کلونینگ و بیان پروتئین سطحی HER2 انسانی در سطح سلول های یوکاریوتی با استفاده از تکنیک های ترانسفکشن و ترانسداکشن به منظور تولید تومور در موش

سرطان پستان، پنجمین عامل شایع مرگ ومیر در سراسر دنیا بوده و در بین زنان شایع ترین سرطان کشنده است. HER2 یک آنتی ژن سطحی است که در حدود 30درصد سرطان های پستان، بیان افزایش یافته دارد. هدف این مطالعه کلونینگ ژن گیرنده HER2 در وکتور بیانی +pCDNA3.1/Hygro و بیان این پروتئین در سلول های یوکاریوتی LL2 و ایجاد مدل موشی سرطان پستان می باشد.
با تخلیص RNA، تکثیر ژن HER2 و کلون کردن آن در وکتور +pCDNA3.1/Hygro، سازه بیان کننده ژن HER2 ایجاد و ازطریق توالی یابی تایید گشت. در مرحله بعد، این سازه به سلول های سرطانی موشی LL2 منتقل گردید. برای ایجاد رده سلولی پایدار، سلول های ترانسفکته به مدت یک ماه در محیط حاوی آنتی بیوتیک هیگرومایسین قرار داده شدند. سلول های حاصله، سرعت رشد کمی داشتند و منجر به ایجاد تومور نشدند. در کنار این کار، از سلول های LL2 ترانسداکت شده با لنتی ویروس حاوی HER2 استفاده کردیم که حدود 106 سلول ترانسداکت شده به موش های C57BL/6 به روش زیرجلدی تزریق گردید. ده تا دوازده روز بعد از تزریق، تومور قابل لمس بود.
ژن HER2 با موفقیت تکثیر و در وکتور پلاسمیدی +pCDNA3.1/Hygro کلون شد. تزریق سلول های LL2 ترانسداکت و ترانسفکت شده با سازه حاوی HER2 به موش، نشان داد که فقط سلول های LL2 ترانسداکت شده با وکتور ویروسی pLEX HER2 قادر به بیان پایدار HER2 انسانی هستند.
با کلونینگ و بیان HER2 در سلول های یوکاریوتی LL2 می توان مدل سرطان پستان HER2+ در موش ایجاد کرد.