جداسازی و غربالگری سویه های مولد ال-آسپاراژیناز از طبیعت و بهینه سازی آن

ال-آسپاراژیناز یک داروی درمانی است که در انواع لوسمی ها و سرطانهای خون به ویژه لوسمی حاد لنفوئیدی به کار می رود. میکروارگانیسمها مناسب ترین منبع برای تولید این آنزیم میباشند. هدف از این تحقیق جداسازی و شناسایی باکتری های تولیدکننده آنزیم ال-آسپاراژیناز از نمونه های محیطی مانند آب، خاک و گیاهان مختلف بود.

جداسازی اولیه بر روی محیط های آگار مغذی و لوریا برتونی انجام شد و سپس سویه های بدست آمده بر روی محیط تمایزی آسپارژین دکستروز کشت داده شدند. کلنی های مولد ال-آسپاراژیناز بر اساس ایجاد هاله صورتی در اطراف کلنی انتخاب شدند. کلنی های رنگی برای مطالعه بیشتر فعالیت آنزیمی با استفاده از ال-آسپاراژین به عنوان سوبسترا انتخاب شدند. مقدار آمونیوم آزاد شده توسط روش نسلر اندازه گیری شد و فعالیت آنزیمی به صورت واحد آنزیمی بر میلی گرم پروتئین بیان گردید. بهترین سویه بر اساس روش های ریخت شناسی، بیوشیمایی، فیزیولوژیکی و همولوژی 16S rRNA شناسایی شد. به علاوه بعضی از فاکتورهای غذایی مانند منبع کربن، نیتروژن و pH به منظور تولید آنزیم ال-آسپاراژیناز بهینه سازی شدند.

سویه 105 از میان سویه های جداشده فعالیت ال-آسپاراژینازی بالایی را نشان داد و تحت عنوان انتروباکتر سویه 105 شناسایی و با شماره دسترسیKX821736 در بانک ژنی NCBI ثبت شد. نشاسته 5/1 درصد به عنوان منبع کربن، آمونیوم سولفات 5/1 درصد به عنوان منبع نیتروژن و pH برابر 6 به عنوان بهترین شرایط تولید این آنزیم مشخص شدند. فعالیت اختصاصی آنزیمی در بهترین شرایط بهینه 42/9 واحد بر میلی گرم پروتئین بود.