تشخیص بهینه و دقیق بروسلا در سرم با استفاده از روش Double PCR

بروسلاها باکتری های گرم منفی درون سلولی هستند که قادر به ایجاد عفونت در بسیاری از گونه های حیوانی و انسان می باشند. علائم کلینیکی بروسلوز در انسان بسیار متنوع بوده و اغلب غیر اختصاصی است، لذا تشخیص این بیماری نیازمند تایید سریع و دقیق می باشد. از آنجا که استفاده از سرم بجای خون از مزایای متعددی در روش های تکثیر اسیدهای نوکلئیک برخوردار است، مطالعه حاضر به طراحی یک واکنش PCR بهینه سازی شده به منظور تشخیص آزمایشگاهی سریع و اختصاصی بروسلوز در نمونه های سرم انسانی می پردازد.
نمونهDNA از 100 میکرولیتر نمونه سرم30 فرد مبتلا به بیماری حاد بروسلوز، با استفاده از روش سریع کیت تهیه گردید. واکنش زنجیره ای پلیمراز با کمک پرایمر های اختصاصی انجام شد. سپس واکنش دوم PCR جهت تکثیر مجدد محصولات واکنش نخست طراحی شد.
یک قطعه 223 جفت بازی ثابت، از ژن مسئول سنتز یک پروتئین ایمونوژنیک غشائی(BCSP31) با وزن ملکولی 31 کیلو دالتون از باکتری بروسلا آبورتوس که ویژه جنس بروسلا می باشد و در تمام واریته های بیولوژیک آن موجود است در کلیه نمونه های سرمی با موفقیت تکثیر شد.
تکثیر مجدد محصولات واکنش اول PCRبمنظور تایید و تکثیر بیشتر قطعات بدست آمده، منجر به پیدایش الگوی باندینگ قوی تر و با حساسیت و ویژگی بالاتری می گردد، که از آن می توان بعنوان یک روش مفید در تشخیص آزمایشگاهی بروسلوز استفاده نمود.