بهینه سازی تولید زنجیره سبک آنزیم انتروکیناز انسانی به منظور استفاده در صنایع دارویی

انتروکیناز یک آنزیم دستگاه گوارش است که به عنوان یک پروتیاز با توالی خاص عمل می کند. به دلیل توانایی انتروکیناز برای هضم آنزیمی پروتیین نوترکیب در سایت اختصاصی آن (شامل چهار اسید آمینه آسپارتیک اسد و یک اسید آمینه لیزین می باشد) که در پروتیین هدف قرار داده می شود، به عنوان یک ابزار بسیار مفید برای امکان خالص سازی و جداسازی بخش پروتیین هدف از بخش غیر هدف در صنایع دارویی، غذایی و صنعتی مورد استفاده قرار می گیرد.

متغیرهای مستقل مورد استفاده شامل میزان OD (6/0، 2/1 و 8/1) در طول موج 600 نانومتر، غلظت IPTG  (2/0، 5/0 و 8/0 میلی مولار) و نوع سویه باکتری (ShuffleT7, BL21, NICO21) بود. از روش سطح پاسخ (RSM) در قالب طرح مرکب مرکزی برای پیش بینی متغیرهای مستقل بر میزان تولید آنزیم انتروکیناز استفاده شد.

میزان OD برابر با 8/1 در طول موج 600 نانومتر، غلظت IPTG 71/0 میلی مولار و نوع سویه باکتری ShuffleT7، محیط کشت LB، غلظت لاکتوز 5/2 میلی مولار و دمای القاء 25 درجه سانتیگراد، برای تولید آنزیم انتروکیناز نوترکیب بهینه سازی شد.

پروتیین های دارویی نقش مهمی در درمان های نوین پزشکی مولکولی دارند. بیان ژن انتروکیناز در سیستم باکتریایی، تسهیل در خالص سازی غلظت هایی که پایین است را فراهم می کند، بنابراین پروتیین های نوترکیب در مقیاس وسیع و با خلوص زیاد می توانند در سیستم باکتریایی تولید و بهینه سازی شوند.