تشخیص تعیین هویت باکتری های بیماریزای شایع با استفاده از PCR همگانی (Universal PCR) و هضم آنزیم های محدود کننده

در این تحقیق با استفاده از ژن 16s rRNA به عنوان هدف سعی کردیم باکتری های بیماریزای شایع در نمونه های بالینی را تشخیص دهیم. ژن کد کننده 16s rRNA اغلب این باکتری ها تعیین توالی شده اند و مشخص شده است که در همه باکتری ها این ژن دارای مناطق حفاظت شده ای است که با طراحی یک جفت پرایمر عمومی (universal primers) می توان این ژن را از باکتری های مختلف فراوان سازی کرد از آنجایی که محصولات تکثیر شده از باکتری های مختلف دارای الگوی برش متفاوت در برابر آنزیم های محدود الاثر می باشند لذا از این روش جهت شناسایی باکتری ها استفاده می شود. ما سعی کردیم بعضی از نمونه های استاندارد و کلینیکی را توسط این روش (PCR-RFLP) شناسایی و حساسیت آن را با روش کشت مقایسه نماییم.
باکتری های مورد استفاده اغلب از آزمایشگاه رفرانس ایران واقع در بیمارستان بوعلی و یا گروه بیوتکنولوژی دانشکده علوم پزشکی دانشگاه تربیت مدرس تهیه شده اند. نمونه های کلینیکی مرتبط از بیمارستانهای مختلف تهران جمع آوری شده اند. آنزیم Taq DNA polymerase و آنزیمهای اندونوکلئاز محدود الاثر از شرکت سیناژن تهیه گردید. با استفاده از یک جفت پرایمر عمومی (Universal primers) ژن کد کننده 16s rRNA را از 9 باکتری مختلف فراوان سازی و سپس با استفاده از الگوی برش بدست آمده از هضم با آنزیمهای محدود الاثر آنها را شناسایی کردیم.
نتایج نشان می دهد که با این روش می توان 9 باکتری پاتوژن مورد استفاده در این تحقیق را تشخیص و تعیین هویت کرد. حساسیت این روش در مقایسه با روش کشت در 50 نمونه بالینی %92 بود.
آزمایش تشخیص همزمان چند پاتوژن زمانی اهمیت خود را نشان می دهد که شواهد بالینی در تشخیص عامل بیماری کافی یا موثر نباشد روش بکار گرفته در این تحقیق علاوه بر مزیت فوق از سرعت و حساسیت بالایی در مقایسه با روش های سنتی برخوردار می باشد. به نظر می رسد PCR-RFLP یک روش آزمایشگاهی مناسب در کنار سایر روش ها برای تشخیص عوامل بیماریزای شایع انسانی باشد.