بیان موقت فرم نوترکیب آنزیم اندونوکلئاز PARS II با روش آگرواینفیلتراسیون در گیاه توتون

تولید پروتئین های نوترکیب در گیاهان تراریخته (زراعت مولکولی)، یکی از جنبه های کاربردی مهندسی ژنتیک محسوب می شود. پروتئین های تولیدشده توسط گیاهان بر خلاف سیستم های تولید مبتنی بر سلول های جانوری و باکتریایی به علت عدم وجود عوامل بیماری زای مشترک انسان و دام، بسیار ایمن هستند و هزینه تولید پایینی دارند. هدف این پژوهش، بیان موقت فرم نوترکیب آنزیم اندونوکلئاز PARS II با استفاده از روش آگرواینفیلتراسیون در گیاه توتون بود. در مطالعه تجربی حاضر، امکان تولید فرم نوترکیب اندونوکلئاز PARS II با استفاده از سیستم بیان موقت به واسطه آگروباکتریوم مورد بررسی قرار گرفت. سازه بیانی pBI-Pars (مبتنی بر ناقل دوگانه pBI121) حاوی توالی کامل رمزکننده PARS II، توالی کوتاه کوزاک در بالادست و توالی رمزکننده هشت آمینواسید هیستیدین در پایین دست ژن، ساخته و با روش آگرواینفلتراسیون به برگ های توتون (Nicotiana tabacum) تزریق شد. پس از گذشت 72 ساعت، بیان ژن مورد نظر در نمونه های آگرواینفیلتره شده با واکنش RT-PCR و بلات نقطه ای با آنتی بادی ضدهیستیدین به ترتیب در سطح mRNA و پروتئین انجام شد. صحت سازه بیانی ساخته شده تایید شد و نتایج بلات نقطه ای با آنتی بادی ضدهیستیدین، بیان پروتئین نوترکیب PARS II را مورد تایید قرار داد، در حالی که هیچ نشانی از بیان پروتئین نوترکیب در گیاهان شاهد آگرواینفیلتره شده با سازه pBI121 مشاهده نشد. مقادیر قابل توجهی از نوکلئاز نوترکیب PARS II در برگ های توتون تولید شد. روش آگرواینفیلتراسیون یک روش موثر و کوتاه مدت برای تولید انبوه نوکلئاز خالص نوترکیب PARS II در گیاه توتون است.