تشخیص سریع حساسیت به اتامبوتول در سویه های مایکوباکتریوم توبرکلوزیس ایزوله شده از بیماران مسلول با روش مولکولی PCR-RFLP

اتامبوتول یکی از داروهای کلیدی جهت درمان بیماری سل بوده و بروز مقاومت به آن به صورت فزاینده ای گزارش می شود. در مطالعه حاضر روش Polymorphism) (Restriction Fragment Length PCR-RFLP در شناسایی سریع مقاومت سویه های مایکوباکتریوم توبرکلوزیس نسبت به اتامبوتول مورد بررسی قرار گرفته است.
در این مطالعه از127 سویه مایکوباکتریوم توبرکلوزیس در مرکز تحقیقات سل اراک، 60 سویه انتخاب و مورد بررسی قرار گرفتند. جداسازی DNA با استفاده از روش Chelex100انجام گردید. PCR با کمک پرایمرهای اختصاصی برای آمپلی فیکاسیون قطعه bp167 ژن embB اجرا گردید. محصول PCR با کمک آنزیم های HaeIII و NlaII مورد RFLP قرار گرفت و الگوی باندها تعیین شد. قطعه مورد نظر در تعدادی از نمونه ها تعیین ترادف (سکوئنس) شده و به عنوان استاندارد طلایی با روش ارائه شده مقایسه گردید.
از 60 سویه مورد مطالعه، 43 سویه از نظر فنوتیپی مقاوم به اتامبوتول و 17 سویه حساس به این دارو بودند. انجام PCR، باند 167 را ارائه نمود که نشان دهنده انتخاب صحیح پرایمرها و تعیین برنامه مناسب آمپلی فیکاسیون بود. از 43 سویه مقاوم، 19 سویه با روش RFLP دارای موتاسیون در کدون ATG-Met 306 و 24 سویه غیر موتان تشخیص داده شدند. تمامی 17 سویه حساس، غیر موتان بودند. این روش برای تعیین سویه حساس دارای حساسیت و ویژگی 100درصد می باشد. نتایج تعیین توالی، انطباق کامل با نتایج PCR-RFLP را نشان داد.
نتایج مطالعه حاضر نشان می دهد که روش PCR-RFLP می تواند به عنوان یک روش ساده و سریع برای تعیین حساسیت به اتامبوتول در سویه های مایکوباکتریوم توبرکلوزیس مورد استفاده قرار گیرد.