بهینه کردن انتقال ژن نایسین به واسطه ی اگروباکتریوم در گیاه هویج

نایسین یک آنتی باکتریال طبیعی است که به عنوان نگهدارنده در مواد غذایی و داروها استفاده می شود. تولید گیاهچه ی تراریخته هویج حاوی پروتیین نوترکیب نایسین به واسطه ی اگروباکتریوم، سویه ی LBA4404 و پلاسمید pBI121 بررسی شد. پلاسمید pBI121 حاوی ژن های گزارشگر NPTIIبه ترتیب با پیشبرهایCaMV35S می باشد. به منظور تهیه ی پلاسمید نوترکیب، ابتدا ژن نایسین از باکتری لاکتوکوکوس لاکتیس شناسایی شد. پس از بهینه سازی کدونی، بین دوسایت برشی BamHI و SacI در وکتورpBI121 کلون سازی شد. ریزنمونه های ریشه، برگ، ساقه و گره-ی هویج با سوسپانسیون اگروباکتریوم حاوی پلاسمید نوترکیب با غلظت های مختلف مایه تلقیحآلوده شدند و در زمان های مختلف هم کشتی قرار داده شدند و بعد از سه روز در محیط کشت کالوس زایی حاوی کانامایسین و سفاتاکسیم کشت شدند. کالوس هایی که قادر به رشد روی محیط گزینش بودند، انتخاب و به محیط باززایی منتقل شدند. کالوس زایی در 40 درصد ریزنمونه ها مشاهده شد. 55 درصد کالوس های مقاوم، جنین زا شدند. جنین های تولید شده پس از جوانه زنی به محیط باززایی منتقل شدند. بیشترین درصد گیاهان مقاوم به کانامایسین (45 درصد) مربوط به استفاده ازریزنمونه-ی ساقه و غلظت باکتری 6/0 تا 8/0 و زمان های مختلف هم کشتی 1و 2 روز و غلظت 250 میلی گرم در لیتر سفاتاکسیم بود. به منظور اطمینان از عدم آلودگی گیاهان به اگروباکتریوم و تایید صحت انتقال ژن، واکنش زنجیره ای پلیمراز با استفاده از آغازگرهای اختصاصی Vir Gene انجام و صحت انتقال ژن تایید شد. واکنش زنجیره ای پلی مراز نشان داد که 60 درصد گیاهان تراریخته فرضی، حداقل یک نسخه از ژن های nptII و نایسین را در ژنوم خود دارا هستند.