ساخت پلاسمید نوترکیب بیان کننده ژن AID تحت کنترل پروموتر حساس به حرارت باکتریوفاژ لامبدا

آنزیم Activation-induced cytidine deaminase )AID) یک آنزیم اختصاصی لنفوسیت هایB  در هایپرموتاسیون سوماتیک و نوترکیبی تعویض کلاس ژن های آنتی بادی در فولیکول های لنفوسیت B ارگان های لنفاوی محیطی می باشد. بیان نا به جای این آنزیم منجر به موتاسیون در سلول های غیر از لنفوسیت های B و حتی در باکتری Escherichia coli شده است. با این وجود، القای موتاسیون در باکتری Escherichia coli  توسط بیان آنزیم AID، نیازمند بهینه سازی شرایط مطلوب و کنترل شده می باشد. بنابراین هدف این مطالعه تولید یک پلاسمید  بیانی AID تحت کنترل پروموتر حساس به حرارت از باکتریوفاژ لامبدا می باشد. در مرحله اول، جداسازی ژن AID از پلاسمید نوترکیب PGEMT حاوی AID انجام شد. ژن تخلیص شده در پلاسمید PTG19-T در باکتری E.coli سوش Top10 کلون شد و سپس در یک پلاسمید بیانی القایی با دما حاوی پروموتر چپ باکتریوفاژ لامبدا و رپرسور حساس به حرارت cI857 منتقل و در باکتری E.coli قرار داده شد. در مرحله آخر، ژن مقاومت به تتراسایکلین جایگزین ژن مقاومت این پلاسمید نوترکیب شد. ژن AID در پلاسمید حاوی رپرسور حساس به حرارت cI857 از باکتریوفاژ لامبدا انتقال یافت. صحت توالی و چارچوب خوانش توسط الکتروفورز محصولPCR، استفاده از روش های هضم آنزیمی وهمچنین تعیین توالی ژنAID، تایید شد. استنتاج:  ژن AID به طور موفقیت آمیزی در پلاسمید حاوی پروموتر حساس به حرارت از باکتریوفاژ لامبدا کلون شد. این پلاسمید نوترکیب می تواند در سویه های مختلف باکتریE.coli  جهت تولید سویه های mutator استفاده شود.