کلونینگ و بیان آسپاراژیناز در باکتریcoli Escherichia
نویسنده:
نوع مقاله:
مقاله پژوهشی/اصیل (بدون رتبه معتبر)
چکیده:
آنزیم L- آسپاراژیناز هیدرولیز اسید آمینه L- آسپاراژین به L- اسید آسپار تات و آمونی وم را کاتالیز میکند. آنزیم های با فعالیت آسپارا ژینازی، نقش مهمی در متابولیسم کلیه موجودات به عهده دا رند و در داروسازی نیز حایز اهمیت هستند. آنزیم آسپار اژیناز II، یکی از داروهای شناخته شده در درمان لوکمیای لنفوبلاستیک حاد است . در این تحقیق به منظور دستیابی به مقادیر بالای آنزیم، ژن آسپاراژیناز (ansB) II با تکنیک PCR و با استفاده از پرایمرهای اختصاصی طراحی شده از باکتری E. coli DH5α جدا شد. قطعه موردنظر که اندازه ای حدود 1047bp داشت، با دو آنزیم NdeI / Sac I بریده شد و در جایگاه مشابه در پلاسمید pET21a در پایین دست پروموتر T7 کلون شد. پلاسمید نوترکیب، وارد باکتری E. coli DH5 α گردید. پس از تایید کلونینگ با استفاده از PCR و برش آنزیمی، پلاسمید نوترکیب، وارد باکتری E.coli BL 21 گردید و پس از القاء با IPTG با غلظت 1 میلی مولار، بیان ژن با استفاده از SDS-PAGE و سنجش فعالیت آنزیمی تایید شد . حضور باند حدودا 35 کیلودالتونی در SDS-PAGE بیان ژن را اثبات نمود . برای سنجش فعالیت ، از روش سنجش میزان آمونیاک تولید شده، استفاده شد. روش سنجش فعالیت آنزیمی میزان Unit/ ml 86 آنزیم را نشان داد. پروموتر قوی T7 منجر به تولید مقادیر بالایی از آنزیم گردید ؛ به طوری که فعالیت آن بیش از 20 برابر فعالیت آن در سویه وحشی بود. به علاوه، میزان بالای پروتئین تولید شده در محلول رویی نشانگر تو لید خارج سلولی پروتئین فوق است که خالص سازی آن را آسان تر خواهد کرد.
کلیدواژگان:
آسپاراژیناز II ، بیان ، فعالیت آنزیمی ، ansB E ، coli
زبان:
فارسی
صفحات:
41 تا 48
لینک کوتاه:
magiran.com/p1975251
دانلود و مطالعه متن این مقاله با یکی از روشهای زیر امکان پذیر است:
اشتراک شخصی
با عضویت و پرداخت آنلاین حق اشتراک یکساله به مبلغ 1,390,000ريال میتوانید 70 عنوان مطلب دانلود کنید!
اشتراک سازمانی
به کتابخانه دانشگاه یا محل کار خود پیشنهاد کنید تا اشتراک سازمانی این پایگاه را برای دسترسی نامحدود همه کاربران به متن مطالب تهیه نمایند!
توجه!
- حق عضویت دریافتی صرف حمایت از نشریات عضو و نگهداری، تکمیل و توسعه مگیران میشود.
- پرداخت حق اشتراک و دانلود مقالات اجازه بازنشر آن در سایر رسانههای چاپی و دیجیتال را به کاربر نمیدهد.
In order to view content subscription is required
Personal subscription
Subscribe magiran.com for 70 € euros via PayPal and download 70 articles during a year.
Organization subscription
Please contact us to subscribe your university or library for unlimited access!