جداسازی و شناسایی باکتری های تولیدکننده آنزیم کوتیناز

آنزیم کوتیناز جزء خانواده آنزیمی سرین هیدرولازها بوده که توانایی هیدرولیز انواع استرها و پلی استرهای کوچک مانند کوتین را دارد. کوتین گیاهان از ترکیبات پلی استری هیدروکسی و اپوکسی اسید چرب تشکیل شده است که در مقابل آب نفوذناپذیر است و تنها باکتری های بیماری زای گیاهی قادر به تجزیه آن هستند. به منظور شناسایی این مقاومت، در ابتدا میوه های خیار (Cucumis sativus-'' C. sativus'')، سیب زرد (Golden Delicious apple ''Malus domestica'') ، سیب قرمز (Red Delicious apple ''Malus domestica'') و گوجه فرنگی (Solanum lycopersicum Mill. Commun '' S. lycopersicum'') تهیه و از پوست این میوه ها به روش کلرفرم متانول، کوتین استخراج و میزان آن در این میوه ها مقایسه شد. سپس، با استفاده از محیط کشتی اختصاصی حاوی کوتین و سنجش فعالیت آنزیمی، جداسازی سویه های تولیدکننده آنزیم انجام شد. از نمونه های غربال شده، DNA استخراج شد و واکنش PCR به کمک پرایمرهای یونیورسال براساس 16s DNA جهت شناسایی نمونه ها انجام گرفت. در ادامه مطالعات بیوانفورماتیک، شناسایی و ثبت نمونه ها در ژن بانک انجام شد. نتایج نشان می داد که درصد کوتین استخراج شده در سیب بیشتر است و احتمالا سیب درمقابل آفات و بیماری ها مقاوم تر است. همچنین، شش سویه تولیدکننده آنزیم کوتیناز از جنس Klebsiella و Enterobacter به کمک بررسی فعالیت آنزیمی و محیط کشت اختصاصی حاوی کوتین جداسازی و توالی کدکننده ناحیه 16s DNA این باکتری ها در ژن بانک ثبت شد