بررسی چند شکلی ژنتیکی مکان ژنی MHC کلاس (DRB3) در تعدادی از گاوهای نژاد هلشتاین

جایگاه ژنی مجموعه سازگاری بافتی (MHC) با تولید گلیکوپروتئین های خاص سطح سلولی موجب عرضه آنتی ژن های خارج سلولی به سلول های T یاور+CD4 و در نهایت آغاز پاسخ ایمنی بدن می شود. DRB3 پلی مورف ترین ژن متعلق به کلاس II مکان ژنی MHCاست که در تشکیل شیار اتصال به پپتید شرکت می کند. از آنجا که آلل های مختلف سبب ایجاد شیارهای اتصال متفاوتی که هر کدام مخصوص به یک پپتید خاصی می باشند می شوند، لذا از DRB3 به عنوان یک ژن کاندیدا (مارکر ژنی) در ارتباط با بیماری ها و صفات ایمونولوژیکی در گاو استفاده می شود. از این رو تکنیک PCR-RFLP جهت تعیین میزان تنوع ژنتیکی (پلی مورفیسم) ژن DRB3در سطح وسیعی مورد استفاده قرار گرفته است. در این تحقیق به منظور تعیین میزان پلی مورفیسم آللی در اگزون 2 جایگاه DRB3 از تعداد 175 راس گاو هلشتاین واقع درگاوداری فاز 1و2 مزرعه آستان قدس مشهد نمونه خون جمع آوری و به کمک تکنیک PCR-RFLP تعیین ژنوتیپ شدند. DNA ژنومی از 100 میکرولیتر خون با روش تیوسیانات گوانیدین- سیلیکاژل استخراج گردید. تکثیر ناحیه پلی مورفیک اگزون 2 جایگاه ژنی DRB3 به طول 284 جفت باز با روش Hemi-Nested PCR درطی دو مرحله صورت گرفت. برای برش آنزیمی محصولات PCR، از سه آنزیم I Rsa، III Hae و 21 Bstx استفاده گردید. محصولات هضم شده، توسط الکتروفورز بر روی ژل پلی آکریل آمید 8% جدا و پس از رنگ آمیزی با نیترات نقره تعیین ژنوتیپ گردیدند. تعداد 24 آلل در جایگاه ژنی مربوطه شناسائی شد که آلل های 22*، 8*، 24*، 16*دارای بیشترین فراوانی و به ترتیب هر کدام 7/16% و1/16% و 4/14% و7/12% در جمعیت مورد مطالعه بودند. آلل های (21*،18 *،14*،28*،12*،26*،6*، 2*،13*32*، 37*، 51*، 15*،5*) فراوانی کمتر از2% داشتند. این تحقیق نشان دهنده وجود پلی مرفیسم بالا در اگزون 2 ژن DRB3 در گاوهای هلشتاین ایران می باشد.