بررسی بیان پروتئین های P16 و DAPK در رده ی سلولی لوسمیک HL60 در مجاورت با آلکالوئید گیاهی

چکیده:
مقدمه
تغییرات اپی ژنتیک و از آن جمله متیلاسیون DNA در ناحیه پروموتور ژن های سرکوبگر تومور به عنوان یکی از مهم ترین مکانیسم های ایجاد بدخیمی های خونی مطرح است. امروزه استفاده از مواد طبیعی که دارای اثر هایپومتیلاسیون بر DNA می باشند مورد توجه فراوان قرار گرفته است. Harmine یکی از آلکالوئیدهای مشتق از گیاه اسپند است که دارای خاصیت هیپومتیله کنندگی و ضدتکثیری بر روی رده های سلولی لوسمیک می باشد. از آنجائی که ژن های P16 و DAPK بعنوان ژن های سرکوبگر تومور در برخی بدخیمی های خونی بصورت هایپرمتیله می باشند، لذا در این مطالعه تاثیر آلکالوئید گیاهی Harmine بر تکثیر رده سلولی HL60 و بیان این دو ژن در این رده سلولی بررسی شد تا گامی در جهت روشن شدن مکانیسم اثر این داروی گیاهی و استفاده از مواد طبیعی در درمان سرطان های خون برداشته شود.

مواد و روش ها
رده سلولی لوسمیک HL-60 در فلاسک حاوی محیط کشت RPMI، سرم جنینی گوساله، پنی سیلین و استرپتومایسین در دمای 37 درجه و دی اکسید کربن 5 درصد به مدت 5 روز کشت داده شد. تاثیر غلظت های مختلف Harmine بر تکثیر سلولی در مقایسه با 5-azacytidine به روش دستی و با استفاده از لام نئوبار و رنگ تریپان بلو در ساعات مختلف 24 ساعت ، 48 ساعت و 72 ساعت تعیین گردید. بیان ژن های P16 و DAPK پس از ساخت cDNA و طراحی پرایمرهای اختصاصی در سایت NCBI، با روش Real-time PCR بررسی شد. آنالیز آماری داده ها با نرم افزار SPSS انجام گرفت.

یافته ها
نتایج بدست آمده نشان داد که Harmine در تمامی غلظت ها موجب کاهش تکثیر سلولی می شود. بطوری که Harmine در غلظت های g/mlμ 25.6 و 102.4 و پس از 72 ساعت ، تکثیر سلولی را در مقایسه با نمونه کنترل به ترتیب به میزان50 و 78 درصد کاهش داد (p<0.001). همچنین Harmine موجب افزایش بیانDAPK می شود اما این افزایش به لحاظ آماری فقط در غلظت g/mlμ 102.4 و فقط در مورد DAPK معنی دار است (p<0.005).
بحث و نتیجه گیری
نتایج این مطالعه نشان داد کهHarmine دارای خاصیت ضدتکثیری وابسته به دوز و زمان بر روی رده سلولی لوسمیکHL60 است. همچنین Harmine موجب افزایش بیانDAPK می شود که این مسئله با توجه به نتایج دیگر مطالعات می تواند ناشی از هایپومتیله شدن پروموتور این ژن باشد. مطالعات بیشتر جهت روشن تر شدن مکانیسم اثر Harmine بر سلول های سرطانی لازم است.
کلیدواژگان:
زبان:
فارسی
صفحات:
28 تا 33
لینک کوتاه:
magiran.com/p1643400 
دانلود و مطالعه متن این مقاله با یکی از روشهای زیر امکان پذیر است:
اشتراک شخصی
با عضویت و پرداخت آنلاین حق اشتراک یک‌ساله به مبلغ 990,000ريال می‌توانید 70 عنوان مطلب دانلود کنید!
اشتراک سازمانی
به کتابخانه دانشگاه یا محل کار خود پیشنهاد کنید تا اشتراک سازمانی این پایگاه را برای دسترسی نامحدود همه کاربران به متن مطالب تهیه نمایند!
توجه!
  • حق عضویت دریافتی صرف حمایت از نشریات عضو و نگهداری، تکمیل و توسعه مگیران می‌شود.
  • پرداخت حق اشتراک و دانلود مقالات اجازه بازنشر آن در سایر رسانه‌های چاپی و دیجیتال را به کاربر نمی‌دهد.
دسترسی سراسری کاربران دانشگاه پیام نور!
اعضای هیئت علمی و دانشجویان دانشگاه پیام نور در سراسر کشور، در صورت ثبت نام با ایمیل دانشگاهی، تا پایان فروردین ماه 1403 به مقالات سایت دسترسی خواهند داشت!
In order to view content subscription is required

Personal subscription
Subscribe magiran.com for 50 € euros via PayPal and download 70 articles during a year.
Organization subscription
Please contact us to subscribe your university or library for unlimited access!