کلونینگ و بیان ژن نانوبادی علیه انتروتوکسین B باکتری استافیلوکوکوس اورئوس

پیام:
چکیده:
زمینه و هدف
باکتری استافیلوکوکوس اورئوس با ترشح انتروتوکسین های متعدد باعث بیماری های مختلف می شود، به همین دلیل روش های موثر و آسان شناسایی انتروتوکسین ها موردنیاز است. امروزه غالبا از روش های ایمونوشیمیایی برمبنای آنتی بادی های مونوکلونال استفاده می شود. در سرم خون خانواده شترسانان آنتی بادی های زنجیره سنگین یافت شده که VHH یا نانوبادی نامیده می شوند. خصوصیات منحصربه فرد این آنتی بادی ها از قبیل اتصال به مولکول های کوچک نظیر توکسین ها، آن ها را کاندیدهای جذابی برای توسعه ترکیبات دارویی نموده است. برای دستیابی به مولکول VHH علیه انتروتوکسین B استافیلوکوکوس تحقیق حاضر انجام شده است.
مواد و روش ها
غنی سازی کتابخانه ی فاژی به منظور جداسازی نانوبادی های اختصاصی علیه توکسین در کارهای قبل انجام شده بود. در ادامه وکتور pCANTAB 5E حاوی VHH از باکتری E.coli سویه xl1blue، استخراج و پس از انجام واکنش PCR با پرایمرهای مربوطه، ساب کلونینگ در وکتور بیانی (+)pET21a با مکان های برش NdeI و XhoI صورت گرفت. ترانسفورماسیون وکتور درون باکتری E.coli سویه بیانی (DE3) BL2I انجام شد. سپس سلول ها تحت القای IPTG قرار گرفتند و زمان و شرایط تولید بهینه گردید، درنهایت بیان پروتئین توسط تکنیک SDS-PAGE و وسترن بلات مورد ارزیابی قرار گرفت.
نتایج
برای تایید کلونینگ ژن نانوبادی درون وکتور pET21a(+)، توالی نوکلئوتیدی ژن آنالیز و ترانسفورم به باکتری E.coli سویه DE3))BL21 با موفقیت انجام شد. پس از القاء، پروتئین فعال درون سلول توسط روش SDS-PAGE مشاهده و توسط لکه گذاری وسترن تایید شد.
نتیجه گیری
در این تحقیق کلونینگ، ساب کلونینگ و بیان ژن نانوبادی انجام شد. تولید این پروتئین نوترکیب می تواند گامی مهم در جهت توسعه روش های درمانی جدید و یا تولید واکسن علیه انتروتوکسین B باکتری استافیلوکوکوس اورئوس بردارد.
زبان:
فارسی
صفحات:
496 تا 503
لینک کوتاه:
magiran.com/p1666908 
دانلود و مطالعه متن این مقاله با یکی از روشهای زیر امکان پذیر است:
اشتراک شخصی
با عضویت و پرداخت آنلاین حق اشتراک یک‌ساله به مبلغ 990,000ريال می‌توانید 70 عنوان مطلب دانلود کنید!
اشتراک سازمانی
به کتابخانه دانشگاه یا محل کار خود پیشنهاد کنید تا اشتراک سازمانی این پایگاه را برای دسترسی نامحدود همه کاربران به متن مطالب تهیه نمایند!
توجه!
  • حق عضویت دریافتی صرف حمایت از نشریات عضو و نگهداری، تکمیل و توسعه مگیران می‌شود.
  • پرداخت حق اشتراک و دانلود مقالات اجازه بازنشر آن در سایر رسانه‌های چاپی و دیجیتال را به کاربر نمی‌دهد.
دسترسی سراسری کاربران دانشگاه پیام نور!
اعضای هیئت علمی و دانشجویان دانشگاه پیام نور در سراسر کشور، در صورت ثبت نام با ایمیل دانشگاهی، تا پایان فروردین ماه 1403 به مقالات سایت دسترسی خواهند داشت!
In order to view content subscription is required

Personal subscription
Subscribe magiran.com for 50 € euros via PayPal and download 70 articles during a year.
Organization subscription
Please contact us to subscribe your university or library for unlimited access!