فهرست مطالب
مجله پژوهش های سلولی مولکولی (زیست شناسی ایران)
سال بیست و ششم شماره 2 (تابستان 1392)
- تاریخ انتشار: 1392/05/08
- تعداد عناوین: 8
-
-
صفحات 154-163GR-RBP2 یکی از 8 عضو خانواده GR-RBP در گیاه آرابیدوپسیس است که پس از ترجمه درمیتوکندری جای می گیرد. مطالعه حاضر به منظور بررسی پروتئومیکی گیاهان تراریخت شده با GR-RBP2 در مقایسه با گیاه وحشی صورت گرفته است. در این مطالعه ژن GR-RBP2 از گیاه آرابیدوپسیس جداسازی و در پلاسمید pBIN19 کلون شد. سپس پلاسمید نوترکیب از طریق باکتریAgrobacterium tumefaciens و به روش Floral Dipping به گیاه آرابیدوپسیس انتقال یافت. با انتقال cDNA کامل GR-RBP2 بیست و یک لاین به دست آمد. گیاهان تراریخت شده از نظر فنوتیپی و زمان گلدهی تفاوتی را با گیاه وحشی نشان نداده و قادر به تولید بذر بودند. میزان بیان ژن در سه لاین تراریخت شده مختلف و گیاه وحشی تعیین شد. میزانmRNA درگیاهان تراریخت شده 2 برابر بیشتر از گیاه وحشی بود. آنالیز پروتئومیکی با استفاده از دو سیستم ژل مختلف صورت گرفت: 2D IEF/ SDS PAGE و 2D Blue-native/SDS PAGE. تمام ژلها با نقره رنگ آمیزی شدند. نتایج حاصل از ژل الکتروفورز 2 بعدی نشان داد که پروتئین GR-RBP2 در لاینهای تراریخت شده افزایش بیان داشته است. این نتایج نشان داد که پروتئینهای زنجیره تنفسی در لاینهای تراریخت شده مورد بررسی و گیاه وحشی به فراوانی وجود دارد. کمپلکس V زنجیره تنفسی (کمپلکس (F1 تا حدودی تخریب شده بود اما این امردر تمام لاینهای تراریخت شده و گیاه وحشی مشابه بود. آنالیز طیفهای MS به شناسایی 110 لکه پروتئینی منجر شد که 6 لکه پروتئینی در لاینهای تراریخت شده در مقایسه با گیاه وحشی افزایش نشان داد. نگاهی به برخی پروتئینهای شناخته شده نشان داد که هیچ تغییرعمده ای که نشاندهنده تحریک یا سرکوب برخی مسیرهای متابولیکی باشد وجود ندارد.
کلیدواژگان: GR، RBP2، آنالیز پروتئومیکی، میتوکندری و انتقال ژن -
صفحات 164-173جنس Crocus شامل تقریبا هشتاد گونه است که عمدتا توسط گونه زراعی آن Crocus sativus شناخته می شود. تنوع ژنتیکی میان 16 نژادگان جنس فوق در ایران برای اولین بار توسط نشانگر ISSR مورد مطالعه قرار گرفت. چهارده نشانگر، در مجموع 208 قطعه قابل تشخیص و تکرار پذیر تولید کردند که تمام قطعات چند شکل بودند. قطعات ایجاد شده بر اساس وجود و عدم وجود امتیاز دهی شدند و از داده های فوق برای محاسبه ضرایب شباهت دایس، جاکارد و تطابق ساده استفاده گردید. دندروگرام مربوطه توسط نرم افزار NTSYSpc (نسخه 02/2) و بر اساس الگوریتم Complete Linkageو UPGMA ترسیم گردید. تجزیه و تحلیل خوشه ای، نژادگان را به پنج گروه اصلی تقسیم نمود. علاوه بر این، نمودارهای به دست آمده از تحلیل PCoA نیز نژادگان را به پنج گروه تفکیک می نماید. قدرت تفکیک تجمعی برابر با 134، میزان کمینه قدرت تفکیک برابر با 87/4 در آغازگر UBC872 و میزان بیشینه برابر با 5/15 در آغازگر UBC851و متوسط قدرت تفکیک برابر با 6/9 می باشد. نتایج به دست آمده سودمندی بالای نشانگر های ISSR را برای گروه بندی گونه های Crocus و تحلیل روابط زنتیکی آنها را نشان می دهد.
کلیدواژگان: انگشت نگاری، تنوع ژنتیکی، زعفران، قدرت تفکیک، ISSR -
صفحات 174-185لوسیفرازها آنزیمهایی هستند که از سوبسترایی به نام لوسیفرین همراه با ATP وMg2+ و اکسیژن مولکولی برای انتشار نورهایی با رنگهای متنوع استفاده می نمایند. بسته به فاکتورهای متفاوت - که یکی از مهم ترین آنها اسیدآمینه های تشکیل دهنده لوسیفراز است- نورهایی با طیف رنگی متفاوت از لوسیفرازها منتشر می شود. لوسیفراز حشره شب تاب گونه ایرانی با نام علمی Lampyris turkestanicus نور سبز منتشر می کند. در این کار برای اولین بار کریستال لوسیفراز جهش یافته Lampyris turkestanicus (E354R/R356/H432Y) - که نور قرمز ساطع می کند- به منظور مطالعه و تعیین ساختار سه بعدی و در نهایت مطالعه مکانیسم تغییر رنگ در مقایسه با لوسیفرازهای تعیین ساختار شده دیگر با روش کریستالوگرافی اشعه X تهیه شد. تهیه کریستال با استفاده از روش کریستالوگرافی قطره نشسته انجام شد و کریستال تتراگونالی با حد تفکیک 2/2 آنگستروم به دست آمد. تک واحدهای کریستال دارای ابعاد a=85.01 b=85.01 c=97.09 است.
کلیدواژگان: لوسیفراز جهش یافته (E354R، R356، H432Y)، کریستالوگرافی اشعه X، Lampyris turkestanicus -
صفحات 186-199مواد پکتینی، پلی ساکارید های پیچیده غنی از زیر واحد های گالاکتوز می باشند. مطالعات نشان داده است که، این مواد قادر به القای آپوپتوز در سلولهای سرطانی هستند. تحقیق حاضر جهت بررسی اثر آپوپتوزی اسید پکتیک (AP) و پکتین مرکبات (CP) روی دودمان سلولی سرطان پروستات انسانی DU145، که وابسته به آندروژن می باشد، صورت گرفته است. با تغییر pH و دما نمونه های تغییر یافته ای از اسید پکتیک و پکتین مرکبات به دست آمد و اثر این مواد (MAP (modified acid pectic)) MCP و (modified citrus pectin) و نیز روی سلولهای مذکور مورد بررسی قرار گرفت. اثر آپوپتوتیکی این مواد پکتینی با Pectasol، به عنوان کنترل مثبت در القای آپوپتوز روی این سلولها، مقایسه گردید. درصد آپوپتوز سلولها پس از تیمارهای مختلف، به وسیله رنگ آمیزی آکریدین اورنج و اتیدیوم برماید و همچنین بررسی سیکل سلولی با استفاده از تکنیک فلوسایتومتری، مورد بررسی قرار گرفت. نتیجه این مطالعه نشان می دهد که، غلظت mg/ml 5 از محلولهای AP، MCP و mg/ml 1 از Pectasol میزان بالای آپوپتوز را در سلولهای سرطانی DU145 نسبت به کنترل القاء می کند (0.001 < p). در حالی که MAP با همین دز قدرت آپوپتوتیکی کمی را نشان می دهد. در ضمن، درصد نکروز سلولها، توسط رنگ آمیزی آکریدین اورنج و اتیدیوم برماید، مطالعه گردید. میزان آپوپتوز سلولها نسبت به میزان نکروز آنها به مراتب بالاتر می باشد. نتیجه این پژوهش نشان داد که، CP قدرت القای آپوپتوز در سلولهای DU145 را ندارد و پس از آنکه به وسیله pH و دما تغییر پیدا می کند (MCP) دارای قدرت آپوپتوتیک می شود. درحالی که، AP یا پکتین سیب بدون تغییر دارای این قدرت است و اگر تغییر داده شود، یعنی به مولکولهای کوچکتر تبدیل گردد این قدرت را به طور معنی دار از دست می دهد. این مساله می تواند حاکی از برتری پکتین سیب به پکتین مرکبات باشد؛ پکتین سیب، مولکولی کوچکتر از پکتین مرکبات دارد و در بخش خوراکی این میوه قرار دارد و بدون نیاز به شکسته شدن توسط تغییرات دما و pH قادر به القای آپوپتوز در سلولهای سرطانی تحت تیمار خود می باشد، در حالی که پکتین مرکبات دارای مولکولی بزرگ است که به صورت طبیعی قادر به القای آپوپتوز در سلولهای سرطانی پروستات DU145 نمی باشد. در ضمن این پکتین در پوست غیر خوراکی آن بوده و نیاز به شکسته شدن توسط دما و pH، برای القای آپوپتوز در سلولهای سرطانی تحت تیمار خود دارد.
کلیدواژگان: آپوپتوز، اسید پکتیک، پکتین مرکبات، سلولهای DU145 -
صفحات 200-207تک یاختگان مژه دار مانند Paramecium caudatum را می توان در محیط کشت مخمر پرورش داد. در این پژوهش تاثیر دما و غنی سازی محیط کشت مخمر بر رشد و تکثیر جمعیت P. caudatum بررسی شد. رشد جمعیت P. caudatum در محیط کشت مخمر تحت دماهای مختلف (40-20 درجه سانتی گراد) و تحت غنی سازی با یونهای Ca2+ وMg2+ و اسید آمینه ال-آرژینین مورد مقایسه قرار گرفت. طبق نتایج، جمعیت این جانوران 48 ساعت پس از پاساژ در دمای 30 درجه سانتی گراد نسبت به سایر دماها افزایش قابل ملاحظه ای داشت (001/0p<). همچنین غنی کردن محیط کشت با یونهای Ca2+ وMg2+ و به ویژه افزودن اسید آمینه ال-آرژینین در دمای بهینه موجب افزایش بیشتر جمعیت P. caudatum در این محیط نسبت به محیط کشت معمولی مخمر شد (001/0p<). بررسی منحنی رشد این جانوران تک سلولی در محیط کشت معمولی مخمر تحت دمای بهینه نشان داد که رشد و تکثیر این جانوران تک سلولی دارای چهار مرحله است. مقایسه منحنی های رشد محیط معمولی نسبت به محیط غنی شده، نشان دهنده رشد بیشتر سلولها در محیط غنی شده نسبت به محیط معمولی است. بر اساس یافته های حاضر محیط کشت غنی شده مخمر را تحت دمای 30 درجه سانتی گراد می توان به عنوان یک محیط کشت مصنوعی مناسب برای تکثیر و ازدیاد P. caudatum معرفی کرد.
کلیدواژگان: P، caudatum، دمای بهینه، محیط کشت مخمر، عوامل معدنی و آلی، منحنی رشد -
صفحات 208-220گل محمدی یکی از گونه های ارزشمند گیاهی است که در بسیاری از کشورها از جمله ایران سابقه کشت زیادی دارد. به منظور بررسی تنوع سیتوژنتیکی بین جمعیتهای مختلف گل محمدی موجود در موسسه تحقیقات جنگلها و مراتع کشور، تعداد 14 جمعیت (اکسشن) انتخاب شد و از قلمه ریشه دار شده آنها مریستم انتهایی ریشه تهیه گردید. برای مطالعات کاریوتیپی این جمعیتها از سیستم آنالیز تصویری و برای اندازه گیری پارامترهای سیتوژنتیکی از نرم افزار Micromeasure استفاده شد. داده ها پس از جمع آوری در قالب یک طرح کاملا تصادفی با 3 تکرار مورد تجزیه و تحلیل قرار گرفتند. نتایج نشان داد که بین جمعیتها از لحاظ پارامترهای سیتوژنتیکی طول بازوی کوتاه، طول بازوی بلند، نسبت بازوی بلند به بازوی کوتاه، شاخص عدم تقارن درون کروموزومی، درصد شکل کلی کاریوتیپ، درصد بازوی بلند و درصد بازوی کوتاه اختلاف معنی داری در سطح 1 درصد و برای صفت طول کل کروموزوم بین جمعیتها اختلاف معنی داری در سطح 5 درصد وجود داشت. در تجزیه به مولفه های اصلی، سه مولفه اول بیش از 98 درصد از کل واریانس بین جمعیتها را توجیه نمودند. در مولفه اول با سهم 51 درصد از کل واریانس، صفات طول بازوی کوتاه، نسبت بازوی بلند به بازوی کوتاه، شاخص عدم تقارن درون کروموزومی و درصد شکل کلی به عنوان مهم ترین صفات در گروه بندی جمعیتها شناخته شدند. در مولفه دوم با سهم 24 درصد از کل واریانس، صفات درصد بازوی بلند و درصد بازوی کوتاه دارای اهمیت بیشتری در ایجاد تنوع بودند. همچنین در مولفه سوم با سهم 22 درصد از کل واریانس، صفات طول بازوی بلند و طول کل کروموزوم نقش بیشتری در ایجاد تنوع بین جمعیتها داشتند. برای گروه بندی جمعیتها براساس صفات کاریوتیپی، تجزیه خوشه ایبه روش Ward انجام شد که با برش دندروگرام در فاصله اقلیدسی 35/4، جمعیتها در 4 کلاس مختلف قرار گرفتند. در این بررسی بیشترین فاصله بین دو جمعیت اصفهان 9) و ایلام 1) و کمترین فاصله بین دوجمعیت گیلان 1) و اصفهان 7) مشاهده شد. دیاگرام حاصل از پراکنش جمعیتها براساس سه مولفه اصلی، جمعیتهای مورد بررسی را در 4 گروه قرار می دهد که این امر موید نتایج حاصل از خوشه بندی است.
کلیدواژگان: گل محمدی (Rosa damascena Mill، )، سیتوژنتیک، کاریوتیپ، تجزیه خوشه ایو تجزیه به مولفه های اصلی -
صفحات 221-228باکتری اشریشیا کلی انتروتوکسیژنیک (ETEC) شایع ترین عامل اسهال باکتریایی کودکان زیر پنج سال و همچنین رایج ترین عامل اسهال مسافر در بالغین در دنیا است، که سالانه تعداد زیادی از کودکان را به کام مرگ کشانده و تعداد کثیر دیگری را تحت تاثیر قرار می دهد. از این رو هدف WHO تولید واکسن علیه این عامل می باشد. فیمبریه CFA/I یکی از عوامل ویرولانس مهم و شایع این باکتری است که نقش اساسی در فرآیند بیماریزایی این باکتری دارد. از این رو پروتئین انتهایی این فیمبریه (CFaE) می تواند به عنوان کاندید واکسن مطرح باشد. هدف از این مطالعه، بررسی امکان بیان پروتئین نوترکیب CFaE از توالی طبیعی ژن مربوطه بعد از همسانه سازی آن در ناقل بیانی، بوده است. بعد از طراحی پرایمر برای ژن cfaE، با استفاده از واکنش PCR تکثیر شد. در مرحله بعد، ژن مذکور در ناقل pTZ57R/T همسانه سازی اولیه و سپس با استفاده از آنزیمهای محدودالاثر در ناقل بیانی pET28a(+) زیر همسانه سازی شد. بررسی بیان با استفاده از ماده IPTG با تغییر پارامترهای مختلف صورت گرفته در دو میزبان E.coli سویه های BL21(DE3)pLysS و Rosetta مورد ارزیابی قرار گرفت. فرآیند همسانه سازی و زیر همسانه سازی با موفقیت انجام گرفت. نمونه های تست در مقایسه با کنترل در مواجهه با IPTG پروتئین نوترکیب قابل تشخیصی را روی ژل SDS-PAGE نشان نداد. این نتیجه با تغییر پارامترهای مختلف (زمان القاء، دما و غلظتهای متفاوت IPTG) تکرار شد. به نظر می رسد توالی طبیعی ژن cfaE دارای میزان A+T بالا و همچنین کدونهای نادر زیادی است که باعث می شود قابلیت تولید بالای پروتئین در E.coli با این الگوی کدونی وجود نداشته باشد. از این رو پیشنهاد می گردد توالی این ژن بعد از بهینه سازی کدونها، سنتز شده و سپس بررسی بیان آن مجددا ارزیابی شود.
کلیدواژگان: اشریشیا کلی انتروتوکسی~~ژنیک، زیرواحد فرعی آنتی ژن عامل کلونیزاسیون I (CFaE)، همسانه سازی، بیان پروتئین نوترکیب -
صفحات 229-241با توجه به کاربرد فراوان آنزیمهای لیپولیتیک بخصوص لیپاز باکتریایی در صنایع غذایی، دارویی و بهداشتی از یک طرف و قیمت بالای آن از طرف دیگر، جهت رفع مشکل تولید آنزیم لیپاز باکتریایی، تولید این آنزیم از یک منبع در دسترس و ارزان قیمت مورد بررسی قرار گرفته است. برای این منظور سوش جدید Pseudomonas aeruginosa HR59 از عفونت سوختگی جداسازی و شرایط کشت آن با استفاده ار روش سطح پاسخ برای چهار فاکتور غلظت کلسیم، غلظت توئین-80، غلظت روغن زیتون و زمان انکوباسیون بهینه سازی شده است. نتایج حاصل از این روش آماری نشان داده است که زمان انکوباسیون بیشترین تاثیر و غلظت روغن زیتون کمترین تاثیر مثبت را بر ترشح آنزیم دارند. در نتیجه اعمال شرایط بهینه شده در محیط کشت باکتری (3 میلی مولار کلسیم، V/V 1.5 روغن زیتون، V/V 0.4 توئین-80 و 72 ساعت آنکوباسیون)، ترشح آنزیم به حداکثر مقدار خود می رسد.
کلیدواژگان: لیپاز باکتریایی، عفونت سوختگی، بهینه سازی محیط کشت، روش آماری سطح پاسخ، Box، Behnken Design (BBD)
-
Pages 154-163Glycine-Rich RNA Binding Protein2 (GR-RBP2) is one of the eight GR-RBP family members in Arabidopsis thaliana which is located in mitochondria after translation. Here we employed a proteomic approach to compare transgenic Arabidopsis plants over expressing GR-RBP2 with Wild Type. In this study، GR-RBP2 gene was isolated from Arabidopsis and cloned into pBIN19 vector. Recombinant vector was transferred to Arabidopsis (Col-0) via Agrobacterium tumefaciens by Floral Dipping method. Transformation with full length cDNA of GR-RBP2 yielded 21 lines. Over expressing plants are indistinguishable from WT seedlings. The whole lines are unchanged with regard to flowering time and are fully fertile. Gene expression levels were determined in different over expressing lines compare with WT seedlings. The mRNA level in over expressing lines was 2 times higher than WT. Proteomic analysis of over expressing lines were carried out on two different gel systems: 2D IEF/ SDA PAGE and 2D Blue-native/SDS PAGE. All gels were silver stained. 2D gel electrophoresis revealed that GR-RBP2 was induced in over expressing lines. Results showed that respiratory chain looks very much in the same investigated lines and WT. Complex V was partially degraded (F1 complex)، but this also is the same in all samples. Approximately 110 spots were identified by mass spectrometry. Six protein spots were increased in over expressing lines compared to WT. A look at some well known proteins showed that there is no major change indicating induction or repression of metabolic pathways.Keywords: GR, RBP2, Proteomic analysis, Mitochondria, Gene transformation
-
Pages 164-173The Crocus genus، which comprehends approximately 80 species، is known mainly for the cultivated species Crocus sativus. Genetic variability among 16 genotype of Crocus genus originating from Iran was examined for the first time with Inter Simple Sequence Repeat (ISSR). Fourteen primers generated a total of 208 discernible and reproducible bands across the analyzed populations، that all of these showed polymorphism. The fragment scored for presence/absence and used to generate Dice، Jaccard and Simple Maching similarity coefficients and to construct a dendrogram by means of UPGMA and Complete Linkage in NTSYS-pc 2. 02 computer program. Cluster analysis revealed primarily five major groups. Furthermore، dimensional graph derived from Principal Coordinate Analysis (PCoA) of ISSR data also revealed a pattern in which the genotypes were assigned into five separate groups. Estimation of Resolving Power (RP) values exhibited a collective rate of 134. 08 and varied from 4. 87 for UBC 872 to 15. 5 for UBC 851 with a mean of 9. 6. The results showed the high effectiveness of ISSR markers in grouping of Crocus species under study، and analysis of their genetic relationships.Keywords: Fingerprinting, Genetic Diversity, Saffron, Resolving power, ISSR
-
Pages 174-185Luciferase enzymes efficiently convert luciferin to oxyluciferin in the presence of ATP، Mg2+ and molecular oxygen. Luciferase reaction produces a spectrum with different color under various conditions. One of the most important factors is residues of structure. Lampyris turkestanicus، Iranian firefly، luciferase emits green light. In order to study، 3D-structure determination and red-shift mechanism analysis in comparison to other determined structure luciferase، Mutated (E354R/R356/H432Y) (emits red light) luciferase from Lampyris turkestanicus has been crystallized. The crystals with 2. 2Å resolution of mutated firefly luciferase were obtained by the sitting drop method. The diffraction pattern from E354R/356R/H432Y luciferase belongs tetragonal system with space group P41 and unit cell dimensions a=b=85. 01 and c=97. 09.Keywords: mutated (E354R, R356, H432Y) luciferase, X-ray crystallography, Lampyris turkestanicus
-
Pages 186-199Pectic substances are complex polysaccharides، rich in galactoside residues، capable of combining with the carbohydrate-binding domain of galectin-3. It has been shown that these biomaterials can induce apoptosis in tumurigenic cells، possibly via interaction with galectin-3. In the present study the apoptotic effect of pectic acid (AP) and citrus pectin (CP) on the human prostate cancer cells DU145، which express galectin-3، is investigated. PA and CP were modified by alteration in the temperature and pH، and the apoptotic effect of such modified CP (MCP) and AP (MAP) was studied. We also used commercially available modified citrus pectin، Pectasol، as positive control. DU145 cells were treated by different concentration of AP، MAP، CP، MCP، and Pectasol in periods of 24 and 48 hours. The percentage of apoptotic cells، after these treatments were investigated using Acridine orange/ Ethidium bromide staining and Cell cycle analysis. These investigations showed that AP، MAP، MCP can induce high percentage of apoptosis compared to control group (p)Keywords: Apoptosis, Acid Pectic, Citrus Pectin, Modified Citrus Pectin, DU145 cell line
-
Pages 200-207Unicellular ciliates including Paramecium caudatum can be cultivated in yeast medium. In this research the effect of temperature and medium enrichment on growth and reproduction of the ciliate population was evaluated. The growth of the P. caudatum population in the ordinary yeast medium under a range of temperature from 20 to 40°C and enrichment of the medium using both the ions (Ca2+ and Mg2+) and the L-Arginine were compared. Based on the results the population of the ciliate 48 h after the cultivation in the ordinary yeast medium increased at a significant level (p<0. 001) under 30 ºC compared with those of other temperatures. Moreover، the enrichment of the medium with ingredients (Ca2+ and Mg2+) especially after adding of L-Arginine under optimum temperature caused more increase in the population of the ciliate to that observed in the ordinary medium (p<0. 001). The growth curve of P. caudatum in enriched medium under optimum temperature showed 4 phases. A comparison between growth curves of this with that of ordinary medium indicated much upward growth in the enriched one. According to this work an enriched yeast medium under the temperature of 30 ºC can be introduced as a suitable artificial medium for cultivation and proliferation of P. caudatum.Keywords: P. caudatum, Optimum temperature, Yeast culture medium, Organic, inorganic factors, Growth curve
-
Pages 208-220Rosa damascena Mill. is one of the valuable species with a long history in Iran and some other countries. In order to investigate cytogenetic variation in Rosa damascena، meristemic zone of 14 accessions were used. The research was conducted using a completely randomized design. Image analysis system and Micro-measure software were used to karyotype providing and cytogenetic parameters measurement. Data were collected and analyzed using a completely randomized design with three replications. Results showed significant differences (P<0. 01) among accessions for some parameters، such as short arm (SA)، long arm (LA)، arm ratio (AR)، Intra asymmetry chromosomal index (A1) and total form percentage (TF%). Using principal components analysis، the first three independent components accounted over 98% of variation. The first principal component indicated that short arm (SA)، arm ratio (AR)، intra symmetry chromosomal index (A1) and total form percentage (TF%) are appropriate parameters to classify accessions with 51% of total variation. Long arm percentage and Short arm percentage were important traits in second component at 24% level. Long arm and Total length (TL) were important traits in third component at 22% level. Cluster analysis based on cytogenetic parameters، grouped the accessions into 4 categories. The most far apart accessions were Isfahan9 and Ilam1 and the most near ones، Gilan 1 and Isfahan 7. It is necessary to notify distribution of accessions based on the first three component scores were in agreement with cluster analysis.Keywords: Rosa damascena, Cytogenetic, Karyotype, Cluster analysis, Principal component analysis
-
Pages 221-228Enterotoxigenic Escherichia coli (ETEC) is the most common cause of bacterial diarrhea in children under 5 years and it is also a cause of Travelers diarrhea worldwide. To prevent ETEC-caused diarrhea and decrease its prevalence، the WHO has promoted the vaccine production against this pathovar. CFA/I fimbriae is an important and frequent virulence factor of this bacteria، playing a critical role in pathogenesis. Therefore، tip protein of this fimbriae (CFaE) could describe as a vaccine candidate. This study was aimed at investigating the expression of the gene rCFaE from native sequence after cloning into expression vector. rCFaE was amplified by PCR using a newly designed set of primers. PCR product was then cloned into early cloning vector pTZ57R/T and then sub cloned into the expression vector pET28a (+). Protein expression in 2 strains of E. coli BL21 (DE3) pLysS and Rosetta was determined by using IPTG under different conditions. cloning and sub cloning process were performed successfully. Test samples in the comparatives with control samples did not show detectable protein on the SDS-PAGE. The same results were obtained after changing different parameters like time and temperature of induction and variety of IPTG concentration. It was not possible to obtain high level expression of the target recombinant protein production in E. coli with pattern codon usages، probably due to the high A+T content and also abundance rare codons in the native sequence of cfaE gene. Therefore we suggest synthesizing this gene after codon optimization and checking for expression that again.Keywords: Enterotoxigenic Escherichia coli (ETEC)_minor subunit Colonization Factor Antigen I (CFaE)_cloning_recombinant protein expression
-
Pages 229-241By attention to this fact that bacterial lipase has important role in different industries، in present investigation potential of Pseudomonas aeruginosa from burn infection for lipase secretion was studied. Optimization procedure using response surface methodology (RSM) based on Box-Behnken Design (BBD) with four factors (Ca2+ ion، olive oil and tween-80 concentration and incubation time) was used in order to investigate the effect of these parameters on the production of lipase from newly isolated bacterium; Pseudomonas aeruginosa HR59. According to the results of RSM، concentrations of Ca+2، tween-80 and incubation time were very important role on enzyme production. As a result of this optimization، maximum lipase activity was achievable at Ca+2 (3 mM)، olive oil (1. 5 % V/V)، tween-80 (0. 4 %V/V) and incubation time (72 h).Keywords: Optimization, lipase, Box, Behnken Design (BBD), RSM
©2000-2024 magiran.com All Rights Reserved.