ساخت حامل ویروسی نوترکیب ناقل shRNA اختصاصی علیه ژن Fndc5 موشی جهت انتقال به سلول های بنیادی جنینی

RNA مداخله گر یک مکانیسم کارآمد در کاهش بیان ژن ها و تعیین عملکرد ژن ها است. وکتورهای لنتی ویروسی ابزارهای مناسبی برای انتقال ژن های خارجی به طیف گسترده ای از سلول های پستانداران هستند. پروتئین Fndc5 یک پروتئین گلیکوزیله غشایی است که بیان آن طی روند تمایز قلبی و عصبی سلول های بنیادی جنینی موشی (mESCs) افزایش می یابد. در این مطالعه به بررسی قابلیت کاهش بیان ژن Fndc5 در mESCs با استفاده از وکتورهای لنتی ویروسی بیان کننده shRNA می پردازیم.
به این منظور دو توالی مشخص shRNA علیه ناحیه کد کننده رونوشت Fndc5 و یک توالی shRNA کنترل به عنوان کنترل منفی طراحی و سنتز شد. قطعات shRNA سنتزی پس از هیبرید شدن درون وکتور لنتی ویروسی در پایین دست پروموتر H1 القا شونده توسط تتراسایکلین کلون شدند. وکتور لنتی ویروس نوترکیب درون سلول های HEK293T بسته بندی شد و mESCs توسط ذرات ویروسی ترانسداکت شدند. بیان shRNA در سلول های ترانسداکت شده توسط 48 ساعت تیمار با داکسی سایکلین القا گردید.
سنجش میزان بیان رونوشت Fndc5 توسط Real-time PCR در سلول های ترانسداکت شده با ویروس های نوترکیب حامل هر دو shRNA، کاهش بیان معنادار نسبت به گروه کنترل نشان داد.
در مجموع هدف قرار دادن ژن Fndc5 از طریق مکانیسم RNA مداخله گر می تواند به عنوان یک ابزار کارآمد در کاهش بیان این ژن در لاین سلولی ترانسداکت شده به منظور بررسی عملکرد Fndc5 مورد توجه قرار بگیرد.