شناسایی مواد دفعی - ترشحی مراحل لاروی استرتاژیا سیرکومسینکتا در کشت آزمایشگاهی به روش سدیم دودسیل سولفات - پلی آکریل آمید ژل الکتروفورز و ایمونوبلاتینگ

در این مطالعه تولید گوسفند (بره) دهنده (دنور) استرتاژیا سیرکومسینکتا با قرار دادن کرم های بالغ این انگل از طریق کانولا در شیردان گوسفندی که به وسیله جراحی کانولا گذاری شده بود و خوراندن ده هزار نوزاد مرحله سوم عفونی زای (L3) حاصل از کشت مدفوع آن به یک بره 6 ماهه انجام شد. نوزادهای L3حاصل از کشت های مدفوع بره جمع آوری گردید. پس از خارج نمودن این نوزادها از غلاف و میکروب زدایی آنها درمحیط کشت EBSS تکمیل شده با سه نوع آنتی بیوتیک و یک عامل ضد قارچ کشت داده شدند. مایع خارج شده از غلاف (EF) و مواد دفعی-ترشحی (ES) جمع آوری و با استفاده از فیلتر آمیکن (Y-3) سانتریفیوژ و تحت جریان مداوم گاز N2 تغلیظ شدند. پروتئین های مواد EF و ES به روش SDS-PAGE جداسازی و با روش رنگ آمیزی نقره رنگ شدند. پروفیل پروتئین های EF 5 پروتئین غالب با وزن مولکولی 154، 82، 57، 5/35 و 31 کیلودالتون را نشان دادند و پروفیل پروتئین های ES دارای 7 پروتئین غالب با وزن مولکولی 154، 82، 57، 5/44، 5/41، 5/35 و 31 کیلودالتون بودند. فعالیت آنتی ژنیک مواد EF و ES به روش ایمونوبلاتینگ وبا استفاده از سرم بره دنور قبل و بعد از آلودگی انجام شد. در این آزمایش سرم بره آلوده 4 پروتئین 5/44، 5/41، 38 و 24 کیلودالتونی را در مواد ES مشخص کرد. مطالعه اثرات محافظت کنندگی این پروتئین ها ضروری به نظر می رسد.