فهرست مطالب علی احمد بیات
-
مقدمهبرای قرن ها، گیاهان منبع اصلی کشف داروهای مختلف بوده اند. برخی داروهای ضدسرطان حاصل از گیاهان، وین بلاستین، وین کریستین، تاگزول و کامپتوتسین می باشند. سرطان پستان یکی از رایج ترین سرطان های تشخیص داده شده در بین زنان و سرطان پروستات یکی از مشکلات بهداشتی مردان در سراسر دنیا به شمار می روند.هدفهدف از این مطالعه بررسی اثر سمیت سلولی گیاه اسپرس درختی نقره ای بر رده های سلولی سرطان انسانی می باشد.روش بررسیدر مطالعه حاضر، به بررسی اثرات سمیت سلولی عصاره های تام متانولی و فراکسیون های اسپرس درختی نقره ای بر روی دو رده سلولی سرطان پستان انسانی MCF-7 و BT-474 و نیز دو رده سلولی سرطان پروستات انسانی PC-3 و Du-145 پرداخته شده است. سمیت سلولی بوسیله روش MTT و فلوسیتومتری ارزیابی شد.نتایجاز بین فراکسیون های مورد آزمایش، فراکسیون کلروفرمی گیاه، در تست MTT بیشترین اثر سمیت را داشت. کمترین IC50 مربوط به رده سلولی سرطان پستان انسانی MCF-7 برابر با 69/70 میکروگرم در میلی لیتر در زمان 48 ساعت بود. در تست فلوسیتومتری این فراکسیون در سه رده سلولی MCF-7، BT-474 و PC-3 اثر القای نکروز و در رده Du-145 اثر القای آپوپتوز از خود نشان داد.نتیجه گیریاین گیاه دارای اثرات سمیت سلولی می باشد. بررسی های بیشتری برای تعیین ساختار شیمیایی ترکیبات فعال و مکانیسم های ملکولی دخیل در اثرات ضدسرطانی گیاه اسپرس درختی نقره ای مورد نیاز می باشد.
کلید واژگان: اسپرس درختی نقره ای, رده های سلولی سرطان انسانی, سمیت سلولی}BackgroundFor centuries, plants have been a major source for drug discovery. Some examples of anticancer agents developed from plants are the vinblastine, vincristine, taxol and camptothecin. Breast cancer is one of the most commonly diagnosed cancers among women and prostate cancer remains a considerable health problem for men around the world.ObjectiveThe purpose of this study was cytotoxicity evaluation of Taverniera spartea on human cancer cell lines.MethodsIn the present study, we determined the cytotoxic effects of total methanol extracts and their fractions of Taverniera spartea on MCF-7 and BT-474 human breast cancer cells and also PC-3 and Du-145 prostate cancer cells. Cytotoxicity was evaluated by MTT assay and flow cytometry analysis.ResultsThe chloroform fraction of Taverniera spartea showed the highest toxicity MTT assay. The IC50 value of this fraction was 70.69 µg/ml for MCF-7 breast cancer cell line after 48 h of exposure. Chloroform fraction showed necrotic effects on MCF-7, BT-474 and PC-3 in contrast apopthotic induction on Du-145 in flow cytometry analysisConclusionTaverniera spartea has cytotoxic effects. Further investigation is needed to determine chemical characterization of the active principles and the molecular mechanisms mediated anticancer activities of Taverniera spartea.Keywords: Taverniera spartea, Cytotoxic effects, Human cancer cell line, Leguminosae} -
هدفتولیدآنتی بادی منوکلونال ضد (Human Epidermal Growth Factor Recpector-2) Her-2)مواد و روش هابرای رسیدن به این هدف، دو پپتید بخش خارج سلولی Her2 طراحی و آنتی بادی های ضد آنها با استفاده از تکنولوژی هیبریدوما، تولید شد. ویژگی دو عدد از این آنتی بادی ها (کلون های 3E3 و 7F10) به روش های الایزا، ایمونوبلاتینگ و رنگ آمیزی ایمونوفلورسانس مورد بررسی قرار گرفت.یافته هادر مجموع 5 کلون از 2 فیوژن به دست آمد که ایزوتیپ همگی آنها از کلاس IgM بود. این آنتی بادی ها دارای واکنش گری مناسب در آزمون الایزا بودند. آزمون ایمونوبلاتینگ نشان داد این آنتی بادی ها همانند آنتی بادی تجاری ضد Her2 به نام Herceptin قادر به شناسایی Her2 با وزن مولکولی KD 185 هستند. نتایج آزمون ایمونوفلورسانس غیرمستقیم نشان داد این آنتی بادی ها قادر به شناسایی Her2 سیتوپلاسمی و غشایی در رده سلولی سرطان پستان، SKBR3، هستند.نتیجه گیریدر مجموع به نظر می رسد که از آنتی بادی های منوکلونال تولید شده در این پژوهش می توان در تست های تشخیصی Her2 شامل روش های ایمونوهیستوشیمی و روش های سرولوژی بهره جست.
کلید واژگان: سرطان پستان, گیرنده فاکتور رشد اپیدرمال انسانی (Her2), آنتی بادی منوکلونال, الایزا, ایمونوفلورسانس, ایمونوبلاتینگ} -
سابقه و هدفInhibin پروتئینی است که در پاسخ به اثر FSH توسط سلول های گرانولوزا و سرتولی ترشح می شود و باعث کنترل ترشح FSH از هیپوفیز قدامی می گردد. ارزیابی این پروتئین نقش ارزنده ای در آگاهی از وضعیت باروری در زنان و همچنین پیش آگهی از ابتلای جنین به سندروم داون و پره اکلامپسی دارد. اندازه گیری غلظت Inhibin در ارزیابی وضعیت باروری مردان نیز دارای اهمیت می باشد. تا کنون روش های مختلف و طولانی برای تخلیص Inhibin معرفی گردیده است. هدف از این تحقیق خالص سازیInhibin از مایع فولیکولی با روش ایمونوافینیتی می باشد.مواد و روش هامایع فولیکولی جمع آوری شده از زنان مراجعه کننده به مرکز درمانی ابن سینا، پس از فیلتراسیون توسط محلول سولفات آمونیوم اشباع، تغلیظ گردید. جهت جداسازی Inhibin، از روش ایمونوافینیتی بر روی ستون کروماتوگرافی جذبی به کمک آنتی بادی تک دودمانی علیه Inhibin استفاده شد. پس از عبور مایع فولیکولی از ستون کروماتوگرافی جذبی، محلول پروتئینی به دست آمده به کمک روش SDS-PAGE و وسترن بلات ارزیابی شد.نتایجوجود تک باند 32 کیلودالتونی بعد از رنگ آمیزی نقره موید حضور Inhibin بود. نتیجه ی آزمون وسترن بلات نشان دهنده ی شناسایی اپی توپ توسط آنتی بادی علیه Inhibin می باشد. راندمان ستون در جداسازی Inhibin با استفاده از روش کروماتوگرافی افینیتی 92 درصد می باشد.نتیجه گیریاین روش در مقایسه با بسیاری از روش های بیوشیمیایی از راندمان بالایی برخوردار می باشد. با این حال به دلیل عدم دسترسی به مایع فولیکولی انسان در حجم انبوه، تخلیص Inhibin توسط روش ذکر شده در این مقاله بیشتر برای کاربردهای آزمایشگاهی در مقادیر کم بوده و در مقادیر انبوه تولید Inhibin نوترکیب توصیه می شود.
کلید واژگان: Inhibin, مایع فولیکولی, تخلیص, آنتی بادی تک دودمانی}BackgroundInhibin is a protein synthesized by granulosa and sertoli cells which preferentially inhibit pituitary secretion of FSH through a negative-feedback. Studies have showed that measurement of inhibin has a clinical role in understanding the fertility status of men and women and could also be used as a prognostic marker for pre-eclampsia and Down syndrome in fetus. There are many different multi-step procedures for the purification of inhibin. In this study we attempted to purify inhibin from human follicular fluid using immunoaffinity techniques.Materials And MethodsFollicular fluid (FF) collected from women referring to Avicenna Infertility Clinic, was filtrated and subsequently concentrated by ammonium sulfate. The presence of inhibin in follicular fluid was detected using enzyme-linked immunosorbent assay. In order to purify inhibin, an affinity chromatography column using anti-inhibin monoclonal antibody was prepared. The purified protein was analyzed through SDS-PAGE and western blotting after a protein solution load of human inhibin into the column.ResultsThe SDS-PAGE results of affinity proved the presence of inhibin following silver staining appeared as a single 32 kDa band. Western blotting revealed that specific anti-inhibin antibody was able to recognize inhibin epitopes. The present protocol for purification of inhibin is a technique with 92% yield.ConclusionThis method is a sensitive procedure for high yielded productions of inhibin compared to the previously described methods, using HPLC and gel filtration. However, since preparing and obtaining follicular fluid, as a main source of inhibin, is rather difficult but suitable for laboratories, recombinant inhibin is recommended for mass production. -
مقدمهاز آنجایی که وقوع یک لقاح موفق نتیجه برهم کنش مناسب گیرنده ها و لیگاندهای مستقر در غشای دو سلول اسپرم و تخمک می باشد، بنابراین شناسایی وقایع مولکولی و گلیکوپروتئین های دخیل در این برهم کنش، با استفاده از آنتی بادی منوکلونال می تواند اطلاعات موجود در زمینه مکانیسم های دخیل در لقاح را افزایش داده و از طرف دیگر علت ناباروری های ناشی از نقایص مولکولی و یا ناباروری های با علت ایمونولوژیک را روشن سازد.روش کاربعد از تولید آنتی بادی های منوکلونال علیه آنتی ژن های سطحی اسپرماتوزوای انسانی، جهت تولید انبوه آنتی بادی با کشت سلول هیبریدوم در صفاق موش و ایجاد آسیت، مقادیر زیادی آنتی بادی تولید گردید. آنتی ژن های سطحی اسپرم های نرمال با استفاده از دو ترکیب NaCl و LIS به طور جداگانه استخراج شد. جهت تعیین محل آنتی ژن مورد نظر، آزمون ایمونوفلورسانس غیرمستقیم با استفاده از آنتی بادی HS80 صورت گرفت. در ضمن به منظور تعیین وزن مولکولی آنتی ژن مورد نظر، آزمون ایمونوبلاتینگ پروتئین های استخراجی انجام شد.یافته هابعد از تزریق سلول هیبریدوم HS80 به صفاق هر موش حدود mg 5/13 آنتی بادی ازمجموع پنج موش به دست آمد. به دنبال رنگ آمیزی ایمونوفلورسانس در ناحیه آکروزومی و در قسمت کوچکی از ناحیه گردن، فلورسانس درخشانی بین تمام جمعیت سلول های اسپرمی مشخص گردید. در عین حال بعد از آزمون ایمونوبلاتینگ، وزنی در محدوده 4 ±80 کیلو دالتون برای آنتی ژن مورد نظر (HS80) محاسبه شد.نتیجه گیریحضور آنتی ژن مزبور در ناحیه تحت استوایی سر اسپرم، احتمال داشتن نقشی در فرایندهای حیاتی اسپرم از جمله اتصال به غشای سیتوپلاسمی تخمک را در مورد این آنتی ژن افزایش می دهد و امکان دارد اتصال این آنتی بادی به اسپرم بتواند در شرایط فیزیولوژیک بر روند لقاح تاثیر محسوسی داشته باشد که می تواند این امر موضوع تحقیقات بعدی قرار گیرد.
کلید واژگان: آنتی بادی منوکلونال, آنتی ژن های سطحی اسپرم انسان}IntroductionSince interaction between sperm and ovum results in fertilization, determination of molecular events and glycoproteins involved in this interaction may clear the cause of infertilitiy due to molecular defects or immunologic reasons. Thus we studied the properties of mentioned antigens in views of antigenic site and determination of its molecular weight and cross reactivity with other antigens by antisperm monoclonal antibody (HS80).MethodsSurface sperm antigens were extracted by NaCl and Lithium diiodosalicylate (LIS) separately. At the next stage, the location of mentioned antigen was determined by indirect immunofluorescence using HS80 monoclonal antibody. Meanwhile, molecular weight of mentioned antigen was measured by immunoblotting. Finally, ELISA was used to study the cross reactivity of monoclonal antibody with human peripheral blood leukocytes, semen proteins and other mammalian sperms (from rat and mouse).ResultsSub-equatorial and collar regions of all sperms had shiny fluorescence after immunofluorescence staining. Likewise, molecular weight range of the antigen was 80±4. Meanwhile, there was not any cross-reactivity among the antibody and other antigens except a 80 kD human leukocyte surface antigen.ConclusionThe presence of the antigen with 80 kD on sub-equatorial region may increase the possibility of its role in vital processes of sperm such as sperm/oocyte membrane fusion and fertilization. Thus,it is recommended to study the role of this antigen in fertilization, in the presence and absence of HS80 monoclonal antibody, sperm interaction with zona pellucida and Oolema using sperm functional studies. -
زمینه و هدفاختلالات ایمونولوژی را باید یکی از دلایل ناباروری به حساب آورد. آنتی بادی های علیه گامت شامل آنتی بادی علیه اسپرم (ASA) و آنتی بادی علیه زونا (AZA) در ایجاد ناباروری موثر می باشند که عمده این اثرات روی فرآیند لقاح و همچنین مراحل تکامل جنین می باشد. بنابراین بررسی این آنتی بادی ها در بیماران داوطلب لقاح خارج رحمی (IVF) توصیه می شود؛ زیرا در صورت حضور این آنتی بادی ها در سرم و مایع فولیکولی، درمان بیمار از IVF به میکرواینجکشن (ICSI) تبدیل می شود. هدف این مطالعه بررسی حضور آنتی بادی علیه اسپرم و آنتی بادی علیه زونا در مایع فولیکولی بیماران نابارور کاندیدای لقاح خارج رحمی (ICSI) می باشد.روش بررسیدر این مطالعه آینده نگر، مایع فولیکولی 96 بیمار نابارور در محدوده سنی 39-20 سال، (31.5±5.1) کاندیدای ICSI جمع آوری گردید. بر اساس علت ناباروری، 80 بیمار دارای علت ناباروری مشخص و 16 بیمار با علت ناباروری نامشخص بودند. مایع فولیکولی تمام بیماران با روش الایزا برای بررسی AZA و دو روش الایزا و Sperm Mar برای ارزیابی حضور ASA بررسی شد و نتایج با استفاده از نرم افزار SPSS و آزمون آماری X2 آنالیز و نتایج در سطح p<0.05 معنی دار تلقی شد.نتایجبر اساس نتایج روش الایزا و Sperm Mar، در مایع فولیکولی هیچ یک از بیماران آنتی بادی علیه اسپرم دیده نشد. این در حالی است که 20 بیمار، (20.8%) AZA را در مایع فولیکولی نشان دادند. همچنین، در بیماران با ناباروری با علت ناشناخته، شیوع AZA به طور واضحی بالاتر از بیماران نابارور با علت مشخص بود (p=0.001).نتیجه گیریشیوع پایینASA و شیوع بالای AZA در بیماران نابارور، به خصوص در ناباروری با علت ناشناخته در ایران باید مهم تلقی شود. بررسی آنتی بادی علیه گامت به خصوص آنتی بادی علیه زونا در بیماران نابارور مخصوصا در موارد ناشناخته توصیه می شود.
کلید واژگان: آنتی بادی علیه زونا, آنتی بادی علیه اسپرم, مایع فولیکولی, ناباروری با علت ناشناخته, لقاح خارج رحمی, میکرواینجکشن, اتوآنتی بادی, آنتی بادی علیه گامت} -
سابقه و هدفشایع ترین علت قطع مصرف روش های طولانی اثر حاوی فقط پروژسترون مانند دی مدروکسی پروژسترون استات (DMPA) تزریقی، خونریزی های نامنظم قاعدگی به دنبال تغییرات موضعی در ساختمان رگ های آندومتر ذکر شده است. برای کاهش این مشکل روش های تزریقی مختلط مانند سیکلوفم که روش تزریقی یک ماهه حاوی DMPA و سیپرونات استرادیول است به متقاضیان پیشنهاد شد، اما این که تا چه اندازه روش هایی مانند سیکلوفم می توانند در کاهش خونریزی های نامنظم و یا کاهش تاثیر بر ساختمان رگ های آندومتر موفق باشند، هنوز معلوم نیست. این مطالعه با هدف مقایسه اثرات سیکلوفم و DMPA بر تراکم رگ های آندومتر، هیستولوژی آندومتر، الگوی خونریزی و تعداد روزهای خونریزی انجام گرفت.
موارد وروش هادر این کارآزمایی بالینی 68 زن سالم، با دوره منظم قاعدگی و مصرف روش های پیشگیری از بارداری تزریقی شرکت کردند. از هر زن، دو نمونه آندومتر، یکی قبل از اولین تزریق سیکلوفم یا DMPA، و دیگری 3 تا 6 ماه بعد از مصرف آنها با استفاده از پاپیل ساکشن کورت گرفته شد. سپس نمونه ها با استفاده از هماتوکسیلین ائوزین برای مطالعات هیستولوژیک و نیز با استفاده از روش های ایمونوهیستوشیمی و آنتی CD34 برای مشخص کردن مویرگ های آندومتر مورد رنگ آمیزی قرار گرفتند. کارت تقویم قاعدگی را هر زن به طور ماهیانه تکمیل می کرد. رگ های آندومتر توسط دو محقق به صورت بی خبر با بزرگ نمایی 400 شمرده و تراکم به میلیمتر مربع محاسبه می شد. تجزیه و تحلیل آماری با استفاده از نرم افزار SPSS ویرایش 11.5 و آزمون های تی، همبستگی پیرسون و تی مزدوج در سطح معنی دار 95 درصد انجام شد.یافته ها68 زن در دو گروه 30 و 38 نفره، که به ترتیب DMPA و سیکلوفم را به عنوان روش پیشگیری از بارداری پذیرفته بودند در این مطالعه شرکت کردند. تراکم رگ های آندومتر زنان قبل از تزریق 152± 5/mm2 بود که بعد از مصرف DMPA به 144 ±9.9/mm2 و بعد از مصرف سیکلوفم به 131± 12.8mm2، به طور معنی داری کاهش می یافت. اما مقایسه میانگین تراکم رگ های آندومتر در دو گروه تفاوت معنی داری را نشان نمی داد. تعداد روزهای خونریزی و لکه بینی در سه ماهه اول و دوم پس از مصرف DMPA به ترتیب 28 ±4.6 و 18± 4.4 روز بود که در مقایسه با مصرف کنندگان سیکلوفم که به ترتیب 4.6 ±25 و 4.2 ±16 روز بود، تفاوت معنی داری را نشان نمی داد. شایع ترین شکل خونریزی در مصرف کنندگان هر دو روش لکه بینی بود که در مصرف کنندگان DMPA، 5 ±14 روز و در مصرف کنندگان سیکلوفم 3.8± 12.2 روز بود که این تفاوت نیز معنی دار نبود. رگ های متسعی در نزدیکی سطح اپی تلیال آندومتر مصرف کنندگان DMPA مشاهده شد. شایع ترین نمای هیستولوژیک در مصرف کنندگان هر دو روش نمای آتروفیک آندومتر بود. ارتباط معنی داری بین تعداد روزهای خونریزی در سه ماه گذشته و تراکم رگ ها در هیچ یک از دو گروه وجود نداشت.نتیجه گیریاین مطالعه نشان داد که سیکلوفم و DMPA، هر دو، موجب کاهش تراکم رگ های آندومتر و آتروفیک شدن آندومتر و ایجاد خونریزی نامنظم می شوند که بیشتر به شکل لکه بینی است و تفاوت معنی داری با یکدیگر نشان نمی دهند. به نظر می رسد که برای ارتقای میزان پذیرش روش های تزریقی طولانی اثر تحقیقات بیشتری برای کاهش عوارض جانبی و خونریزی های نامنظم لازم است.
کلید واژگان: DMPA, سیکلوفم, خونریزی غیر طبیعی, رگ های آندومتر} -
مقدمه
از انجا که آنتی بادی های مونو کلونال ابزارهای قدرتمندی جهت شناسایی آنتی ژن اختصاصی شان به صورت محلول و یا مستقر در سطح سلول می باشند، استفاده از آنها مدت هاست که در زمینه تحقیقات تولید مثل و نازایی جهت شناسایی مولکول های سطحی مستقر در غشای اسپرم مد نظر قرار گرفته است....
کلید واژگان: آنتی بادی مونوکلونال, آنتی ژنهای سطحی اسپرم انسان}IntroductionAs monoclonal antibodies are potential tools for characterization of soluble or cellular surface antigens, use of these proteins has always been considered in infertility and reproduction research. Therefore, in this study, monoclonal antibodies against human sperm surface antigens were produced.
Material and MethodsTo produce specific clones against human sperm surface antigens, proteins were extracted using solubilization methods. Balb/c mice were immunized intraperitoneally with the proteins using complete Freund’s adjuvant in the first injection and incomplete Adjuvant in the following booster injections. Hybridoma cells producing ASA were cloned by limiting dilution.
ResultsFive stable ASA producing hybridoma clones were achieved and their antibody isotypes were determined by ELISA. All the isotypes were of IgG class. Their cross reactivity with rat and mice spermatozoa was examined but they did not have any cross reactivity.
ConclusionThe produced antibodies can be used in further studies to characterize and evaluate each of the antigens present on human sperm surface and determining their role in fertilization.
Keywords: Monoclonal Antibody, Human Surface Spermatozoa Antigens} -
سابقه و هدفمولکول فریتین با وزن مولکولی 450 کیلودالتوم، پروتئین اصلی ذخیره کننده آهن می باشد که از 24 زیرواحد شامل زنجیره های سبک و سنگین تشکیل شده است و هر مولکول آن می تواند 4500 اتم آهن فریک را در خود ذخیره نماید. هدف این مطالعه، تعیین تخلیص فریتین با درجه خلوص بالا جهت استفاده در سیستم های تشخیصی و تحقیقاتی می باشد.مواد و روش هادر این مطالعه با استفاده از حرارت دادن بافت هموژنیزه شده کبد در دمای 75 درجه سانتیگراد، رسوب دادن با سولفات آمونیوم و کروماتوگرافی ژل فیلتراسیون با سفادکس G-200، فریتین از این بافت استخراج و تخلیص گردید. به منظور افزایش درجه خلوص فریتین کروماتوگرافی چرخشی مورد استفاده قرار گرفت. پروتئین حاصل، در ژل پلی آکریلامید در مجاورت سدیم دو دسیل سولفات الکتروفورز گردید. (SDS-PAGE) از آزمون الایزا و رنگ آمیزی ژل با پتاسیم فری سیانید برای اطمینان از حصول فریتین و از رنگ آمیزی ژل با نیترات نقره جهت اطمینان از درجه خلوص فریتین استفاده شد. جهت تایید وجود زیرواحدهای 19 و 21 کیلودالتون، فریتین حاصله در شرایط احیاء در حضور 2- مرکاپتو اتانول الکتروفورز شد.یافته هادر این روش فریتین کاملا خالص بدست آمد و بازده این روش 100 میکروگرم فریتین به ازای هر گرم بافت تازه کبد بود. الکتروفورز فریتین در شرایط احیاء در حضور 2- مرکاپتو اتانول، وجود زیرواحدهای 19 و 21 کیلو دالتون را در این پروتئین تائید نمود.نتیجه گیریروش مورد استفاده جهت استخراج و تخلیص فریتین از بافت کبد منجر به تولید فریتین با درجه خلوص بسیار بالا گردید که برای استفاده در زمینه های تشخیصی و تحقیقاتی مناسب بوده و بازده این روش نسبت به مطالعات دیگر قابل قبول می باشد.
کلید واژگان: فریتین, تخلیص, کروماتوگرافی ژل فیلتراسیون, کروماتوگرافی چرخشی} -
مقدمهبا وجود پیشرفت و گسترش تحقیقات در زمینه تولید مثل و ناباروری و به ویژه فرآیند لقاح، در حال حاضر تعداد اندکی از آنتی ژن های مؤثر در فرآیند لقاح در سطح اسپرم و تخمک، شناسایی شده است. مطالعه این مولکول ها و بررسی خصوصیات بیوشیمیایی، بیوفیزیکی و فیزیولوژیکی آنها، درک هرچه بهتر فرآیند لقاح را تسهیل می کند. گذشته از آن، علت اصلی درصد بالایی از ناباروری های با علت نامشخص که ناشی از وجود نقایص مولکولی آنتی ژن های دخیل در عمل لقاح می باشند، لذا هدف این مطالعه تعیین خصوصیات آنتی ژن مورد شناسائی توسط آنتی بادی منوکلونال HS56 می باشد.مواد و روش هاسلول های هیبریدومای مولد آنتی بادی منوکلونال HS56 علیه آنتی ژن سطحی اسپرم انسان به صفاق موش های نر بالغ 8-6 هفته تزریق شدند تا مقادیر زیاد آنتی بادی از مایع آسیت، به دست آید. آنتی بادی مذکور توسط ستون افینیتی کروماتوگرافی پروتئین G، تخلیص و ایزوتیپ این آنتی بادی توسط آزمون الایزا تعیین گردید. آنتی ژن های سطحی اسپرم انسان توسط لیتیوم دی یدوسالیسیلات (LIS) استخراج و الکتروفورز SDS-PAGE روی این آنتی ژن ها انجام گرفت. به منظور تعیین وزن مولکولی و برخی خصوصیات بیوشیمیایی آنتی ژن مورد نظر، وسترن بلاتینگ انجام شد و محل قرارگیری این آنتی ژن در سطح اسپرم انسان به کمک آزمون ایمنوفلورسانس غیرمستقیم بررسی شده و در نهایت تاثیر یا عدم تاثیر این آنتی ژن در واکنش آکروزومی مورد بررسی قرار گرفت. تحلیل داده ها بر اساس مقایسه داده های زوج شده و آزمون Wilcoxon Signed Ranks Test انجام و سطح معنی داری، 05/0 در نظر گرفته شد.نتایجبا تکنیک SDS-PAGE الگوی الکتروفورتیک آنتی ژن های استخراج شده با نمک LIS، مشاهده شد و با آزمون الایزا مشخص شد که آنتی ژن مورد شناسایی توسط آنتی بادی منوکلونال HS56، در مجموعه آنتی ژنی استخراج شده از سطح اسپرم با استفاده از LIS، وجود دارد. ایزوتیپ آنتی بادی منوکلونال HS56 از نوعIgG1 تعیین شد. پس از انجام وسترن بلاتینگ، مشخص شد که وزن مولکولی آنتی ژن مورد نظر حدود 56±2 kDa است و در ساختار مولکول پروتئین مورد نظر، باند دی سولفیدی وجود دارد. آزمون ایمنوفلورسانس غیرمستقیم نشان داد که محل قرارگیری این آنتی ژن در ناحیه آکروزومی و گردن اسپرم می باشد. با مجاور نمودن آنتی بادی منوکلونال با اسپرم و القاء واکنش آکروزومی، مشخص شد که بلوکه کردن این اپی توپ با آنتی بادی منوکلونال HS56، تاثیری در واکنش آکروزومی ندارد (11/0 =P).نتیجه گیریبراساس بررسی های انجام شده، هرچند آنتی ژن HS56 در ناحیه آکروزومی و سراسپرم قرار دارد ولی نقش اساسی در فرآیند واکنش آکروزومی دارا نمی باشد. بررسی بیشتر این آنتی ژن بوسیله تخلیص و بررسی ساختار مولکولی آن و نیز نقش آن در اتصال اسپرم و تخمک، ارزش این آنتی بادی را مشخص خواهد نمود.
کلید واژگان: اسپرم, آنتی ژن سطحی اسپرم, آنتی بادی منوکلونال, واکنش آکروزومی, و باروری} -
سلولهای دندریتیک، سلول های اصلی عرضه کننده آنتی ژن و مسوول القا پاسخ های ایمنی اولیه بوسیله لنفوسیت های T هستند. اگرچه سلولهای دندریتیک در بسیاری از بافت های لنفاوی حضور دارند ولی تعداد آنها بسیار کم بوده و کمتر از 5/0% سلولهای هسته دار اعضای لنفوییدی محیطی را به خود اختصاص می دهند. در این پژوهش، روش تخلیص سلول های دندریتیک از طحال موش با بازده و خلوص قابل توجه با استفاده از یک تکنیک سه مرحله ای گزارش شده است. مراحل تخلیص به ترتیب عبارت بود از: هضم آنزیمی بافت توسط کلاژناز، جداسازی سلولهای کم چگال با استفاده از محیط اپتی پرپ و اتصال به پلاستیک. با بکارگیری تکنیک های فوق الذکر از هر طحال 105×7-5 سلول دندریتیک با خلوص بالاتر از 97% بدست آمد. در دسترس بودن سلولهای دندریتیک خالص، ما را قادر خواهد ساخت که خصوصیات مختلف این سلولها نظیر مرفولوژی، ایمونوفنوتیپ و نقش آنها را در سیستم ایمنی، بیشتر و دقیق تر مورد ارزیابی قرار دهیم. از طرف دیگر با توجه به حضور سلولهای دندریتیک در اعضای تولید مثل، از این روش می توان در تخلیص و مطالعه سلولهای دندریتیک اعضای مذکور استفاده کردکلید واژگان: سلولهای دندریتیک, طحال, تخلیص و سانتریفوژ گرادیان غلظتی}
بدانید!
- در این صفحه نام مورد نظر در اسامی نویسندگان مقالات جستجو می‌شود. ممکن است نتایج شامل مطالب نویسندگان هم نام و حتی در رشته‌های مختلف باشد.
- همه مقالات ترجمه فارسی یا انگلیسی ندارند پس ممکن است مقالاتی باشند که نام نویسنده مورد نظر شما به صورت معادل فارسی یا انگلیسی آن درج شده باشد. در صفحه جستجوی پیشرفته می‌توانید همزمان نام فارسی و انگلیسی نویسنده را درج نمایید.
- در صورتی که می‌خواهید جستجو را با شرایط متفاوت تکرار کنید به صفحه جستجوی پیشرفته مطالب نشریات مراجعه کنید.
©2000-2024 magiran.com All Rights Reserved.