تولید آنتی بادی پلی کلونال علیه سلول های P388D1

تکنیک های هم کشت(co-culture) در مطالعه تاثیرات متقابل سلولهانقش مهمی دارند. قابلیت افتراق بین جمعیت های سلولی هم کشت شده در ارزیابی این نوع کشت نقش اساسی دارد. سلولهای P388D1از گروه سلول های شبه ماکروفاژی هستند ولی ظاهری شبیه لنفوبلاست دارند. در ارزیابی هم کشت سلول های P388D1 و سلول های مغز استخوان، تفاوت در آنتی ژن های سطحی این دو جمعیت سلولی می تواند به افتراق آنها کمک کند. هدف از این تحقیق تهیه آنتی بادیی بوده که بتوان بوسیله آن سلول های P388D1 را از سلول های مغز استخوان افتراق داد.
جهت تهیه آنتی بادی علیه سلول های P388D1 ایمن سازی خرگوش بوسیله تزریق داخل صفاقی و داخل وریدی این سلول هاانجام شد. بعد از خونگیری، ایمونوگلوبولین های سرم خرگوش به دفعات متعدد در محلول سولفات آمونیوم رسوب داده شدند. قبل و بعد ازرسوب دهی، الکتروفورز پروتئین های سرم و تعیین مقدار آنها با روش برادفورد انجام شد.آنتی بادی های دارای واکنش متقاطع با سلول های مغز استخوان بوسیله چندین بار عمل جذب توسط سلولهای مغز استخوان حذف شدند.در مراحل مختلف جذب، حضور آنتی بادی های ضد سلولی با استفاده از روش ایمو نوفلورسانس غیر مستقیم تعیین گردیده و قدرت کشندگی آنتی بادی ها با واسطه کمپلمان نیز مورد ارزیابی قرار گرفت.
محلول آنتی بادی جذب شده ای که در آزمایشات ایمو نو فلورسانس غیر مستقیم هیچ واکنشی علیه سلول های مغز استخوان نشان نمی دهد واجد آنتی بادی هایی بر علیه سلول های P388D1 می باشد که قادر به کشتن با واسطه کمپلمان این سلول ها نیز می باشند.
آنتی بادی های تهیه شده در این تحقیق را میتوان به منظور تعیین جمعیت سلول های P388D1 یا حذف این سلول ها ازجمعیت سلول های مغز استخوان استفاده نمود.