ارزیابی کمی و بهینه سازی تشخیص DNÂ آسپرژیلوس فومیگاتوس در نمونه خون با استفاده از تکنیک Real time PÇR

آسپرژیلوزیس مهاجم عفونت فرصت طلب جدی ناشی از گونه های مختلف قارچ آسپرژیلوس است که اغلب در افراد دارای نقص سیستم ایمنی رخ می دهد. اساسا، تشخیص سریع و زودرس آن، از پیشرفت این عفونت قارچی جلوگیری بعمل می آورد. هدف از این مطالعه تعیین کمی و بهینه سازی DNÂ آسپرژیلوس فومیگاتوس در خون با استفاده از تکنیک Real time PÇR بود.
پنج میلی لیتر خون داوطلب سالم را با رقت های مختلفی از کونیدی های آسپرژیلوس فومیگاتوس (106تا 101) آلوده شد. استخراج DNÂ از خون با استفاده از گلوله شیشه ای و کیت QÏÂmp DNÂ Blood Mini Kit انجام شد. پرایمر و پروب های هیبریدیزاسیون برای تکثیر سکانس های اختصاصی گونه متعلق به ژن 18S rRNÂ آسپرژیلوس فومیگاتوس طراحی و با استفاده از روشReal time و تکنیک FRËT مورد بررسی قرار گرفت.
تمامی واکنش های PÇR با DNÂ دیگر گونه های قارچی منفی بودند که نشان دهنده اختصاصیت 100 درصد این روش بود. آنالیز دمای ذوب آسپرژیلوس فومیگاتوس تنها در یک نقطه حداکثر سیگنال دمایی را با پروب در دمای oÇ 16/69 نشان دادکه به تشخیص آسپرژیلوس فومیگاتوس کمک می کند. حداقل مقدار DNÂ fg) 100) ÇFÜ 101 معادل 10 کونیدی یا سلول در هر واکنش PÇR مشخص گردید که نشان دهنده حساسیت بالای این روش می باشد.
روش Real time PÇR با بکارگیری پروب های هیبریدیزاسیون دارای اختصاصیت و حساسیت بالا برای اندازه گیری بار قارچی جهت تشخیص زودرس و مانیتورینگ درمان می باشد.