ارزیابی مولکولی رونویسی ژن icaA تیمارشده با ریفامپین و عصاره سیر در استافیلوکوکوس اورئوس

استافیلوکوکوس اوریوس ازجمله باکتری های بیماری زا در انسان است که عامل طیف وسیعی از بیماری هاست. تشکیل بیوفیلم استافیلوکوکوس اوریوس را در برابر شرایط محیطی نامساعد و سیستم ایمنی میزبان در امان نگه می دارد. ژن هایی که مهم ترین مواد تشکیل دهنده بیوفیلم را کد می کنند، متعلق به اپرون ica هستند که یکی از مهم ترین آنها ژن icaA است. ریفامپین یک آنتی بیوتیک با طیف گسترده است و سیر نیز به دلیل داشتن ماده موثره آلیسین دارای اثرات ضدمیکروبی مطلوبی است. در این پژوهش، اثر ضدمیکروبی عصاره سیر در سطح فنوتیپی و مولکولی و تاثیر آن بر میزان بیان ژن بیوفیلم icaA و مقایسه آن با آنتی بیوتیک ریفامپین بررسی شد.

مواد و روش ‏‏ها:

 یک سویه استاندارد و دو سویه بیماری زا از استافیلوکوکوس اوریوس ارزیابی شدند. آزمون های آنتی بیوگرام، حداقل غلظت مهاری و حداقل غلظت کشندگی با آنتی بیوتیک ریفامپین و عصاره سیر انجام شدند. آزمون فنوتیپی بیوفیلم نیز با میکروپلیت 96 چاهکی انجام شد. پس از استخراج RNA از نمونه های تیمارشده با ریفامپین و عصاره سیر، سنتز cDNA و سپس Real time PCR صورت گرفت و میزان بیان ژن icaA سنجیده شد.

آزمون آنتی بیوگرام، اثر ضدمیکروبی عصاره سیر را حداقل درباره سویه استاندارد و یکی از سویه های بیماری زا به اثبات رساند؛ به طوری که این تاثیر در مقایسه با ریفامپین درخور توجه بود. نتایج حداقل غلظت مهاری (MIC) و حداقل غلظت کشندگی (MBC) درباره هر سه سویه برای ریفامپین و ترکیب توام ریفامپین و گارسین به ترتیب 375 و 750 میکروگرم بر میلی لیتر تعیین شدند. نتایج Real time PCR نشان دادند در همه سویه های مطالعه شده، عصاره سیر و ریفامپین قادر به کاهش بیان ژن icaA هستند و استفاده توام این دو ماده به کاهش چشمگیر بیان این ژن منجر شد. درباره سویه استاندارد، ریفامپین و عصاره سیر به ترتیب بیان icaA را به 88 درصد و 60 درصد نمونه کنترل کاهش دادند و ترکیب این دو ماده با یکدیگر به کاهش حدود 50 درصدی بیان ژن بیوفیلم icaA منجر شد.

بحث و نتیجه ‏گیری: 

در یک جمع بندی کلی استنباط می شود آنتی بیوتیک ریفامپین می تواند بر مهار باکتری های بیماری زایی همچون استافیلوکوکوس اوریوس موثر باشد. همچنین عصاره سیر در سطح فنوتیپی و در سطح مولکولی می تواند به عنوان داروی ضد این باکتری استفاده شود.