کلونینگ و آنالیز توالی ژن کدکننده پروتئین متصل شونده به لیپید در بیضه انسان

یکی از پروتئین های اختصاصی متصل شونده به اسیدهای چرب سلول های جنسی در بیضه PERF15 است که در ابتدا در پستانداری مانند رت کشف گردید. این پروتئین از پر تراکم ترین پروتئین های ناحیه اطراف هسته در اسپرم رت است. بررسی محتوی mRNA در بیضه نشان داد کهmRNA ژن کدکننده آن، منحصرا در سلول های میوزی و پس از میوزی بیان می شود. هدف از مطالعه حاضر، تعیین توالی و کلون نمودن PERF15 انسانی می باشد.
به منظور تکثیر ژن انسانی با استفاده از آنالیز کامپیوتری و براساس توالی های ژن انسانی پروتئین 9 (کد دستیابی XM-378035) دو پرایمر اختصاصی طراحی گردید. پس از انجام PCR و الکتروفورز محصول به دست آمده و تعیین توالی آن، ژن به دست آمده در حامل مناسب کلون گردید.
نتایج PCR یک باند 3 کیلو بازی را نشان داد. استخراج این قطعه از ژل، تعیین توالی با استفاده از روش تعیین توالی مستقیم و پرایمرهای اختصاصی ژن، هضم آنزیمی آن با کمک PvuII و مطابقت این ژن با توالی ژن موجود در DNA Data base به طور کامل تایید نمود که این قطعه متعلق به PERF15 انسانی است که تحت عنوان پروتئین 9 نامگذاری شده است. ژن PERF15 انسانی 4 اگزون و 3 اینترون دارد. اگزون اول 24 اسید آمینه، اگزون دوم 57 اسید آمینه، اگزون سوم 34 اسید آمینه، و اگزون چهارم 17 اسید آمینه را کد می کند. سه اینترون این ژن به ترتیب از 2113، 461 و 168 نوکلئوتید تشکیل شده اند.
علیرغم همولوژی موجود بین نواحی اگزونی و توالی های مرزی اگزون- اینترونی، ژن انسانی از نظر اندازه و توالی های مربوط به اینترونها با دو ژن همولوگ خود در رت و موش متفاوت است. با توجه به میزان بالای همولوژی این ژنها می توان عملکرد مشابهی را برای آنها فرض نمود که منوط به انجام آزمایش های بیشتر است.