کلون و بیان ژن fliC به عنوان کاندیدای واکسن علیه بیماری تیفوئید

سالمونلا انتریکا یک پاتوژن زئونوز است که می تواند باعث تب تیفوئید در انسان و حیوان شود. این باکتری یکی از علل مهم عفونت های ناشی از مواد غذایی در انسان در سراسر جهان است. از مطالعات اخیر تخمین زده می شود که سالانه حدود 22 میلیون مورد ابتلا به این بیماری گزارش می شود که از این تعداد 200 هزار نفر را به کام مرگ می کشاند. فلاژلینی که توسط fliC کد می شود نقش مهمی در بیماری زایی دارد و می تواند به عنوان آنتی ژنی قوی در واکسن مورداستفاده قرار گیرد. این مطالعه باهدف تولید پروتئین نوترکیب fliC به عنوان یکی از کاندیداهای واکسن علیه بیماری سالمونلوز انجام شد.
توالی پروتئین fliC از پایگاه داده NCBI اخذ شد. برای بیان حداکثری، ژن موردنظر با توجه به ترجیح کدونی E. coli ساخته شد. ژن سنتتیک از وکتور pUC57 به وکتور بیانی pET28a+ زیرهمسانه سازی شد و سپس به میزبان E. coli BL21DE3 تراریخت شد. پروتئین نوترکیب با القاء IPTG بیان شد. برای بیان حداکثری، سه پارامتر شامل غلظت IPTG، زمان و دما بهینه سازی گردید. پروتئین نوترکیب حاوی His-Tag به وسیله ستون کروماتوگرافی تعویض یون Ni-NTA Agarose خالص سازی شد. پروتئین خالص شده با آزمایش وسترن بلات تائید شد.
وکتور نوترکیب با واکنش PCR و نیز آنالیز آنزیم های تحدیدی تائید شد. آزمایش SDS-PAGE وجود یک پروتئین 51 کیلو دالتونی با خلوص مناسب را نشان داد. همچنین آزمایش وسترن بلات با آنتی بادی His-tag پروتئین مدنظر را تائید نمود.
امروزه استفاده از واکسن های نوترکیب بسیار موردتوجه قرار گرفته است. با توجه به اینکه در مطالعه حاضر ژن یکی از مهم ترین فاکتورهای بیماری زایی باکتری سالمونلا همسانه سازی و پروتئین مربوط به آن تولید و تخلیص شده است. این پروتئین می تواند به عنوان یکی از کاندیداهای مناسب در واکسن های نوترکیب علیه تیفوئید مورداستفاده قرار گیرد.