کلون سازی و بیان ژن LTP2 گندم فلات در گیاه لوبیا و بررسی اثرات ضد میکروبی آن

پروتئین های انتقال دهنده لیپید، پپتید های کوچک و غنی از سیستئین بوده و بر اساس وزن مولکولی به دو گروه LTP1 و LTP2 تقسیم می شوند. این پروتئین ها دارای فعالیت بیولوژیکی مختلف بوده و همچنین در مکانیسم دفاعی گیاهان نیز نقش دارند . با بررسی داده های میکرواری حاصل از آزمایش های مختلف مشخص شده که ژن های LTP در برابر تنش های زیستی و غیر زیستی افزایش یا کاهش بیان داشته-اند. در این تحقیق به منظور بررسی و مشخص کردن میزان بروز و تاثیر ژن LTP در مقاومت گندم نان و جو نسبت به بیماری graminearum Fusarium، Puccinia، Ustilago چهار کتابخانه میکرواری با ایزولاین مقاوم و حساس از پایگاه داده NCBI گرفته شده و نمودار الگوی بیانی ژن های LTP رسم شد. رسم نمودار نشان داد که ژن های مختلف LTP در ارقام مقاوم و حساس نسبت به این بیماری ها اختلاف بیان نشان داده اند. در نتیجه ژن LTP را می توان به عنوان یکی از عوامل موثر در مقاومت معرفی کرد و عنوان نمود که تفاوت در الگوی بیان این ژن در ارقام مقاوم و حساس پس از آلودگی با بیماری ممکن است نقش اصلی را در مکانیسم های مقاومت به بیماری در گندم و جو داشته باشد. برای ساخت سیستم تظاهر ژن LTP2، ژنLTP2 جدا شده از گندم فلات به پلاسمید pBISN1-IN ترنسفرم شده و لایگیشن انجام شد. پلاسمید نوترکیب در باکتری E.coli سویه DH5α کلون شد. برای بررسی کارایی سیستم بیانی ساخته شده ابتدا پلاسمید نوترکیب استخراج و به اگروباکتریوم سویه LBA4404 منتقل و سپس با استفاده از روش اگرواینفیلتریشن به گیاه لوبیا انتقال داده شد. بیان این سیستم در سطح RNA بررسی شد و هم-چنین با بررسی میزان پروتئین فعال و محلول در برگ تزریق شده با پلاسمید نوترکیب بیان و عملکرد پروتئین تایید شده و پروتئین شیمری خاصیت ضد باکتریایی بر روی Staphylococcus aureus را نیز نشان داد.