امیر محمدحسین نیا دواتگر
-
سابقه و هدفویروس آنفلونزا باعث بروز بیماری های با پاتوژنیسیته متفاوت در میزبان ها می شود. ویروس های آنفلونزای A بر اساس گلیکوپروتئین های نورامینیداز و هماگلوتینین به تحت تیپ های مختلفی تقسیم می شوند. ویروس آنفلونزای پرندگان به طور معمول باعث بیماری در انسان نمی شود اما عفونت های اسپورادیک آن در انسان گزارش شده است. هدف این مطالعه، شناسایی و تعیین توالی ژن نورامینیداز ویروس آنفلونزای H9N2 جدا شده از اپیدمی اخیر بیماری در ایران، و مقایسه این ایزوله ها با سویه های سایر کشورها بود.مواد و روش هاایزوله های ویروسی بر روی تخم مرغ های جنین دار پاساژ داده شد و RNA آن ها توسط کیت تجاری RNX استخراج گردید. تکثیر ژن نورامینیداز با روش RT-PCR انجام شد. محصول پس از الکتروفورز و خالص سازی، سکانس گردید.یافته هاتوالی های نوکلئوتیدی ژن نورامینیداز شش سویه ویروس آنفلونزای H9N2 جدا شده از نواحی مختلف ایران شناسایی و در پایگاه داده GeneBank به ثبت رسید. آنالیز مقایسه ای این توالی ها با توالی نمونه های رفرانس انجام شد. هیچ نوع جهشی در ناحیه سیتوپلاسمی مشاهده نشد، اما چهار جهش در بخش عبوری از غشا اتفاق افتاده است. که دو جهش آن از نوع خاموش بوده و دو جهش دیگر به جایگزینی اسیدآمینه آب گریز با اسید آمینه آب گریز دیگر منجر شده است.نتیجه گیریآنالیز توالی نوکلئوتیدی و آمینواسیدی ژن نورامینیداز ویروس آنفلونزای H9N2 حاصل از ایزوله های ایران، دارای شباهت زیادی به سویه های گزارش شده از کشورهای همسایه همانند پاکستان و عربستان بودند. به نظر می رسد آن ها دارای منشاء و تبار یکسان هستند.
کلید واژگان: آنفلونزای پرندگان, H9N2, نورامینیداز, آنالیز نوکلئوتید, ایرانKoomesh, Volume:16 Issue: 4, 2015, PP 512 -519IntroductionInfluenza viruses cause a variety of infections from high to low pathogenicity in hosts. Influenza virus Ais divided into subtypes based on two surface glycoproteins: the hemagglutinin (H) and the neuraminidase (N). Avian flu viruses do not normally infect humans, although, some sporadic human infections have been reported. The aim of this study was to identify and sequence the neuraminidase gene of Avian Influenza (AI) H9N2 virus isolated from recent outbreaks in Iran and comparative analyzing it with strains from other countries.Materials And MethodsInfluenza viruses were passaged in embryonated eggs, and RNA extracted by RNX. TM kit. Using RT- PCR technique, cDNA preparation and amplification of N gene were done. The product was then assessed by electrophoresis and observed with UV, purified and sequenced.ResultsNeuraminidase gene nucleotide sequence from six isolates from different parts of Iran were identified and recorded at the GenBank. Comparative analysis with reference strains carried out for these sequences. No mutation had been observed in cytoplasmic domain, however, four mutations had been occurred at transmembrane domain, which two of them were silent and two were actually substitution of hydrophobic amino acids with similar ones.ConclusionNucleotide and amino acid analysis for the neuraminidase gene of H9N2 influenza virus of isolates obtained from different parts of Iran revealed similarities to other strains described from neighboring countries, such as Pakistan and Saudi Arabia. It seems like that they have common source with the same lineages.Keywords: Avian Influenza, H9N2, Neuraminidase, Nucleotide Analysis, Iran -
مقدمه
بیماری نیوکاسل عفونتی فوق العاده مسری در بسیاری از گونه های طیور می باشد. ویروس بیماری نیوکاسل متعلق به خانواده پارامایکسوویریده و جنس رابولوویریده است. از پوشش این ویروس دو نوع زائده سطحی(خار) خارج شده است که یکی از آن ها گلیکوپروتئین امتزاجی(F) است و مسئول امتزاج سلولی، همولیز و نفوذ ویروس است. شکست پذیری مولکول FO با خاصیت بیماری زایی ویروس ها در درون طیور ارتباط مستقیم دارد. هدف از این مطالعه شناسایی ژن F ویروس بیماری نیوکاسل و تعیین توالی های نوکلئوتیدی و آمینواسیدی سویه های جدا شده از اپیدمی های اخیر بیماری در ایران است.
مواد و روش هاویروس ها(شش سویه) پاساژ داده شد و RNA آن ها استخراج گردید. سپس cDNA با استفاده از روش RT- PCR تهیه و تکثیر ژنوم ویروس انجام گردید. ایزوله ها از طریق الکتروفورز و مشاهده باندها توسطUV شناسایی شدند. بر روی نمونه ها واکنش هضم آنزیمی توسط آنزیم Pst I آنجام گردید. برای تایید نتایج تعدادی از نمونه ها برای تعیین ترادف(سکوئینسینگ) ارسال گردید.
یافته های پژوهش: کلیه نمونه ها باند 935 bp نشان دادند که پس از هضم آنزیمی با PstI دو باند bp720 و bp 180 به دست آمد. آنالیز نوکلئوتیدی تفاوت قابل نوحهی در توالی اسیدآمینه را نشان نداد و هیچ تغییر اسیدآمینه ای در جایگاه شکست پروتئین F مشاهده نشد.بحث و نتیجه گیریعدم وجود هیچ گونه جهش نقطه در جایگاه شکست پروتئینF، نشان دهنده اهمیت حفظ شدگی شدید ناحیه جایگاه شکست در بین سویه های مختلف مورد مطالعه می باشد.
کلید واژگان: ویروس نیوکاسل, شناسایی ژن F, موتاسیون, ایرانIntroductionNewcastle disease is an extr-emely contagious disease that infects many species of birds. Newcastle Disease Virus (NDV) belongs to the paramyxoviridae fa-mily and genus Rubulavirus. The mem-brane of the virus particle contains HN and F glycoproteins. Cleavage of the F glycop-rotein has a direct relation with the patog-enicity of the virus. The aim of this study was to determine the gene and protein sequences of F glycoprotein in virus strains isolated from recent outbreaks in Iran.
Materials and MethodsSix NDV Viruses were passaged and their RNA isolated. Using RT- PCR technique، cDNA prepar-ation and amplification of the gene were done. Isolates were assessed by electropho-resis and observed with UV. The isolates were digested with restriction enzyme Pst I. Finally، in order to corroborate the ampl-ified PCR product، DNA of isolates were purified، dried and sequenced.
FindingIn this study all of the NDV strains contained a 935 bp band that after digestion with Pst I، produce two bonds 720 bp and 180 bp. Nucleotide analysis showed single base mutations but that was not significant amino acid sequence and anal-ysis indicated no amino acid change in the cleavage site of F protein. Discussion &
ConclusionsAbsence of point mutations in the cleavage site of F protein illustrated the importance of the maintained cleavage site of protein F among the strains studied.
Keywords: newcastle disease virus, F gene identification, mutation, Iran
- در این صفحه نام مورد نظر در اسامی نویسندگان مقالات جستجو میشود. ممکن است نتایج شامل مطالب نویسندگان هم نام و حتی در رشتههای مختلف باشد.
- همه مقالات ترجمه فارسی یا انگلیسی ندارند پس ممکن است مقالاتی باشند که نام نویسنده مورد نظر شما به صورت معادل فارسی یا انگلیسی آن درج شده باشد. در صفحه جستجوی پیشرفته میتوانید همزمان نام فارسی و انگلیسی نویسنده را درج نمایید.
- در صورتی که میخواهید جستجو را با شرایط متفاوت تکرار کنید به صفحه جستجوی پیشرفته مطالب نشریات مراجعه کنید.