ارزیابی اثرات siRNA بر سطح بیان ژن Snail1 و miR143 در سلول‫های متاستاتیک سرطان سینه‬‬‬‬‬

در دهه های گذشته تلاش های زیادی با هدف جستجوی ابزارهای جدید جهت درمان سرطان صورت گرفته است. در این راستا، کشف، بررسی و کاربرد تکنیک‫های مرتبط با RNA های مداخله گر کوچک (siRNA) یکی از قابل توجه ترین پیشرفت‪ها در زمینه شناسایی و درمان سرطان  بوده است. RNA  مداخله گر کوچک که گاهی به‏‏عنوان RNA مداخله گر کوتاه یا RNA خاموش کننده نیز شناخته می شود، معمولا 21 جفت باز طول دارد و با تجزیه mRNA پس از رونویسی، با بیان ژن های خاص با توالی های نوکلیوتیدی مکمل تداخل می کند و از ترجمه جلوگیری می کند. مطالعات بسیاری نشان داده اند که siRNA ها بر تنظیم بیان برخی ژن ها که در سرطان ها نقش دارند تاثیرگذار می باشند. siRNA ها بر فاکتورهای رونویسی  Snailکه در تهاجم و متاستاز سلول های سرطانی و miR-143 که در پاتوژنز سرطان ها نقش مهمی دارند موثر هستند. miRNA ها همراه با عوامل رونویسی می توانند مسیرهای بیولوژیکی دخیل در سرطان زایی را مختل کنند. حال آنکه ، اثر دقیق ها siRNA بر بیان ژن های snail1 و miRNA-143 در سلول های سرطانی سینه کاملا روشن نیست. بر این اساس مطالعه حاضر به بررسی اثراتsiRNA  بر snail1 و miRNA-143  بر سلول های سرطان سینه پرداخته است.

در این تحقیق تجربی-آزمایشگاهی سلول های سرطانی سینه رده MDA-MB-468 انستیتو پاستور ایران خریداری شدند. سلول ها در محیط کشت RPMI-1640 حاوی 10% FBS کشت داده شدند. جهت تیمار سلول های سرطانی با siRNA  اختصاصی، کیت ژن  Snail1(Santacruz biotechnology California, USA) مورد استفاده قرار گرفت. سلول ها به دو گروه کنترل (عدم تیمار) و سلول های تیمار شده (ترانسفکت شده با siRNA) تقسیم بندی شدند. به منظور مشخص کردن زمان موثر، سلول ها تحت تاثیر دوز 60پیکومول  siRNA به مدت 24، 48 و 72 ساعت قرار گرفتند. پس از بررسی بیان ژن و به دست آمدن زمان موثر در ادامه به منظور به دست آوردن دوز موثر سلول ها با سه دوز 40، 60 و 80 پیکومول تیمار شدند. از ژن بتا اکتین به عنوان ژن کنترل داخلی استفاده شد. مورفولوژی سلول های متاستاتیک MDA-MB-468 با استفاده از میکروسکوپ نوری قبل و بعد از ترانسفکت ژن اختصاصی مورد بررسی قرار گرفتند. تکثیر سلول ها با رنگ آمیزی تریپان بلو بررسی شد. سطح بیان ژن snail1 و miR-143 توسط qRT-PCR ارزیابی شد. داده ها با استفاده از آزمون تی - تست تجزیه و تحلیل شدند.

در این مطالعه در سلول های سرطانی سینه رده MDA-MB-468 سطح نسبی بیان ژن Snail1 در زمان موثر 48 ساعت و در مواجهه با دوز موثر 60 پیکومول دچار کاهش معنی داری شد (P <0.0001). اما ناک داون ژن Snail1 توسط siRNA اختصاصی در سلول های سرطانی رده  MDA-MB-468درمواجهه با دوز موثر60 پیکومول و زمان موثر 48 ساعت سبب افزایش سطح بیان نسبی ژن miR-143 در مقایسه با گروه کنترل شد (P <0.0001). همچنین میزان رشد سلول های سرطانی  MDA-MB-468با ناک داون ژن Snail1 کاهش پیدا کرد.

نتایج حاصل از این پژوهش نشان دادند که ترانسفکت سلول های سرطان سینه رده  MDA-MB-468 توسط siRNA اختصاصی با اثرات کاهشی و افزایشی که بر سطح بیان ژن Snail1 و ژن miR-143  داشته است می تواند به طور موفقیت آمیزی سبب کاهش تکثیر و تهاجم سلول های سرطان سینه می شود.