تعیین حداکثر غلظت ایمن تزریق داخل ویترهAnti-CTGF Neutralizing Antibody در موش بزرگ آزمایشگاهی

فاکتور رشد بافت همبند (CTGF: Connective Tissue Growth Factor) دارای خاصیت پروفیبروتیک در بیماری های مختلف چشم مانند رتینوپاتی دیابتیک پرولیفراتیو (PDR: Proliferative Diabetic Retinopathy) و پرولیفراتیو ویترئورتینوپاتی (PVR: Proliferative Vitreoretinopathy) می باشد. در مطالعه آزمایشگاهی (In vitro) نشان دادیم که μg/ml 10 از آنتی بادی علیه CTGF به همراه 8/0 میلی گرم از بواسیزوماب در محیط کشت سلولی RPE (Retinal pigmented epithelium) سبب کاهش بروز ژن و پروتئین CTGF می گردد. در مطالعه حاضر که یک مطالعه In vivo می باشد به بررسی حداکثر دوز ایمن Anti-CTGF در زجاجیه (IVAC: Intravitrealinjection of anti-CTGF) در موش بزرگ آزمایشگاهی (Rat) می پردازیم.
روش پژوهش: 45 موش بزرگ آزمایشگاهی رنگی (پیگمانته) بر اساس مقررات ARVO در چهار گروه، میزان μl 2 از IVAC را در غلظت های μg/ml 10 و μg/ml 20 و μg/ml 50 و μg/ml 100 و یک گروه هم به عنوان گروه Sham، μl2 از نرمال سالین دریافت کردند. برای تمامی گروه ها الکترورتینوگرام (ERG) در روزهای اول و هفتم و بیست و هشتم انجام شد. پس از کشتن موش ها، گلوب های انوکلئه شده مورد بررسی های پاتولوژی، ایمونوهسیتوشیمی (Immunohistochemistery، GFAP) و آزمایش TUNEL (Terminal transferase dUTP nick end-labeling assay) قرار گرفتند.
در شرایط اسکوتوپیک، آمپلیتود موج b، مربوط به پاسخ گیرنده های نوری استوانه ای و آمپلیتود موج b در شرایط Maximum Combined در گروه μg/ml 100 قبل از تزریق به ترتیب μv 2/71±89/111 و 58/55±57/178 بود که به طور معناداری در روز 28 کاهش یافت (به ترتیب μv 59/52±31/79 و μv 61/41±73/128 با 05/0P<). در سایر گروه ها با مقادیر کم تر IVAC و هم چنین در گروه شاهد، این اثر مشاهده نشد. کاهش در موج Oscillatory Potential نیز در روزهای 7 و 28 در گروه μg/ml 100 دیده شد (قبل از تزریق: μv 05/18±24/46 و روز هفتم: μv 95/15±03/30، 05/0P< و روز 28: μv 20/12±79/29 با 001/0P<). در بررسی بافت شناسی کاهش معناداری در تعداد سلول های گانگلیونی شبکیه درگروه E مشهود بود. در آزمایش ایمونوهیستوشیمی GFAP reactivity، در هیچ یک از گروه ها نسبت به گروه کنترل اختلاف معناداری دیده نشد ولی در آزمایش TUNEL، آپوپتوزیس در لایه های داخلی شبکیه در گروه با غلظت μg/ml 100 مشهود بود.
با توجه به نتایج حاصل از تست ERG، بافت شناسی و TUNEL به نظر می رسد که تزریق داخل زجاجیه Anti-CTGF با غلظت μg/ml 100 در موش بزرگ آزمایشگاهی برای شبکیه مضر می باشد. غلظت μg/ml 50 و کم تر در مطالعات بعدی که از لحاظ اثربخشی تزریق داخل زجاجیه Anti-CTGF انجام خواهد شد، توصیه می گردد.