بررسی میزان ترشح خارج سلولی پپتید ضد سرطان VEGF111b در سلول های انسانی HEK-293

VEGF111b یک ایزوفرم جدید از فاکتورهای رشد اندوتلیال عروقی (VEGF) است که اخیرا به عنوان یک داروی ضد سرطان مطرح شده است. هدف مطالعه حاضر بررسی میزان ترشح این پروتئین از دیواره سلول های HEK293 به منظور تولید تجاری این فاکتور نوترکیب است.
توالی VEGF111b توسط نرم افزار OLIGO و اطلاعات ژن بانک NCBI طراحی و داخل وکتور pBUD.cE4.1کلون شد. وکتور نوترکیب pBUD.VEGF111b با استفاده از کیت لیپوفکتامین به داخل سلول های HEK293 ترانسفکت شد. تولید VEGF111b 48 ساعت بعد از ترانسفکشن در عصاره لیز سلولی توسط وسترن بلاتینگ و آنتی بادیHuman anti-VEGF بررسی شد. میزان ترشح VEGF111b در عصاره لیز سلولی و محیط کشت سلولی به روش ELISA اندازه گیری گردید.
کلونیتگ صحیح قطعهVEGF111b در وکتور pBUD.cE4.1 توسط هضم آنزیمی و ژل الکتروفورز تائید شد. مشاهده باند شارپ 12 کیلودالتن در نتایج وسترن بلات عصاره لیز سلولی نشان گر تولید پپتید نوترکیب VEGF111b در سلول های HEK293 بود. نتایج الایزا در جذب نوری 450 نانومتر برای VEGF111bدر محیط کشت سلولی و عصاره لیز سلولی به ترتیب برابر با 2/81±19/20 pg/ml و pg/ml7/42± 32/87 بود. و در نمونه های کنترل منفی بیان VEGF-111b مشاهده نشد.
یافته های این مطالعه نشان گر قابلیت بالای انتقال و ترشح VEGF111b از دیواره سلول های HEK293 به محیط کشت سلولی بدون شکستگی و هضم پروتئولیتیکی است. به نظر می رسد تولید تجاری این پپتید دارویی و تخلیص از محیط کشت سلولی HEK293 با بازدهی بالا امکان پذیر باشد.