کلون کردن ژن پروکیموزین در باکتری لاکتوکوکوس لاکتیس

در سال های اخیر از یک طرف به دلیل افزایش حجم تولید شیر در جهان و از طرف دیگر به خاطر کاهش منابع طبیعی آنزیم رنین، تولید پنیر با استفاده از این آنزیم کاهش چشمگیری داشته است. تلاش های زیادی برای تولید این آنزیم به شکل نوترکیب صورت گرفته است. باکتری لاکتوکوکوس لاکتیس استارتر طبیعی پنیر محسوب می شود و تولید پروکیموزین توسط این باکتری تحول بزرگی در صنعت شیر ایجاد خواهد کرد. در این پژوهش تلاش بر این بوده است که ژن تولید کننده ی پروکیموزین بزی در باکتری لاکتوکوکس لاکتیس کلون گردد. برای این کار ژن پروکیموزین که قبلا در پلاسمید28 pET- و در باکتریE. coli سویه(BL21(DE3 کلون شده بود، توسط واکنشPCR تکثیر و پس از جداسازی ژن در پلاسمید واسطpTZ57R کلون و برای نگهداری بهتر به باکتریE. coli GM2163 منتقل شد. سپس ژن پروکیموزین از پلاسمیدpTZ57R بریده، در پلاسمید لاکتوباکتریاییpNG-410 کلون و برای تکثیر پلاسمید کلون شده به باکتری E.coli MC1061 منتقل شد. بعد از تکثیر، پلاسمیدpNG-410 حامل ژن پروکیموزین از باکتریE. coli MC1061 جدا و به باکتری لاکتوکوکوس لاکتیس سویهNZ9000 منتقل گردید. کلون های به دست آمده توالی یابی و از صحت ژن مورد نظر اطمینان حاصل شد.