تشخیص و افتراق سریع فاسیولا هپاتیکا و فاسیولا ژیگانتیکا با استفاده از روش loop-mediated Isothermal Amplication

فاسیولا هپاتیکا و فاسیولا ژیگانتیکا فلوک های کبدی شایعی بوده که روی انسان ها و دام ها در تمام نقاط جهان اثرگذار هستند. در مطالعه حاضر ما تکنیک سریع loop-mediated isothermal amplification (LAMP) را در تشخیص و افتراق گونه های فاسیولا ارزیابی نمودیم.
تعداد 50 کرم فاسیولا از کبد گاو و گوسفند کشتارگاه های استان مازندران جداسازی شدند. تعداد 8 پرایمر جهت تکثیر ناحیه ژنی 28S ribosomal RNA برای واکنش LAMP برای گونه های فاسیولا طراحی گردید. واکنش LAMP در حجم μI 20 تحت شرایط تک دمایی در0C 60 به مدت 90 دقیقه انجام گرفت. نتایج تکثیر با دیدن رسوب با استفاده از چشم غیر مسلح، استفاده از رنگ فلوئورسانس و ژل الکتروفورز بررسی شد. اختصاصیت روش LAMP برای فاسیولا با استفاده از DNA انگل های دیکروسلیوم دندریتیکم، تریکواسترونژیلوس کالابریفورمیس و اکینوکوکوس گرانولوزوس مورد سنجش قرار گرفت. جهت ارزیابی محدودیت تشخیص روش LAMP برای تعیین جنس فاسیولا رقت سریالی از DNA استخراج شده مورد استفاده قرار گرفت.
واکنش مثبت LAMP با استفاده از پرایمرهای اختصاصی دو گونه تعداد زیادی باند در سایزهای متفاوت در دمای 0C60 طی مدت 90 دقیقه تولید نمود. شرایط مطلوبی بدون هیچ واکنشی با سایر DNA انگل ها ایجاد گردید. محدودیت تشخیص روش LAMP تا pg 1 تعیین گردید. نتایج تشخیص رسوب و رنگ فلوئورسانس با الکتروفورز با ژل آگارز همخوانی داشتند.
استنتاج: نتایج ما نشان دادند که روش LAMP یک روش سریع، آسان، کم هزینه با اختصاصیت بالا و معتبر جهت افتراق گونه های فاسیولا در مطالعات اپیدمیولوژیکی و بالینی فاسیولوزیس انسانی و دامی در مناطق اندمیک می باشد.