طراحی و ساخت یک پلاسمید عرضه سطحی حاوی قطعه ژنی رمزگذار پروتئین E6 نوترکیب ویروس پاپیلومای انسانی تیپ 18 جهت بیان در مخمر Yarrowia lipolytica

ویروس های پاپیلومای انسانی (HPV) با بیش از 100 تیپ، به دو دسته با ریسک پایین و بالا تقسیم می شوند که تیپ های 16 و 18 به تنهایی در 70% موارد سرطان گردنه رحم دخیل اند. در حال حاضر، توسعه پروتیین های نوترکیب HPV با هدف واکسیناسیون یا درمان مورد توجه دانشمندان می باشد. از این رو، مطالعه حاضر با هدف ساخت یک پلاسمید نوترکیب عرضه کننده در سطح رمزگذار پروتیین E6 ویروس پاپیلومای انسانی تیپ 18 انجام شد.

روش کار: 

قطعه ژنی رمزگذار پروتیین E6 تیپ 18 ویروس پاپیلومای انسانی (HPV18) با استفاده از DNA فرد مبتلا به ویروس به عنوان الگو، با روش PCR آشیانه ای مورد تکثیر قرار گرفت و پس از برش آنزیمی دوگانه Hind III و SfiI، به درون پلاسمید عرضه کننده در سطح pINA1317-YLCWP110 همسانه سازی شد.

روش های مولکولی نظیر PCR و برش آنزیمی دوگانه صحت همسانه سازی پلاسمید نوترکیب pINA1317-YLCWP110-E6 را مورد تایید قرار داد. همچنین، نتایج به دست آمده از تعیین توالی به روش سنگر و هم ردیفی با داده های موجود در بانک ژن منجر به تایید نهایی صحت توالی، ترادف و چارچوب قرار گرفتن قطعه ژنی در جایگاه مناسب گردید.

نتایج این مطالعه، همسانه سازی موفق قطعه ژنی رمزگذار پروتیین E6 ویروس HPV18 را در پلاسمید عرضه کننده در سطح pINA1317-YLCWP110-E6 در جایگاه و جهت مناسب مورد تایید قرار داد. این پلاسمید در صورت بیان در میزبان مخمری Yarrowia lipolytica، قابلیت استفاده به عنوان واکسن، مارکر مولکولی یا جنبه درمانی خواهد داشت.