کلونینگ و توالی یابی ژن Leishmania homologue of receptors for activated C kinase (LACK)~

لیشمانیوزیس جزء بیماری های عفونی– انگلی مهم دنیاست که توسط تک یاخته های نسجی خونی داخل سلولی اجباری از جنس لیشمانیا ایجاد می شود. ژن LACK یک پروتئین 36 کیلودالتونی است که در فرم های پروماستیگوت و آماستیگوت انگل، در گونه های مختلف لیشمانیا به مقدار بالایی وجود دارد. LACK پاسخ ایمنی سریعی علیه انگل ایجاد می کند؛ بنابراین این ژن برای تهیه آنتی ژن نوترکیب مناسب بوده و انتخاب خوبی به عنوان واکسن DNA علیه لیشمانیا ماژور است، این مطالعه با هدف کلون نمودن ژن LACK لیشمانیا ماژور ایران برای تولید پروتئین نوترکیب برای ساخت واکسن انجام شده است. در این تحقیق DNA از سویه استاندارد ایرانی لیشمانیا ماژور (MRHO/IR/75/ER) استخراج و ژن LACK با استفاده از روش PCR تکثیر شد. سپس قطعه 939 جفت بازی تکثیر شده در پلاسمید pTZ57R/T کلون شد. پلاسمید نوترکیب در باکتری اشرشیاکلی سویه TG1 ترانسفورم و توالی یابی شد. آنالیز تعیین توالی ژن LACK لیشمانیا ماژور کلون شده در پلاسمید pTZ57R/T مشخص کرد که قطعه ای 939 جفت بازی در این پلاسمید کلون شده است و ژن کلون شده، ژن LACK لیشمانیا ماژور است. این سویه ایرانی 89 درصد با سویه موجود در بانک ژنی با کد LmjF28.2740 شباهت دارد. این کلونینگ با روش های PCR و برش آنزیمی تایید شد. نتایج به دست آمده نشان داد که این ژن با موفقیت تکثیر و کلون شده و از این کلون می توان کلون هایی در پلاسمید بیانی پروکاریوتی برای تهیه آنتی ژن نوترکیب و پلاسمید یوکاریوتی برای تهیه واکسن DNA استفاده کرد. این مطالعه راهی برای پیشرفت تولید پلاسمیدهای نوترکیب برای مطالعات آینده است.