کلون کردن اپی توپ های خطی تحریک کننده ی لنفوسیت T آنتی ژن EG95 اکینوکوکوس گرانولوزوس در وکتور pGEX4t1 و بررسی بیان آن با روش SDS-PAGE

چکیده:
زمینه و هدف
انگل اکینوکوکوس گرانولوزوس عامل بیماری مشترک بین انسان و دام به نام کیست هیداتیک یا هیداتیدوزیس است؛ موفق ترین واکسن نوترکیب علیه این بیماری از کلون کردن ژن کد کننده آنتی ژن 25 کیلو دالتونی آن یعنی EG95 در وکتور pGEX می باشد که ایمنی سلولی و همورال قابل توجهی را در گوسفندان ایجاد کرده است اما با توجه به نقش ایمنی سلولی TH1 در غلبه بر این بیماری و نقش اپی توپ های خطی در تحریک این نوع سیستم ایمنی جهت بهینه سازی شرایط واکسن موجود در مطالعه حاضر تنها توالی کد کننده اپی توپ های خطی تحریک کننده لنفوسیت T این آنتی ژن کلون و بیان شد.
مواد و روش ها
با استفاده از نرم افزار IEDB توالی کد کننده ی اپی توپ های خطی آنتی ژن EG95 پیش بینی و سنتز شد. تکثیر قطعه موردنظر با PCR انجام و بعد از هضم آنزیمی آن و وکتور pGEX4T1 با آنزیم xhoI، در وکتور با روش شوک حرارتی کلون گردید. کلونی های مثبت با روش colony PCR با استفاده از پرایمرهای مختلف انتخاب شده و بیان پروتئین نوترکیب در سلول BL21 با 10%SDS-PAGE موردبررسی قرار گرفت.
نتایج
تکثیر توالی کد کننده اپی توپ های EG95 با PCR انجام و قطعه موردنظر در وکتور pGEX4T1 کلون گردید. تایید پلاسمید نوترکیب با colony PCR و اختلاف اندازه وکتور طبیعی و نوترکیب صورت گرفت. بیان پروتئین نوترکیب آنتی ژن نیز به وضوح با SDS-PAGE مشخص شد.
نتیجه گیری
قطعه EG95 به طور موفقیت آمیزی در وکتور pGEX4T1 کلون و در سلول BL21 بیان شد.
زبان:
فارسی
صفحات:
311 تا 318
لینک کوتاه:
magiran.com/p1635295 
دانلود و مطالعه متن این مقاله با یکی از روشهای زیر امکان پذیر است:
اشتراک شخصی
با عضویت و پرداخت آنلاین حق اشتراک یک‌ساله به مبلغ 990,000ريال می‌توانید 70 عنوان مطلب دانلود کنید!
اشتراک سازمانی
به کتابخانه دانشگاه یا محل کار خود پیشنهاد کنید تا اشتراک سازمانی این پایگاه را برای دسترسی نامحدود همه کاربران به متن مطالب تهیه نمایند!
توجه!
  • حق عضویت دریافتی صرف حمایت از نشریات عضو و نگهداری، تکمیل و توسعه مگیران می‌شود.
  • پرداخت حق اشتراک و دانلود مقالات اجازه بازنشر آن در سایر رسانه‌های چاپی و دیجیتال را به کاربر نمی‌دهد.
دسترسی سراسری کاربران دانشگاه پیام نور!
اعضای هیئت علمی و دانشجویان دانشگاه پیام نور در سراسر کشور، در صورت ثبت نام با ایمیل دانشگاهی، تا پایان فروردین ماه 1403 به مقالات سایت دسترسی خواهند داشت!
In order to view content subscription is required

Personal subscription
Subscribe magiran.com for 50 € euros via PayPal and download 70 articles during a year.
Organization subscription
Please contact us to subscribe your university or library for unlimited access!