معرفی نشانگرهای ژنتیکی برای شناسایی و جداسازی پنج گونه از خانواده کپور ماهیان دریای خزر به روش PCR-PFLPs

در این تحقیق 15 نمونه ماهی سفید Rutilus frisii kutum (kamensky, 1901) ، 10 نمونه سس ماهی بزرگ سر Barbus capito (Gueldenstaedti, 1772) ، 10 نمونه ماهی سیم Abramis brama (Linnaeus, 1785) ، 10 نمونه ماهی ماش Aspius aspius (Linnaeus, 1758) و 15 نمونه باله ماهی کلمه Rutilus rutilus caspicus در مکانهای صید تجاری و در تیوپ های 500 میکرولیتری جمع آوری گردید. DNA کلی این نمونه ها به روش فنل کلروفرم (Hillis & Moritz, 1990) استخراج شدند و با استفاده از یک جفت پرایمر (جلودار) دارای توالی نوکلئوتیدهای ژن سیتوکروم b ماهی کلمه به روش PCR ازدیاد پیدا کردند.
جهت آنالیز RFLPs، محصول PCR ژن سیتوکروم (1117bp) b هر یک از نمونه های ماهی، با پنج آنزیم محدودالاثر (DNAasa) در دمای مناسب انکوباسیون، هضم گردیدند. باندهای DNA، با الکتروفورز عمودی در ژل پلی اکریلاماید و رنگ آمیزی نیترات نقره آشکار گردیدند و مورد تجزیه و تحلیل قرار گرفتند. پنج آنزیم Hinf I، Hinc II، Hha I، RsaI و Mbo I الگوهای پلی مورفیسم در بین برخی گونه ها نشان دادند که در نتیجه ژنوتیپ های ناشی از هضم آنزیمی از 4 آنزیم Hinf I، Mbo I، Hha I و Rsa I هاپلوتیپ های AAAA را برای سس بزرگ سر، BBBB برای کلمه، CCCC برای سیم و EEEE را برای ماهی سفید نشان دادند که هر یک از این هاپلوتیپ ها برای هر یک از این گونه ها دارای اهمیت نشانگر ژنتیکی گونه ای می باشد و برای تمایز این گونه ها دارای ارزش می باشند.