی پلاتین، میتوان نتیجه گیری کرد که داروی اگزالی پلاتین گزینه مناسب جهت درمان سرطان کولون میباشد.کلیدواژگان: اگزالی پلاتین، سرطان کولون، سمیت سلولی، آپوپتوزیس -
صفحات 374-386هدفهدف از این پژوهش، بررسی تاثیر افزودن سطوح متفاوت روی به رقیق کننده ی منی بر ویژگی های حیاتی اسپرم پس از انجماد-ذوب در قوچ بود.
مواد و روشها: اسپرم گیری از پنج راس قوچ نژاد فراهانی (با میانگین سنی 5/0±3 سال و وزن 5±60 کیلوگرم)، هفته ای دو بار انجام شد. منی از قوچ ها توسط واژن مصنوعی جمع آوری شده و سپس برای جلوگیری از اثرات فردی هر قوچ، نمونه ها با هم مخلوط شدند. نمونه های اسپرم (در پنج تکرار) بهطور تصادفی به چهار گروه (سطوح صفر، 50، 100 و 150 میکرومول سولفات روی) تقسیم شدند، که بههر فالکون مقدار رقیق کننده ی مورد نظر افزوده شد و با سولفات روی و تریس مخلوط شده و جهت انجام مراحل فریز آماده سازی شدند. نمونه ها در پایوت های نیم میلی لیتری و در شرایط هم دما و دمای 37 درجه ی سانتی گراد با نمونه ها نگهداری و در این شرایط پر و منجمد شدند. نمونه های اسپرم بعد از یخگشایی از نظر ویژگی های: تحرک، تحرک پیشرونده، زنده مانی (تست ائوزین– نگروزین)، یکپارچگی غشای اسپرم ( هاست) و ریخت شناسی اسپرم ها (تست هانکوک) بررسی شدند.نتایجنتایج نشان داد که اختلاف معنی داری در درصد تحرک و یکپارچگی غشای اسپرم در محیط های دارای سولفات روی با گروه شاهد مشاهده نشد. تیمار 50 میکرومول سولفات روی سطح معنی داری بیشتری در درصد تحرک پیشرونده در مقایسه با گروه شاهد از خود نشان داد) 05/0p˂). از نظر افزایش درصد زنده مانی، سطح دارای 100 میکرومول سولفات روی در مقایسه با سطوح دارای 50 و150 میکرومول سولفات روی، اختلاف معنی داری داشتند) 05/0p˂).
نتیجه گیری: استفاده از سولفات روی در رقیق کننده ی منی قوچ احتمالا می تواند سبب بهبود برخی فراسنجه های اسپرم بعد از فرایند انجماد-ذوب شد.کلیدواژگان: سولفات روی، قوچ، اسپرم، رقیق کننده -
صفحات 387-396هدفدر این بررسی ساختار تشریحی برگ چهار جمعیت از گونه Nepeta heliotropifolia مورد بررسی قرار گرفت. تفاوت هایی که در ساختار سلولها و بافت های جمعیتهای مختلف یک گونه گیاهی ضمن تطابق با شرایط زیستگاهی پیش می آید می توانند آغازگر تنوعات درون گونهای برای گونه زایی باشند.مواد و روش هااز هر جمعیت سه فرد و از هر فرد یک برگ بالغ و سالم از ناحیه میانی ساقه انتخاب شد. برشگیری به روش دستی انجام شد. برشها رنگ آمیزی مضاعف شدند. نرم افزار های MVSP و SPSS برای بررسی های آماری مورد استفاده قرار گرفتند.نتایجدر مجموع بیست و دو صفت کمی و کیفی ساختار تشریحی برگ مطالعه شدند. صفات کیفی در بین گونه های مورد مطالعه ثابت بودند ولی آزمون ANOVA تفاوت معنی داری را برای بیشتر صفات کمی مطالعه شده نشان داد. همبستگی های معنی داری بین تعدادی از صفات تشریحی با یکدیگر و عوامل اکولوژیکی زیستگاه ها مشاهده شد. جمعتهای در درخت و نمودارها از یکدیگر جدا شدند.نتیجه گیریعوامل محیطی می توانند بر ساختار سلولها و بافتهای جمعیتهای مختلف گیاهان اثر گذاشته و باعث ایجاد تنوعات درون گونهای می شوند. این تنوعات درصفات تشریحی کمی نمود بیشتری دارد. تفاوتهای ایجاد شده در صفات تشریحی جمعیتها ارتباطی به دوری یا نزدیکی زیستگاه آنها نداشته بلکه میزان شباهت یا تفاوت خصوصیات زیستگاه ها عامل مهمی در ایجاد شباهت یا تفاوت بین جمعیتها می باشد.کلیدواژگان: صفات تشریحی، برگ، جمعیت، تنوعات درون گونه ای، Nepeta heliotropifolia
-
Pages 303-313Aim: In this study, we use combination of enzymatic and explant methods, for isolation and culture of ADMSCs.Materials And MethodAdipose tissues dissected out from the abdominal region of male Wistar rats. Tissues were minced into small pieces (1-2 mm), and then treated with trypsin-EDTA 0.25% for 30 minutes at 37 ̊C in shaker-incubator. Enzymatic treated tissues were centrifuged and floating parts were cultured. Statistical analysis of the cells number was investigated using GraphPad Prismv6 software.ResultsResults showed that ADMSCs isolated with our methods have growth characteristics similar to conventional methods. ADMSCs were maintained up to 10th passage and exhibited a homogeneous population in terms of appearance and morphology. We demonstrated that ADMSCs by these combination methods have mesenchymal characteristic markers (positive for CD90, CD44, CD73, CD105 and negative for CD35, CD45, CD11b).ConclusionIn the current study, we showed that the combination of enzymatic and explant methods creates a simple, inexpensive and reproducible method for isolation and culture of ADMSCs.Keywords: Mesenchymal stem cells, Adipose tissue, Explant, Rat
-
Pages 314-321Aims: In this study, the effects of Vitamin D3 on total protein concentration (TPC) and MBP expression in the corpus callosum extracts of Cuprizone induced demyelinated mouse has been investigated.
Material andMethodsThe mice were treated by Cuprizone for five weeks in order to induce demyelination. Then, the mice were divided into 3 groups. The first group was injected intraperitoneally (IP) by vitamin D3 in the amount of 5 µg/kg/daily body weight. The second group (SHAM) was injected IP by phosphate buffered saline (PBS) and the third group was left without injection as controls. After five weeks, the mice were killed and the corpus callosum was collected and the total protein concentration (TPC) and expression of MBP were studied by Western blot technique.ResultsNo significant variation in the cortical TPC was seen in vitamin D3 injected group as compared to either SHAM or controls. We have also shown that the expression of MBP in the corpus callosum extracts of demyelinated mouse was significantly increased in the vitamin D3 injected group as compared to the other groups.ConclusionsIt is concluded that vitamin D3 increases MBP expression in the corpus callosum of cuprizone-induced demyelination mice. It is also suggested that vitamin D3 may play a role in the process of remyelination by increasing MBP expression in the cortex.Keywords: Vitamin D, Myelination, Corpus callosum, Myelin basic protein, Cuprizone -
Pages 322-331Aim: The aim of this study was study the role of Resveratrol (RSV) on proliferation and colony efficiency of dissociated human embryonic stem cells (hESCs).
Material andMethodsIn the current study, we used HESC line, RH6. Cells were cultured on the matrigelin supplemented hESC specific medium. Cell proliferation was estimated using cell counting and Brdu incorporation assays. The expression of colony efficiency markers (E-cadherin and β-catenin) was evaluated by western blot technique and β-catenin localization examined by immune-cytochemistry staining.ResultsWe have shown that RSV promoted hPSCs proliferation without affecting their colony efficiency.ConclusionAccording to these observations, RSVcan be suggested as a new supplement for hESCs culture.Keywords: Human embryonic stem cells, Colony formation, Proliferation, Resveratrol -
Pages 332-353Cryopreservation is the most effective method for long-term maintenance of sperm. There are several procedures for freeze-thawing of semen and each may impose damage on sperm function, viability and finally decreases semen quality and fertility potential. In addition to decreased percentage of sperm viability and motility after freeze-thawing, percentage of DNA damage is also increases due to high level of oxidative stress. To minimize these damages, we need to increase our insights regarding different cryopreservation procedures, cryoprotectant and antioxidant supplements, which can protect sperm membrane during cryopreservation. Therefore, by using these experiments, we can improve the efficiency of these procedures. In this review, we discuss about principles of cryopreservation, types of freeze-thawing methods, advantages and disadvantages of each of these methods, effects of freezing on sperm parameters and clinical outcomes, and finally role of antioxidants in preservation of sperm integrity during freeze-thawing. For this review, all relevant information was collected via databases such as PubMed and Google Scholar during the period of 1966-2017.Keywords: Sperm freezing, liquid nitrogen, DNA damage, Fertility, Freeze compound composition
-
Pages 354-363Aim: In this study, the genotoxic effect of low frequency electromagnetic wave that is similar to mobile phones in wavelength, as a main source of producing this waves, in combination with a known aneugen (vinblastine) was investigated on the cultured cells.
Material andMethodsL929 cells were exposed to two forms of continues and discontinues electromagnetic waves with wave length of 900MGh in absence and presence of 1.5 ng/ml of vinblastine for 2 h. Investigation of induced chromosomal abnormalities and cell viability in all treated groups were performed by micronucleus assay on binucleated cells and MTT assay, respectively.ResultsThe frequency of micronuclei of cells in continuous and discontinuous electromagnetic fields was significantly higher in comparison with control and cells in turned off electromagnetic field, which represented higher chromosomal aberrations. Co-treatment of the cells with vinblastine did not increase this frequency. Analysis of toxicity showed no decrease in cell viability in all treated groups.Conclusionfindings represented the ability of electromagnetic field, especially in form of discontinues, in inducing chromosomal abnormality. Also, co-treatment of cells with electromagnetic filed and vinblastine did not elevate the level of chromosome abnormality.Keywords: Micronucleus assay in Binucleated cells, Electromagnetic waves, Vinblastine, L929 cells -
Pages 364-373Aim: The aim of this study is investigation of cell toxicity of oxaliplatin on colon cancer cell line and analysis of caspase 3 and 9 apoptotic genes.
Material andMethodsIn this experimental study, cytotoxicity of oxaliplatin on colon cancer cell line (HT29) was evaluated using MTT method in different concentrations including 100, 50, 25, 12.5, 6.25 and 3.125 µg/mL and the IC50 value was determined. After treatment of HT29 cells with IC50 value, the cells RNA was extracted and converted to cDNA. Subsequently, the expression level of caspase 3 and caspase 9 apoptotic genes comparing to house-keeping gene (β-actin) was measured using Real Time PCR.ResultsTreatment of HT29 cells with various concentrations of oxaliplatin including show that oxaliplatin has the highest cytotoxic effect in 100 µg/mL, which is statistically significant (PConclusionAccording to cell toxicity and apoptosis induction in HT29 cells by oxaliplatin, it can be concluded that this drug is an appropriate choice for treating of colon cancer.Keywords: Oxaliplatin, Colon cancer, Cytotoxicity, Apoptosis -
Pages 374-386Aim: The purpose of this study was to investigate the effect of adding different levels of zinc (Zn) to semen extender on the sperm parameters after freezing and thawing in rams.
Material andMethodsThe spermatozoa of five Farahani rams breed (with a mean age of 3 ± 0.5 years and weight of 60 ± 5 kg) were taken twice a week. The semen was collected from the rams by artificial vagina and then the samples were mixed to removing the individualistic effects. The sperm samples (in five replicates) were randomly divided into four groups (zero, 50, 100 and 150 μM of zinc sulfate). Each falcon had the desired diluent that was mixed with Zn and tris and prepared for freezing steps. Samples were stored in semi-milliliter straw and kept with samples under the same conditions and temperatures of 37 °C. Moreover, in these conditions were filled and frozen. Sperm samples were evaluated after thawing for motility, progressive motility, survival (eosin-neogrosin test), sperm membrane integrity (HOST) and sperm morphology (Hancock test).ResultsResults showed no significant difference in the motility percentage and sperm membrane integrity in zinc sulfate environments compared with the control group. The treatment with 50 μm of zinc sulfate showed a higher level of significant (P˂0.05) in the percentage of progressive motility compared with the control group. In sperm viability test, the treatment with 100 μm of zinc sulfate was significantly different from those of 50 and 150 μm zinc sulfate treatment (P˂0.05).Conclusionapplication of zinc sulfate in ram semen extender might be improving some of sperm parameters after the freezing-thawing.Keywords: Zinc, Ram, Sperm, Extender -
Pages 387-396Aim: One of the most important infraspecific variations is differences of tissues and cells in plant that occur between various populations of the same species for adaption with environmental factors. These variations can be consider as a starter for speciation.
Material andMethodsIn the present study, leaf anatomical traits of four Nepeta heliotropifolia populationswere examine. Three flowering stems were collected from each population, and from each stem a mature intact leaf was elected. Leaves were fixed in fixative and then transferred to ethanol. Hand sections were decolorized, double stained and their anatomical structure were studied using light microscopy. The MVSP and SPSS soft wares were used for statistical analyses.ResultsIn total, twenty two qualitative and quantitative anatomical characteristics were studied. Qualitative features were stable between populations, while ANOVA test showed significant differences for most of the studied variables. In addition, significant correlations were found between morphological characters with each other and ecological factors of habitats. The studied populations clustered separately in UPGMA tree, PCA and PCO plots.ConclusionEnvironmental factors have effects on tissues and cells of plant and create infraspecific variations. They have more effects on quantitative variables compared with qualitative ones. Leaf anatomical variations of populations have no relationship with distances between the populations, but similarity or difference of ecological factors is a very important factor in creating similarity or difference between populations. The pattern of populations arrangement in the created tree and plots approved it.Keywords: Anatomical features, Leaf, population, Infraspecific variations, Nepeta heliotropifolia