ردیابی ویروس پسوروز مرکبات با استفاده از dsRNA و هیبریداسیون

ویروس پسوروز مرکبات عامل ایجاد یکی از مهم ترین بیماری های ویروسی مرکبات در جهان است که در باغات مرکبات واقع در شرق مازندران شناسایی شده است. به دلیل حضور هم زمان نژادهای مختلف ویروس در نمونه های آلوده، روش های شناسایی مولکولی مانند PCR اغلب از توان ردیابی این ویروس با دقت بالا برخوردار نیستند. در این تحقیق، روشی دقیق برای شناسایی ویروس پسوروز مرکبات معرفی شده است.

ردیابی و تشخیص نمونه های آلوده با استفاده از آزمون الایزا به روش ساندویچ غیر مستقیم سه طرفه پادتن (TAS-ELISA) و آنتی بادی تک همسانه ای از نمونه های پرتقال تامسون و نارنگی انشو با علایم مشکوک به آلودگی به CPsV، در شهرستان های ساری، نکا و قایم شهر از استان مازندارن انجام پذیرفت. آلودگی در نمونه ها با استفاده از RT-PCR تایید و استخراج ds RNA (Double-strand RNA) ویروسCPsV با استفاده از ستون CF-11 انجام شد. برای هیبریداسیون مولکولی از پروب cDNA نشاندار شده با DIG استفاده شد.

بررسی الگوی الکتروفورز حاصل از استخراج dsRNA از نمونه هایی که با الایزا و RT-PCR به CPsV آلوده تشخیص داده شده بودند بیانگر حضور ژنوم CPsV با وزن های مولکولی 2500 و 920 جفت باز در نمونه های آلوده بود. همچنین با استفاده از هیبریداسیون مولکولی و پروب طراحی شده، حضور CPsV در نمونه های آلوده  مورد تایید قرار گرفت.

نتایج به دست آمده از آزمون هیبرید سازی مولکولی ارتباط مستقیم بین dsRNA استخراج شده از نمونه های آلوده و حضور ویروس  پسوروز مرکبات را در نمونه های علایم دار مرکبات شهرستان ساری اثبات نمود.