طراحی و ساخت کلونینگ وکتور حاوی قطعه فیوژنی دو ژن hspX و tb 10.4 مایکوباکتریوم توبرکلوزیس

سل از مهم ترین بیماری های عفونی و از شایع ترین علل مرگ و میر در دنیا خصوصا در کشورهای در حال توسعه می باشد که توسط مایکوباکتریوم توبرکلوزیس ایجاد می شود. طراحی و ساخت واکسن های جدید بر علیه مایکوباکتریوم توبرکلوزیس تنها راه موثر در پیشگیری و کنترل آن می باشد. هدف از این مطالعه طراحی و ساخت کلونینگ وکتور با استفاده از فیوژن ادغام دو ژن hspX و tb10.4 مایکوباکتریوم توبرکلوزیس می باشد.
ابتدا قطعه tb10.4 با روش PCR تکثیر، با استفاده از آنزیم های محدودالاثر مناسب هضم و در پلاسمید pcDNA3.1+ کلون شد. سپس قطعه hspX با PCR تکثیر و با آنزیم های محدودالاثر HindIII و BamHI هضم شد. پلاسمید نوترکیب pcDNA3.1+/tb10.4 نیز با آنزیم های فوق هضم و قطعه hspX در hspX در وکتور نوترکیب مذکور ساب کلون و در باکتری E.coli سویه TOP 10 ترانسفورم شد. تایید کلونی های نوترکیب با کلونی-PCR، هضم آنزیمی و تعیین توالی صورت گرفت.
محصولات PCR و هضم آنزیمی بر روی ژل آگاروز الکتروفورز شد که وجود قطعات tb10.4 و hspX با اندازه bp 291 جفت بازو bp 435جفت باز به ترتیب مشاهده شد. نتایج تعیین توالی 100% همولوژی با توالی های ژن های hspX و tb10.4 مایکوباکتریوم توبرکلوزیس سویه مذکور H37Rv ثبت شده در بانک ژنی را نشان دادند.
کلونینگ دو ژن hspX و tb10.4 مایکوباکتریوم توبرکلوزیس در وکتور pcDNA3.1+ به درستی انجام شد. این وکتور می تواند در آینده پس از تایید بیان آن در سلول های یوکاریوتی، به عنوان کاندید DNA واکسن DNA واکسن در القای سیستم ایمنی در مدل های آزمایشگاهی مورد استفاده قرار گیرند