استخراج و خالص سازی آنزیم DNA پلی مراز از باسیلوس استیروترموفیلوس جداشده از آب گرماستخر گاومیش شهر سرعین

با توجه به نقش آنزیم DNA پلی مراز در همانندسازی DNA در تحقیقات مولکولی آنزیم های DNA پلی مراز خصوصا انواع مقاوم به حرارت از اهمیت بسزایی برخوردارند. در این تحقیق، از باکتری باسیلوس استیروترموفیلوس مقاوم به حرارت، جدا شده از آب گرماستخر گاومیش شهر سرعین استان اردبیل آنزیم DNA پلی مراز مقاوم به حرارتاستخراج و تخلیص گردید به همین منظور باکتری ها در محیط Luria- Bertani broth در دمای? C55 کشت داده شدند و در فاز لگاریتمی برداشته شدند. نتیجتا بیست گرم خمیر باکتری به دست آمد و در بافر مربوطه به صورت سوسپانسیون در آورده شد سپس با استفاده از لیزوزیم و سونیکاسیون عصاره خام سلولی تهیه گردید بعد به کمک رسوب با سولفات آمونیوم و سه مرحله کروماتوگرافی به ترتیب با - DEAE سفادکس، فسفوسلولز و هپارین سفاروز خالص سازی عصاره خام سلولی صورت گرفت. آنزیم DNA پلی مراز 127 برابر تخلیص گردید و در نهایت آنزیم با فعالیت ویژه 223 (U/mg) تهیه شد DNA پلی مرازاستخراجی در دمای 55? C بیشترین فعالیت را از خود نشان داد. با استفاده از SDS-PAGE سه باند پروتئینی بدست آمد که وزن مولکولی باند اصلی حدود 76000 دالتون بود. از آنزیم DNA پلی مراز باسیلوس استیروترموفیلوس میتوان در همانندسازیDNA، site directed mutagenesisو DNA sequencing در دمای بالا استفاده نمود.