جداسازی و همسانه سازی ژن ureE هلیکوباکتر پیلوری در ناقل بیانی pIRES2-DSRed به منظور ایجاد واکسن ژنی

هلیکوباکتر پیلوری به عنوان یکی از عوامل زخم معده و ایجادکننده سرطان معده قادر است با دارابودن آنزیم اوره آز، در محیط اسیدی معده سال ها زندگی کند. این آنزیم به منظور فعالیت کاتالیتیکی خود، بهNi2+ و گروهی از پروتئین های کمکی از جمله ureE نیازمند است. اوره آز نه تنها فاکتوری لازم برای کلنیزه شدن هلیکوباکتر پیلوری است، بلکه با مکانیزم های مختلفی باعث بیماری زایی می شود. با توجه به شیوع بالای این باکتری، یافتن راهی برای پیشگیری از وقوع عفونت ضروری به نظر می رسد. هدف از این مطالعه، همسانه سازی ژن ureE هلیکوباکتر پیلوری در ناقل بیانی pIRES2-DSRed به منظور ایجاد واکسن ژنی بود.
روش تحقیق: در این مطالعه تجربی، ابتدا قطعه ژن ureE به روش PCR تکثیر گردید و با کلون سازی T/A درون وکتور pTZ کلون شد. ساب کلونینگ این ژن در وکتور pIRES2-DSRed با استفاده از آنزیم T4-لیگاز انجام شد و در باکتری E. coli سویه Tpo10F ترانسفرم و تکثیر شد. سازواره حاصل که کاندیدای واکسن ژنی است، برای بررسی بیان ژن در سیستم یوکاریوتی، به روش الکتروپوریشن به سلول های CHO منتقل گردید. بررسی بیان ژن ureE در سلول های جانوری با SDS-PAGE مورد ارزیابی قرار گرفت.
همسانه سازی ژن ureE در دو وکتور تکثیری pTZ و بیانی pIRES2-DSRed، با روش های PCR، هضم آنزیمی و تعیین توالی تایید شد. نتایج SDS-PAGE موید بیان موفقیت آمیز ژن ureE در سیستم یوکاریوتی سلول های CHO بود.
سازواره ژنی نوترکیب pIRES2-DSRed-ureE قادر به تولید موفق پلی پپتید حاصل از بیان ژن ureE هلیکوباکتر پیلوری در سلول های جانوی می باشد. با توجه به اینکه محصول پروتئینی ژن ureE یکی از پروتئین های مهم باکتری مذکور است، بنابراین می توان از سازواره ایجادشده در این مطالعه، به عنوان کاندیدای واکسن ژنی بر ضد هلیکوباکتر پیلوری در آینده استفاده کرد.