تعیین گونه ی فاسیولا با استفاده از روش PCR-RFLP

فاسیولیازیس یکی از بیماری های مشترک انسان و دام است که آسیب های بهداشتی و لطمات اقتصادی زیادی را در مناطق مختلف ایران به وجود می آورد. فاسیولا هپاتیکا و فاسیولا ژیگانتیکا از عوامل شناخته شده فاسیولیازیس هستند که هر کدام چهره ی اپیدمیولوژیک خاصی دارند. شناخت گونه های فاسیولا در انتخاب صحیح روش های کنترل بیماری در یک منطقه نقش بسزایی دارد. با عنایت به اهمیت بهداشتی و اقتصادی این بیماری، مطالعه ی حاضر با هدف تعیین گونه ی انگل در زنجان به شیوه ی مولکولی انجام یافته است.
تعداد 535 کرم بالغ فاسیولا پس از جمع آوری از کبدهای آلوده (گاو و گوسفندهای ذبح شده در کشتارگاه زنجان) در بافر PBS شستشو شدند. نیمه ی پیشین کرم ها به الکل 70 درصد منتقل و تا استخراج اسیدهای نوکلئیک در 20- درجه ی سانتی گراد نگهداری شدند. اسیدهای نوکلئیک نمونه ها به شیوه ی اصلاح شده ی فنل کلروفرم استخراج و در آن ها قطعه ی بین دو ژن 5.8S وS 28 از rDNA با روش PCR تکثیر یافت. چند شکلی قطعه ی ITS2 به روش PCR-RFLP و توالی بازهای آلی آن با تکنیک تعیین توالیDNA تعیین شد.
نتایج PCR-RFLP و مقایسه ی توالی بازهای ناحیه ITS2 با توالی های ثبت شده در بانک ژنی نشان داد که همه ی نمونه های مورد مطالعه، فاسیولا هپاتیکا بودند. هم چنین تعیین توالی نشان داد که در ناحیه ی ITS2 تعداد 361 جفت باز آلی وجود دارد. توالی بازهای ناحیه ITS2 سیزده نمونه در بانک ژنی به شماره های 391412-EU391424 EU ثبت شد.
بر اساس نتایج این مطالعه شواهدی از وجود فاسیولا ژیگانتیکا در زنجان بدست نیامد و کلیه نمونه های مورد بررسی فاسیولا هپاتیکا تشخیص داده شدند.