طراحی و ساخت ناقل خاموش گر RNA تداخل گر (RNAi) نسل دوم برای بررسی کاهش بیان ژن کمک فعال کننده RNA گیرنده استروئیدی (SRA)

روش تداخل RNA یا RNAi بهترین روش خاموش کردن ژن ها در سطح ترانس کریپتومی شناخته شده است، سرطان ها و بیماری های ژنتیکی اهداف مهمی برای توسعه روش های درمانی مبتنی بر RNAi به شمار می روند. برای حل مشکل خاموشی موقتی سیستم های siRNA، RNA های سنجاق سری یا shRNA ها ابداع شدند و نسل جدید shRNA ها به نام shRNAmir است. سازه خاموش گر با ساختار سنجاق سری شبه microRNA (shRNAmir)، رفتاری مشابه یک microRNA طبیعی را درون سلول تقلید می کند. کمک فعال کننده گیرنده استروئیدی (SRA) یکی از تنظیم کننده های گیرنده استروئیدی از جمله گیرنده استروژنی (ER) است. بافت های پروستات، رحم و سینه بیان پایینی از SRA دارند، در حالی که طی تومورزایی آن ها بیان SRA افزایش می یابد، بنابراین امکان شرکت SRA در تومورزایی یا پیشروی توموری وجود دارد.
در مطالعه حاضر از روش RNA تداخل گر یا RNAi برای خاموش نمودن ژن SRA استفاده شد و سازه خاموش گر SRA طراحی و توسط Soe-PCR ساخته شد و سپس در پلاسمید pEGFPC1 که یک ناقل بیانی است کلون گردید. رده سلولی انسانی سرطان پستان (MCF7) با پلاسمید حاصل ترانسفکت شد و بیان SRA در زمان های 24، 72 ساعت و 10روز بعد با Real-Time PCR بررسی شد.
کاهش 60 درصدی در بیان نسبی SRA در تیمارهای 72 ساعت و 10روز بعد مشاهده شد که نشان می دهد shRNAmir-SRA با موفقیت توانسته است بیان ژن هدف مطالعه حاضر را به طور نسبتا پایداری خاموش کند.
با توجه به موفقیت در طراحی و ساخت یک سازه shRNAmir و خاموشی نسبتا پایدار ژن هدف، این سازه برای مطالعات مختلفی در آینده آماده و مناسب به نظر می رسد.