بیان بسیار بالای قطعه C سم تتانوس در اشرشیا کلی
نویسنده:
نوع مقاله:
مقاله پژوهشی/اصیل (دارای رتبه معتبر)
چکیده:
قطعه C، انتهای کربوکسیل زنجیره سنگین سم تتانوس می باشد که می تواند پاسخ ایمنی علیه دوز کشنده این سم را تحریک نماید. این پلی پپتید میتواند به عنوان کاندیدای واکسن علیه عفونت تتانوس که توسط باکتری کلستریدیوم تتانی ایجاد می شود مطرح شود. این مطالعه بر روی مقایسه بیان قطعه C سم تتانوس در سلول BL21(DE3)pLysS که تحمل بالایی به سم تتانوس دارد با دو وکتور pET22b و pET28a به کمک آنالیزسدیم دودسیل سولفات پلی آکریل آمید ژل و وسترن بلات انجام شد. پس از استخراج DNA سویه هاروارد CN49205 کلستریدیوم تتانی، ژن هدف بکمک واکنش زنجیری پلیمراز تکثیر و سپس تعیین توالی شده و درون وکتورهای pET22b و pET28a کلون شد. سپس وکتورها داخل سلول BL21(DE3)pLysS تانسفورم شد و سپس توسط یک پروتکل از پیش بهینه شده بیان شد. سلول ها توسط ایزوپروپیل بتا دی-1- تیو گالاکتوپیرانوزید (IPTG) در چهار تیمار 25، 30، 33 و 37 درجه سانتیگراد و سه زمان متفاوت 1، 2 و 3 ساعت بیان شد. اگرچهSDS-PAGE و وسترن بلات بیان قطعه C نوترکیب (r-fragment C) وارد شده به هر دو وکتور را تایید کرد اما وکتور pET28a نشان دهنده بیان بسیار بالاتر ( 66/38 میلی گرم بر لیتر در مفایسه با 33/32 میلی گرم بر لیتر pET22b بود (< 0.05 P). شرایط بیان بهینه پس از 3 ساعت تیمار با mM IPTG در 25 درجه سانتیگراد بود. نتایج نشان داد که وکتور pET28a و سلول BL21(DE3)pLysS تواناتر و سازگارتر برای بیان قطعه C سم تتانوس در مقایسه با وکتور pET22b و BL21(DE3)pLysS بود. این نتایج نگرش های جدیدی برای بیان پروتئین های سمی چون فرگمنت C به کمک فناوری نوترکیب در اشرشیا کلی را ارائه می نماید.
کلیدواژگان:
زبان:
انگلیسی
صفحات:
27 تا 38
لینک کوتاه:
magiran.com/p1805641
دانلود و مطالعه متن این مقاله با یکی از روشهای زیر امکان پذیر است:
اشتراک شخصی
با عضویت و پرداخت آنلاین حق اشتراک یکساله به مبلغ 990,000ريال میتوانید 70 عنوان مطلب دانلود کنید!
اشتراک سازمانی
به کتابخانه دانشگاه یا محل کار خود پیشنهاد کنید تا اشتراک سازمانی این پایگاه را برای دسترسی نامحدود همه کاربران به متن مطالب تهیه نمایند!
توجه!
- حق عضویت دریافتی صرف حمایت از نشریات عضو و نگهداری، تکمیل و توسعه مگیران میشود.
- پرداخت حق اشتراک و دانلود مقالات اجازه بازنشر آن در سایر رسانههای چاپی و دیجیتال را به کاربر نمیدهد.
دسترسی سراسری کاربران دانشگاه پیام نور!
اعضای هیئت علمی و دانشجویان دانشگاه پیام نور در سراسر کشور، در صورت ثبت نام با ایمیل دانشگاهی، تا پایان فروردین ماه 1403 به مقالات سایت دسترسی خواهند داشت!
In order to view content subscription is required
Personal subscription
Subscribe magiran.com for 50 € euros via PayPal and download 70 articles during a year.
Organization subscription
Please contact us to subscribe your university or library for unlimited access!