بیان پروتئین نوترکیب TGF β1 در گیاه توتون و بررسی تاثیر پروتئاز فورین در پردازش فرم نهفته ی این پروتئین

TGFβ1 ، یک پروتئین تنظیمی چندکاره است که در طیف وسیعی از فعالیت های بیولوژیکی مداخله می نماید. این پروتئین، ابتدا به صورت یک فرم پیش ساز غیرفعال، حاوی 390 اسید آمینه سنتز می شود که قبل از اتصال به گیرنده های TGFβ1، تحت تاثیر برش پروتیولیتیکی، فرم بالغ TGFβ1 از پروپپتید آن جدا می گردد. فرم بالغ این پروتئین شامل 112 اسید آمینه از انتهای C ترمینال فرم غیرفعال آن است. در این مطالعه، در ابتدا توانایی دو سویه ی GV3101 و GV3101 (pMP90RK) آگروباکتریوم برای ترانسفورماسیون گیاه Nicotiana benthamiana با ناقل بیان pTRAkc-ERH، به وسیله ی ساخت سازه کنترل pTRAkc/ CJG138 (حاوی GFP)، بررسی گردید و نتایج حاصل با تکنیک وسترن بلات و تصویربرداری کانفوکال ارزیابی شد. سپس، به منظور بیان موقت پروتئین TGF β1 از فرم پیش ساز آن در گیاه توتون، سازه های نوترکیب pTRAkc/ DCF6 و pTRAkc/ DCF7، به ترتیب دارای توالی نگهدارنده شبکه آندوپلاسمی (SEKEDL) و فاقد این توالی طراحی و ساخته شدند. این سازه ها به تنهایی و در ترکیب با سازه ی نوترکیب دیگری که حاوی ژن رمز کننده ی پروتیاز فورین بود، به گیاهان توتون مایه زنی شدند. نتایج حاصل نشان داد که هر دو سازه با موفقیت در گیاه توتون بیان می شوند. هرچند پردازش کارآمدتر فرم پیش ساز پروتئین TGF β1 در گیاهان مایه زنی شده با سازه ی pTRAkc/ DCF7، نشان می دهد که تجمع فرم پیش ساز این پروتئین در شبکه آندوپلاسمی از پردازش آن جلوگیری می کند. همچنین، در این تحقیق مشخص شد که برش پروتیولیتیکی شبیه به پروتیاز فورین، بین TGFβ1 بالغ و پروپپتید آن، در N. benthamiana اتفاق نمی افتد.