تشخیص مولکولی گونه ی Biscogniauxia mediterranea، عامل بیماری ذغالی بلوط، با استفاده از آغازگرهای اختصاصی

گونه ی Biscogniauxia mediterranea، عامل بیماری ذغالی بلوط، به عنوان یکی از عوامل اصلی دخیل در زوال بلوط در ایران معرفی شده است. با این حال اطلاعاتی در مورد پراکنش، دامنه ی میزبانی، روش های انتشار و انتقال عامل بیماری در مناطق آلوده و همچنین احتمال شیوع بیماری در سایر مناطق جنگلی ایران در دسترس نمی باشد. تحقیق حاضر با هدف توسعه ی یک روش مولکولی مبتنی بر واکنش زنجیره ای پلی مرازی جهت تشخیص گونه ی B. mediterranea براساس آغازگرهای اختصاصی گونه، اجرا گردید. بدین منظور نمونه برداری از درختان بلوط با علایم بیماری ذغالی در استان ایلام صورت گرفت. عامل بیماری با استفاده از تکنیک های متعارف در بیماری شناسی گیاهی جداسازی و خالص سازی گردید. جدایه های Biscogniauxia براساس ویژگی های ریخت شناختی مرحله ی جنسی و توالی یابی ناحیه ITS-rDNA گونه ی B. mediterranea شناسایی گردیدند. داده های توالی ناحیه ی ITS-rDNA برای کلیه ی گونه های Biscogniauxia موجود در بانک ژن دریافت و همراه با توالی های ایجاد شده در این تحقیق زیر هم چینی و یک جفت آغازگر اختصاصی (BmF/BmR) با طول قطعه ی مورد انتظار400 جفت باز، برای تشخیص مولکولی B. mediterranea طراحی گردید. کارایی جفت آغازگر طراحی شده با استفاده از DNA جدایه های B. mediterranea و دیگر گروه های قارچی جداسازی شده از بافت های درختان بلوط طی واکنش زنجیره ای پلی مرازی ارزیابی گردید. نتایج حاصل از بررسی محصول واکنش روی ژل آگارز نشان داد که قطعه 400 جفت بازی فقط از جدایه های گونه ی B. mediterranea تکثیر می شود. آغازگرهای اختصاصی طراحی شده در این تحقیق در برنامه های مربوط به ردیابی عامل بیماری، مطالعه ی پراکنش، دامنه ی میزبانی و روش های انتشار عامل بیماری قابل استفاده خواهند بود.