کلونینگ و بیان ژن NP ویروس آنفلوانزای پرندگان تحت تیپ H9N2 در اشریشیاکلی

آنفلوانزای پرندگان یک بیماری عفونی خطرناک و با اهمیت جهانی است که خسارات مالی قابل توجهی به صنعت طیور تحمیل می کند. تشخیص سرمی بر اساس بررسی آنتی بادی تولید شده بر ضد نوکلئوپروتئین (NP) که در میان همه ویروس های A آنفلوانزا حفاظت شده است، می تواند برای نشان دادن سطح ایمنی ضد همه تحت تیپ های ویروس A آنفلوانزا استفاده گردد. هدف از این مطالعه تولید پروتئین نوترکیب NP بود. بدین منظور ناحیه کدکننده ژن نوکلئوپروتئین جدایه ای از ویروس آنفلوانزای پرندگان A/chicken/Iran/AH-1/06 (H9N2) با آزمایش RT-PCR تکثیر وبه درون وکتور بیانی- پروکاریوتی (pMal-C2x) کلون شده و به داخل باکتری اشریشیا کلی سویه BL21 (DE3) ترانسفورمه گردید. وکتور نوترکیب تخلیص شده جهت بررسی بیان پروتئین نوترکیب MBP-NP مورد استفاده قرار گرفت. پروتئین هدف با وزن حدود 97 کیلو دالتون از طریق SDS-PAGE و متعاقب آن وسترن بلات مورد ارزیابی قرار گرفت. مشاهده بیان پروتئین با وزن ملکولی قابل انتظار در SDS-PAGE و واکنش مثبت این پروتئین با سرم پرنده آلوده به آنفلوانزا در وسترن بلات نشان دهنده بیان موفق ژن NP در E. coli بود.