طراحی و ساخت کنترل داخلی جهت تشخیص یرسینیا پستیس بوسیله PCR

یرسینیا پستیس، عامل طاعون، باکتری گرم منفی، غیر متحرک و کند رشد متعلق به خانواده انتروباکتریاسه می باشد. بر اساس طبقه بندی CDC این باکتری به دلیل نرخ بالای مرگ و میر و انتقال آسان انسان به انسان در دسته A عوامل بیوتروریسمی قرار گرفته است. علی الرغم حساسیت و دقت بالای PCR، ممکن است نتایج منفی کاذب به علت وجود مهارکننده موجود در نمونه های بالینی مشاهده شود. هدف از این مطالعه ساخت کنترل داخلی جهت تشخیص اختصاصی یرسنیا پستیس می باشد.
در این پژوهش، پرایمر های تشخیصی بر اساس ناحیه حفاظت شده ای از ژن هایcaf1 و pla توسط نرم افزار Allele ID 7.6 طراحی گشت. پرایمرهای هیبرید برای کنترل داخلی با استفاده از توالی ژن AOX1 مخمر پیکیا پاستوریس و ژن هدف طراحی شد. واکنش PCR بر روی DNA ژنومیک یرسینیا پستیس انجام گشت. محصول آن جهت ساخت کنترل داخلی در وکتور pTZ57R/T قرار گرفت. سپس، عملکرد کنترل داخلی توسط پرایمرهای تشخیصی مورد بررسی قرار گرفت.
در الکتروفورز محصول PCR ژن هایcaf1 و pla به ترتیب باندهایی به طول 117 و 136 جفت باز و نتیجه تکثیر کنترل داخلی caf1-IC و pla-IC به ترتیب قطعاتی با طول 227 و 250 جفت باز رویت گردید، بنابراین محصول کنترل داخلی از نظر اندزه اختلاف مناسبی با محصول ژن های هدف دارا می باشد.
نتایج نشان داد کنترل مثبت داخلی ابزاری موثر برای جلوگیری از ننتایج منفی کاذب و تایید صحت نتایج می باشد.