فهرست مطالب مهدی فروزنده
-
تغییرات مورفولوژی سلول های کلراید و بیان ژن زیر واحد 1bα آنزیم Na+-K+-ATPase قزل آلای تریپلوئید Oncorhynchus mykiss (میانگین وزن 6/70 گرم)، در انتقال مستقیم به شوری های 6، 12 و 18 ppt مورد بررسی قرار گرفتند. تغییرات در فراوانی، الگوی پراکنش و سطح مقطع برش خورده سلول های کلراید آبشش با استفاده از تکنیک بافت شناسی کلاسیک و مکان یابی Na+-K+-ATPase آبشش با استفاده از تکنیک ایمونوهیستوشیمی و استفاده از آنتی بادی IgGα5 انجام شد. بیان ژن زیر واحد 1bα آنزیم Na+-K+-ATPase با استفاده از تکنیک بیان ژن نیمه کمی مورد سنجش قرار گرفت .میزان بقا در طی دوره 10 روزه آزمایش در تمام تیمارها صد درصد بود و ماهیان منتقل شده به سطوح مختلف شوری اسمولالیته پلاسما را در سطوح استاندارد حفظ کردند. الگوی پراکنش سلول های کلراید در تمام تیمار ها مشابه و بر روی لاملا، پایه و بین لاملا بوده است. نتایج مطالعات ایمونوهیستوشیمی نشان دادند که بیشترین تعداد سلول های کلراید لاملایی و بین لاملایی در تیمار 18 pptوجود دارند. بیشترین مساحت سطح مقطع برش خورده سلول های کلراید در آب شیرین مشاهده شد. تغییرات بیان ژن زیر واحد 1bα آنزیم Na+-K+-ATPase با افزایش شوری، روند افزایشی نشان داد. با توجه به نتایج تحقیق به نظر می رسد ماهی قزل آلای تریپلوئید به خوبی خود را با شوری های اعمال شده در محیط آزمایش سازگار کرده و توانایی لازم در مقابله با شوری های بررسی شده را دارند و به نظر گونه مناسبی جهت پرورش در آب های لب شور می باشند.کلید واژگان: تریپلوئیدی, سلول های کلراید, بیان ژن نیمه کمی, ایمونوهیستوشیمی, ماهی قزل آلای رنگین کمان}Morphological changes of the chloride cells and the α1b subunit gene expression of Na+K+ATPase in triploid rainbow trout (70.6 g average weight) were studied upon direct transferring to 6, 12 and 18 ppt salinities. Changes in abundance, distribution pattern, and the sectioned area of the chloride cells was studied through classic histology and Na K+ATPase localization was performed through immunofluorescence light microscopy using a mouse monoclonal antibody IgGα5. Gene expression of Na+K+ATPase α1b subunit was studied by semi-quantitative gene expression methods.No mortality occurred among the fish in all salinities during the 10-days experimental period and treated fish kept their plasma osmolality at standard physiologic levels. All the fish also showed similar distribution pattern in their chloride cells that were distributed on filaments, between and over lamella. Histological studies confirmed some abnormal morphological changes such as lamella interruption. Immunohistochemical studies showed the highest number of the chloride cells on lamella and between lamella in 18 ppt and the maximum sectional area of the chloride cells in freshwater. Gene expression of Na+K+ATPase α1b subunit had direct correlation with increasing trend of salinity. In conclusions, triploid rainbow trout was found to be adaptable to the various experimented salinities and could be recommended for rearing in brackish water.Keywords: Triploidy, Chloride cell, Semi quantitative Gene expression, Immunohistochemistry, Oncorhynchus mykiss}
-
بلاستوسیستیس تک یاخته ای زئونوز و بی هوازی است که به صورت مستقیم از طریق خوردن آب و مواد غذایی آلوده به کیست منتقل می شود. این انگل دارای انتشار جهانی بوده و شیوع آن در جوامعی که سطح بهداشتی پایین تری دارند، بیشتر است. در این مطالعه، 196 نمونه مدفوع ازگاوهای کشتاری (98 نمونه) و گاو داری های (98 نمونه) شهرستان خرم آباد، به صورت تصادفی جمع آوری شد. پس از استخراج DNA، آلودگی نمونه ها به بلاستوسیستیس به روش PCR مورد بررسی قرار گرفت. از 196نمونه مدفوع گاوی 19نمونه (7/9 %) به انگل بلاستوسیستیس مبتلا بودند که 12(2/12 %) نمونه گاو های کشتاری و 7 (1/7 %) نمونه از گاوهای دامپروری بودند. از آنجایی که گاو به عنوان یک منبع مهم غذایی از نظر تامین گوشت و سایر فرآورده های آن در ایران محسوب می شود، بررسی این آلودگی با توجه به امکان انتقال آن به انسان از اهمیت ویژه ای برخوردار است.
کلید واژگان: بررسی مولکولی, بلاستوسیستیس, مدفوع, گاو, خرم آباد, ایران}Blastocystis is a zoonotic and anaerobic protozoan that transmitted directly by the cyst via contaminated water and food. It is cosmopolitan in distribution and its prevalence is higher in the community with poor hygiene. Stool samples (n=196) were collected from cattle of slaughterhouse (98 samples) and dairy farms (98 samples). DNA extracted for each sample and analyzed by PCR for Blastocystis contamination. Out of 196 samples , 19 ( 9.6% ) samples were positive for Blastocystis that 12 ( 12.2% ) samples were form cattle of slaughterhouse and 7 ( 7.1% ) samples from cattle of dairy farms. Since cattle are as an important source of food for the supply of meat and other products in Iran, hence investigation of the contamination and possibility of transmission to humans is of particular importance.
Keywords: Molecular prevalent, Blastocystis, Feces, Cattle, Khorramabad city, Iran} -
مقدمهبلاستوسیستیس هومینیس، انگلی تک یاخته ای، بی هوازی و زئونوز است که در روده بزرگ انسان و بسیاری از مهره داران دیگر یافت می شود. انتشاری جهانی و انتقال آن در میزبان های مختلف مستقیم و از طریق کیست به همراه آب و مواد غذایی آلوده صورت می گیرد و عواملی مانند فرهنگ بهداشتی، فصول سال، ارتباط باحیوانات و سن در شیوع آن موثرند. برخلاف گذشته، بسیاری از مطالعات دهه اخیر، بیماریزایی بالقوه آن را تایید و علائم گوارشی و خارج گوارشی متعددی را به آن نسبت می دهند. این انگل دارای مرفولوژی، سیر تکاملی و تکثیر عجیب و منحصر به فردی است. این مطالعه با هدف بررسی شیوع مولکولی این انگل در مراجعه کنندگان به آزمایشگاه های شهر خرم آباد انجام شد.مواد و روش هادر این مطالعه که برای اولین بار در استان لرستان انجام گرفت، 511 نمونه مدفوع از افراد مراجعه کننده به آزمایشگاه های شهر خرم آباد جمع آوری گردید که پس از استخراج DNA با روش PCR، جهت تشخیص مولکولی انگل بلاستوسیستیس مورد مطالعه و بررسی قرارگرفتند.یافته هااز511 نمونه که مورد بررسی قرار گرفته، 33 نمونه (5/6%) به بلاستوسیستیس آلوده بودند.بحث و نتیجه گیریشاخص های مرفولوژیک انگل و سایر عوامل مداخله گر، تشخیص میکروسکوپی آن را با چالش هایی مواجه ساخته اند و روش تشخیصی PCR که حساسیت و ویژگی بالاتری نسبت به سایر روش های تشخیصی دارد، توصیه می شود. محققان، دنیا را بر حسب میزان شیوع انگل بلاستوسیستیس به دو گروه توسعه یافته تا 10% و در حال توسعه تا 50% تقسیم نموده اند که شیوع 5/6% جمعیت مذکور در شهر خرم آباد، در محدوده کشورهای گروه اول است که با توجه به منبع آب آشامیدنی شهر خرم آباد که اکثرا از چشمه ها تامین می شود، قابل تفسیر است ولی از آنجا که دامداری یکی از مشاغل مهم استان محسوب می شود، رعایت نکات بهداشتی و پوشش مناسب را هنگام برخورد با حیوانات ضروری می نماید. ضمنا نتایج این تحقیق و مطالعات مشابه در کشور های در حال توسعه از یک طرف و شیوع در حال افزایش 23درصدی در ایالات متحده آمریکا به عنوان یک کشور توسعه یافته از طرف دیگر، معادله تقسیم بندی قبلی را به هم زده است.
کلید واژگان: بلاستوسیستیس هومینیس, PCR, خرم آباد}Yafteh, Volume:14 Issue: 4, 2012, PP 107 -112BackgroundBlastocystis hominis is an anaerobic، zoonotic protozoan parasite which inhabits the large intestine of humans and a wide range of other vertebrates. It has a worldwide distribution and infects hosts through the cyst of the parasite by contaminated water or food. Its prevalence is related to hygienic culture، season، exposure to animals، and age. A number of studies in the last decade have confirmed its potential pathogenicity، and many gastrointestinal and extra-gastrointestinal signs have been attributed to it. It has unique morphology، life cycle، and reproduction. The aim of this research is to study molecular prevalence of this parasite in the patients referred to Khorramabad laboratories.Materials And MethodsIn this study، conducted for the first time in Lorestan province، 511 stool samples were collected from patients in laboratories of Khorramabad. After DNA was extracted using PCR، the samples were examined for the existence of Blastocystis parasite.ResultsOut of the 511 samples studied، 33 ones (6. 5%) were infected with Blastocystis.ConclusionThe microscopic diagnosis is challenged by morphological characteristics and other intervening factors، and the PCR method، which has higher sensitivity and specification than other diagnostic methods، is recommended. Concerning the prevalence of the parasite، the world has been divided into two parts of developed and developing countries by the researchers، with 10% and 50% prevalence rates respectively. The 6. 5% prevalence in the cited population in Khorramabad is in the range of the prevalence in the developed countries. Therefore، the result is justifiable since springs provide most of the drinking water in the region. However، since ranching is a popular occupation in the region، the prevalence rate is alarming. Therefore، following health instructions and appropriate clothing when exposing to livestock are recommended. In addition، the results of this study and similar studies in the developing countries، on the one hand، and the increasing prevalence of 23% in the US as a developed country، on the other hand، have disturbed the previous division.Keywords: Blastocystis hominis, PCR, Khorramabad} -
زمینه و هدف
ژیاردیا لامبلیا تک یاخته انگلی آلوده کننده روده کوچک است که در سراسر جهان انسان را آلوده می کند. این انگل در انسان معمولا به وسیله مواد غذایی و آب های آلوده به کیست انتقال می یابد. هدف از این تحقیق ارزیابی تفاوت های ژنتیکی ژیاردیا لامبلیا در شهر خرم آباد و روستاهای اطراف با استفاده از PCR و تعیین توالی بود.
روش بررسیدر این تحقیق 30 نمونه مثبت مدفوع از نظر ژیاردیا لامبلیا از شهر خرم آباد و روستاهای اطراف جمع آوری شد و سپس نمونه ها بعد از صاف کردن در محلول دیکرومات 5% نگهداری شدند. قبل از استخراج DNA با روش فنل کلروفورم تمامی نمونه ها برای زدودن دیکرومات با محلول PBS شستشو داده شدند. به منظور تعیین تفاوت های ژنتیکی 5 نمونه بصورت تصادفی انتخاب و تعیین توالی بر روی آنها انجام شد.
یافته هاپس از استخراج DNA، تکثیر ژن GDH با روش PCR از 30 نمونه مدفوع دارای انگل بر روی 24 نمونه با موفقیت انجام شد. هم ردیفی توالی GDH به دست آمده با توالی های بانک ژن انجام گردید و بدلیل محدودیت مالی 3 نمونه شهری و 2 نمونه روستایی همه از ژنوتایپ A زیاردیا لامبلیا بودند و تفاوتی مشاهده نشد.
نتیجه گیریاین مطالعه نشان داد که ژنوتایپ غالب در شهر خرم آباد و روستاهای اطراف می تواند ژنوتایپ A باشد ولی بدلیل محدود بودن نمونه ها تحقیقات بیشتری لازم می باشد.
کلید واژگان: ژنوتایپ, ژیاردیالامبلیا, شهرستان خرم آباد, PCR و تعیین توالی}Background And AimThe intestinal protozoa Giardia lamblia is a parasite frequently involved in human parasitic gastroenteritis throughout the world. Transmission of G. lamblia cysts to human occurs mainly via ingestion of contaminated food and water. The aim of this study was to evaluate Giardia lamblia genetic differences in the Khorramabad City and its surrounding villages by means of PCR and sequencing.
Material And MethodsIn these study 30 fecal samples positive for Giardia lamblia were collected from the patients in Khorramabad city and its surrounding villages. The samples were fixed in dichromate 5% after filtration. Before DNA extraction, all samples were washed with PBS solution in order to remove dichromate. For determination of genetic differences sequencing on 5 samples was performed.
ResultsAfter DNA extraction, amplification of GDH gene from 24 of 30 samples was performed by PCR, successfully. Alignment of the obtained GDH sequences with reference sequences (gene bank) indicated the presence of only one genotype of G. lamblia; 5 specimens were identified as G. lamblia assemblage A.
ConclusionAssemblage A was the dominant genotype in Khorramabad City and its surrounding villages. Because of limited number of samples in this study, further studies with higher number of samples are recommended.
Keywords: Genotype, Giardia lamblia, Khorramabad City, PCR, sequencing} -
هدفتوکسوپلاسموزیس از بیماری های دارای گسترش جهانی است که برای تشخیص آن از روش های مختلفی استفاده شده است. روش NASBA به دلیل شناسایی میکروارگانیسم های زنده، دارای ویژگی بالایی است. هدف از این مطالعه، ارزیابی روش مولکولی هم دمایی (ایزوترمال) NASBA در تشخیص انگل زنده توکسو پلاسما در مدل حیوانی رت است.
مواد و روش هاپس از تکثیر انگل در صفاق موش سوری، RNA از فرم تاکی زوئیت تخلیص شد و از روش NASBA برای تکثیر ژن B1 برای تشخیص انگل زنده استفاده شد. در مرحله دوم مطالعه، از روش NASBA برای تشخیص آلودگی تجربی توکسوپلاسما در خون 30 سر رت (مورد و شاهد) استفاده شد. باند حاصل از تکثیر این ژن اختصاصی، روی ژل آگارز مطالعه شد.
نتایجاز نمونه تاکی زوئیت و خون رت ها ژن اختصاصی B1 با موفقیت با روش NASBA در ناحیه 116 جفت بازی تکثیر و شناسایی شد.
نتیجه گیریروش تکثیری هم دمایی NASBA روش ایده آل با ویژگی بالا در تشخیص انگل زنده توکسوپلاسما گوندی است. از این روش می توان برای تشخیص سریع توکسوپلاسموزیس فعال در نوزادان و بیماران دارای نقص سیستم ایمنی استفاده نمود.
کلید واژگان: توکسوپلاسما گوندی, روش NASBA, ژن B1 rRNA}ObjectiveToxoplasmosis is a worldwide disease, for which different detection methods have been used. The nucleic acid sequence-based amplification (NASBA) method is shown to be highly efficient for diagnosis of live microorganisms. The present research evaluates the molecular isothermal method of NASBA to identify live Toxoplasma gondii (T. gondii) in rat.MethodsTachyzoites of T. gondii were inoculated in the peritoneal cavities of mice (Mus musculus) and their RNA was extracted. The NASBA method was then used to amplify the tachyzoite B1 rRNA gene. Next, we examined blood samples from 30 experimentally infected case and control rats (Rattus norvegicus) by NASBA. Finally, the resultant band was investigated on an agarose gel.ResultsThe B1 genes extracted from both the tachyzoites and blood samples were successfully amplified by the NASBA method. This amplified gene yielded an amplicon of approximately 116 bp on gel agarose.ConclusionNASBA is highly efficient for the identification of live T. gondii. This method can be applied for early diagnosis of active toxoplasmosis in both newborns and immunocompromised individuals.Keywords: Toxoplasma gondii, NASBA method, B1 rRNA gene} -
سابقه و هدفعفونت های میکروسپوریدیایی در تمام میزبانان مهره دار و بی مهره رخ می دهد. شایع ترین میکروسپوریدیای آلوده کننده انسان و حیوانات انتروسایتوزون بینئوسی است. هدف از این مطالعه شناسایی ایزوله های زئونوز انتروسایتوزون بینئوسی در گاوهای کشتار شده تهران به روش مولکولی می باشد.مواد و روش هادر این مطالعه توصیفی 126 نمونه مدفوع از گاوهای کشتار شده تهران جهت وجود انتروسایتوزون بینئوسی بررسی شدند. یک قطعه 500 جفت بازی ژن RNA ریبوزومی شامل ناحیه ITS انتروسایتوزون بینئوسی با استفاده از تکنیک nested-PCR تکثیر یافت. جهت تعیین ژنوتیپ، نمونه ها تعیین توالی شده و برای تعیین رابطه فیلوژنتیکی ایزوله های این مطالعه با ایزوله های انسانی، حیوانی و زئونوتیک، درخت فیلوژنی رسم شد.نتایجاز 126 نمونه، 19 نمونه (1/15 درصد) از نظر PCR مثبت و تعیین توالی شد. توالی ها دارای درجه بالایی از پلی مورفیسم ژنتیکی بوده و در 4 ژنوتیپ IREb4، IREb5، D و M قرار داشتند. ژنوتیپ D با 8/36 درصد شایع ترین ژنوتیپ، M و IREb4 هریک با 3/26 درصد و IREb5 با 5/10 درصد در جایگاه بعدی قرار گرفتند. در آنالیز فیلوژنتیک، 5/89 درصد ژنوتیپ های شناسایی شده (D، IREb4 و IREB5) تشکیل شاخه ای مجزا را داده و در زمره ژنوتیپ های جدا شده از انسان و حیوانات اهلی قرار گرفته، ولیکن یک ژنوتیپ (M) در زمره ژنوتیپ های جدا شده از گاو و خوک در یک شاخه قرار گرفت.نتیجه گیریتنها برخی از ایزوله های گاوی (ژنوتیپ D) انتروسایتوزون بینئوسی زئونوز بوده و دارای اهمیت بهداشتی هستند. با این وجود بایستی بررسی های بیش تری روی گاو و میزبانان دیگر صورت پذیرفته تا نقش حیوانات در انتقال این عفونت به انسان مشخص شود.
کلید واژگان: انتروسایتوزون بینئوسی, RNA ریبوزومی, ژنوتیپ, زئونوز, درخت فیلوژنتیک}BackgroundMicrosporidia infections occur in all invertebrate and vertebrate hosts. The most common microsporidia infecting humans and animals are Enterocytozoon bieneusi. This study aimed to characterize the zoonotic isolates of E. bieneusi using a molecular method among the slaughtered cattle in Tehran.Materials And MethodsIn this descriptive study, 126 fecal samples from slaughtered cattle in Tehran were analyzed for Enterocytozoon bieneusi. A transcribed spacer region (500 bp) for rRNA gene of E. bieneusi was amplified using a nested PCR technique. For genotyping, positive samples were sequenced and the phylogenetic tree was reconstructed to determine the relationship between the isolates from human, animal and zoonotic isolates.ResultsNineteen out of 126 E. bieneusi PCR-positive samples were sequenced. A high degree of genetic polymorphism, represented by four genotypes (IREb4, IREb5, D, M), was found among the E. bieneusi isolated from cattle. In this study, the most common genotypes were D (38. 6%), M and IREb4 (26. 3%), respectively followed by IREb5 (10. 5%) in the next stage. In phylogenetic analysis, 89. 5 percent of the isolates (D، IREb4 و IREB5) formed a distinct cluster consisting of genotypes from humans and other domestic animals, but one genotype clustered as E. bieneusi genotypes taken from cattle and pig.ConclusionOnly some E. bieneusi isolates taken from cattle may be of public health importance. However, further studies should be conducted on cattle and other hosts to determine the role of animals in the transmission of infection to human. -
سازگاری ماهیان هیبرید تریپلوئید حاصل از آمیزش ماهی آزاد دریای خزر (نر) و قزل آلای رنگین کمان (ماده) در انتقال مستقیم به آب با شوری های 6، 12 و 18 در هزار مورد بررسی قرار گرفت. روند تغییرات اسمولالیته پلاسمای خون، پراکنش و تعداد سلولهای کلراید و همچنین بیان ژن زیر واحد 1bآلفا آنزیم Na+-K+-ATPase بافت آبشش با روش های اسمومتری، بافت شناسی، ایمونوهیستوشیمی و بیان ژن بررسی گردید. نتایج حاصل پس از طی دوره 10 روزه سازگاری ماهیان با آب شور نشان داد که ماهیان هیبرید تریپلوئید در تیمار 6 در هزار هیچ گونه تلفاتی نداشته ولی در تیمارهای12 و 18 در هزار میزان بقاء به ترتیب 77 و 60 درصد بود. به دنبال انتقال گونه مذکور به سطوح مختلف شوری تغییری در الگوی پراکنش سلولهای کلراید ایجاد نشد و سلولهای کلراید بر روی لاملا، پایه و بین لاملا پراکنش داشتند. در مطالعه بافت شناسی، برخی تغییرات ریخت شناسی خاص از جمله پیوستگی لاملا در نتیجه انتقال به شوری در ماهیان هیبرید مشاهده گردید. نتایج مطالعات ایمونوهیستوشیمی نشان داد، که بیشترین تعداد سلولهای کلراید لاملایی و بین لاملایی در تیمار 18 در هزار وجود دارد. تغییرات بیان ژن زیر واحد 1bآلفا آنزیم Na+-K+-ATPase در ماهیان هیبرید روند منظمی را نشان نداد. با توجه به نتایج تحقیق به نظر می رسد ماهیان هیبرید توانایی لازم در مقابله با شوری و سازگاری با آن را ندارند.
کلید واژگان: هیبریداسیون, تریژلوئیدی, سلول های کلراید, بیان ژن, ایمونوهیستوشیمی, ماهی آزاد دریای خزر, ماهی قزل آلای رنگین کمان}Adaptation of triploid hybrid fish)Oncorhynchus mykiss × Salmo trutta caspius) studied in direct transportation to 6,12 and 18 ppt (salinity according to Caspian sea salinity). Osmolality of blood plasma, distribution and number of chloride cells as well as gene expression of Na+-K+-ATPase alpha1b subunit has studied by osmometry, histology, imunohistochemistry and gene expression methods. 10 days after transition to different salinity levels no mortality was seen in 6 ppt, but in 12 ppt and 18 ppt survival rat was 77% and 60% respectively After fish transferring Chloride cell distribution pattern did not change and Chloride cells were distributed on filaments, between lamella and on lamella in all treatments. In histology studies some morphological changes such as lamella connection has seen. Immunohistochemistry studies showed that maximum number of lamellar and inter lamellar chloride cell are in 18 ppt. changes of Na+-K+-ATPase alpha 1b subunit gene expression didn’t show regular trend. According to results seems that triploid hybrid fish don’t have necessary ability for salinity tolerance.
-
IntroductionInhibition of renin angiotensin system represents an important approach in the management of cardiovascular diseases. The aim of this study was to explore the effects of pretreatment with non-hypotensive dose of angiotensin converting enzyme (ACE) inhibitor, ramiprilat and angiotensin type 1 (AT1) receptor blocker, losartan on myocardial infarct size and arrhythmias in a rat model of ischemia-reperfusion injury.MethodsSeventy male Wistar rats were divided into five groups. One group received saline as control. Other groups were given 10 mg/kg/day of losartan for one (L-1W) or ten weeks (L-10W) as well as 50 μg/kg/day of ramiprilat for one (R-1W) or ten weeks (R-10W) using a feeding needle. The rats were subjected to 30 minutes occlusion and 120 minutes reperfusion of the left coronary artery. Infarct size was determined using triphenyl tetrazolium chloride staining. Ischemia-induced ventricular arrhythmias were analyzed in accordance with the Lambeth conventions.ResultsMyocardial infarct size and the number of ventricular beats were significantly reduced in R-1W group, but the reduction was not significant in L-1W. After increasing the duration of pretreatment to 10 weeks in L-10W group, the infarct size, the number of ventricular beats and the episodes of ventricular tachycardia were significantly decreased. However in R-10W group the reduction of ventricular arrhythmias was not significantConclusionBased on the above mentioned results it could be concluded that losartan and ramiprilat, at a nonhypotensive dose, can reduce the induction of arrhythmias and infarct size following myocardial ischemia reperfusion. These drugs appear to act in a time-dependent manner. Therefore, we expected an increased cardiac effect by long-term administration of losartan. However prolonged treatment with ramiprilat reduced its protective effect.
-
هدفامروزه سلول های بنیادی خون ساز بند ناف به یکی از مهم ترین منابع سلول های بنیادی خون ساز تبدیل شده اند، اما متاسفانه تعداد محدود آن ها در واحدهای خون بند ناف استفاده از آن ها را در موارد پیوند مغز استخوان بزرگسالان محدود نموده است. یکی از روش های در نظر گرفته شده برای غلبه بر این مشکل، ازدیاد سلول های بنیادی خون ساز با استفاده از افزایش فعالیت خود تجدید شوندگی آن ها در محیط کشت است. چنین به نظر می رسد که مسیر TGF-b یکی از عوامل مهم مهاری فعالیت خود تجدید شوندگی سلول های بنیادی خون ساز است. در این مطالعه سعی شده است تا با مهار علامت دهی مسیر TGF-b میزان تکثیر خود تجدید شوندگی سلول های بنیادی و در نتیجه ازدیاد آن ها را ارتقا یابد.مواد و روش هاسلول های بنیادی خون ساز بند ناف CD34+ با استفاده از ستون های MACS از واحدهای خون بند ناف جدا شدند. سلول های جداسازی شده به وسیله SiRNA بر علیه TGFbR2 ترانسفکت شده و طی کشت میزان سرکوب بیان ژن گیرنده نوع دو TGF-b (TGFbR2) با استفاده از Real-Time PCR کمی بررسی شد و پس از اتمام دوره کشت از نظر نشانگر سطحی CD34 با استفاده از فلوسایتومتری و از نظر عملکردی با استفاده از LT-CIC و آزمون کلونی زایی ارزیابی شدند.نتایجبراساس نتایج بررسی حاضر مهار بیان ژن TGFbR2 موجب افزایش جمعیت سلول های خون ساز CD34+ می شود. از سوی دیگر ارزیابی های LT-CIC و آزمون کلونی زایی افزایش تعداد سلول های بنیادی خون ساز اولیه را تایید می نماید.نتیجه گیریبه نظر می رسد به همان اندازه ای که حضور عوامل محرک فعالیت خود تجدید شوندگی در موفقیت ازدیاد سلول های بنیادی خون ساز بند ناف اهمیت دارد، مهار عوامل مهاری هم دارای اهمیت است و مهار علامت دهی مسیر TGF-b به عنوان یکی از عوامل مهاری کلیدی می تواند به موفقیت ازدیاد سلول های بنیادی خون ساز بند ناف در محیط آزمایشگاه کمک شایانی نماید.
کلید واژگان: سلول های بنیادی خون ساز بند ناف, TGFbR2, SiRNA}ObjectiveNowadays, cord blood Hematopoietic stem cells (HSCs) are known as a valuable source for bone marrow transplantation but unfortunately their insufficient number is a limiting factor for using them in adult bone marrow transplantation. Cord blood HCSs expansion is an approach to overcome this problem, by inducing their self-renewal. TGF-b signaling pathway is a key inhibitory agent for HSCs self-renewal. In this study, we tried to enhance self-renewal of long term culture initiating cell by inhibiting TGFbR2 expression.Materials And MethodsCD34+ HSCs were isolated from cord blood units with MACS column. SiRNA against TGFbR2 was transfected by Lipofectamine™ RNAiMAX as transfection reagent. HSCs were cultured in IMDM medium containing 10% FBS and early acting cytokines (Flt3L, SCF, Tpo) for 8 days. Then we evaluated TGFbR2 expression by QRT-PCR. The CD34+ subpopulation of cultured cells were examined by flow cytometry on the 8th day. Finally the expanded cells were evaluated for the presence of early hematopoietic stem cells by LT-CIC and clonogenic assays.ResultsAccording to our results, TGFbR2 down regulation increases CD34+ subpopulation of HSCs. In addition, LT-CIC assay showed an enhancement in primitive hematopoietic stem cell capable of self-renewal.ConclusionAll in all, it seems that positive regulators have attracted more attention in the field of HSCs expansion while negative regulators have same importance in self-renewal process of HSCs and their inhibition can be a beneficial tool for enhancement of HSCs self-renewa. -
سابقه و هدف با شروع عفونت HIV-1، اولین مارکری که در خون آشکار می شود، RNA ویروسی می باشد. از میان روش های موجود که شناسایی RNA را هدف قرار می دهند؛ متداول ترین روش ها NASBA و RT-PCR هستند. NASBA مزیت های متعددی نسبت به RT-PCR ارایه می کند. در این پژوهش، واکنش NASBA در ترکیب با روش آشکارسازی آسان و حساس الایزا، برای تشخیص و آشکارسازی HIV-1 RNA مورد استفاده قرار گرفت.
مواد و روش ها نوع مطالعه انجام شده از نوع بنیادی کاربردی بود. با وارد کردن نوکلئوتید 11-dig-UTP در مخلوط واکنش NASBA، RNA نشاندار تولید شد. آن گاه محصولات نشاندار NASBA در فاز مایع به یک پروب اختصاصی متصل به بیوتین هیبرید شدند. سپس هیبریدهای حاصل به یک پلیت پوشیده شده با استرپتواویدین منتقل شده، پس از اعمال شستشوها و خارج کردن محصولات غیر اختصاصی از محیط واکنش، آشکارسازی نهایی با اضافه کردن کونژوگه آنتی دیگوکسی ژنین آنزیم و سوبسترای آن صورت گرفت.
یافته ها نتایج به دست آمده نشانگر کارآیی واکنش NASBA در تکثیر ناحیه مورد نظر از ژنوم ویروس بود و آشکارسازی محصولات NASBA بر روی ژل آگاروز منحصرا یک باند 176 نوکلئوتیدی مربوط به هدف را نشان می داد. با به کارگیری روش الایزا در آشکارسازی محصولات NASBA، برای غلظت 01/0 مایکرو مولار پروب، OD برابر با 11/0 ± 049/1 به دست آمد.
نتیجه گیری در این مطالعه با به کارگیری آغازگر و پروب مناسب، روش تشخیصی NASBA-ELISA با حساسیت و اختصاصیت بالا برای HIV-1 راه اندازی شد.
کلید واژگان: NASBA, الایزا, ایمونواسی, HI}Background and ObjectivesViral RNA is the first blood marker which appears in HIV-1 infection. RT-PCR and NASBA are the commonly used techniques for amplification of RNA. NASBA technique provides more advantages over RT-PCR. In this study, an NASBA assay combined with an easy, sensitive enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) was developed for detection of HIV-1 RNA.Materials and Methods11-dig-UTP was added to an NASBA reaction mixture and the RNA amplicons were labeled. Then, the dig-labeled NASBA products hybridized to a biotinylated specific probe in hybridization solution buffer and the hybrids were transferred to a streptoavidin-coated plate. After several washing processes and emission of nonspecific products, the final detection of the captured RNA was done by addition of anti-dig antibody-enzyme conjugate and the substrate. ResultsThe results demonstrated that, NASBA is an efficient method for amplification of the target genome. Detection of NASBA products by agarose gel electrophoresis showed a unique 176 bp band corresponding to the specific target. For the detection of NASBA products, an ELISA assay was performed; using 0.01 µM probe, the OD of 1.049 ± 0.11 was obtained Conclusions In this study, by using suitable primers and probe a highly sensitive and specific NASBA-ELISA method for detection of HIV-1 developed. -
هدفهلیکوباکتر پیلوری یکی از شایع ترین عوامل عفونت های مزمن در انسان و قادر به ایجاد عفونت های بسیاری ازقبیل پپتیک اولسر، گاستریت، التهاب دوازدهه و دیس پپسی غیر اولسری است. وجود یک آزمون معتبر برای تشخیص این باکتری ضروری است. به علل مختلف آزمون های موجود از جمله کشت مدفوع، بیوپسی، PCR، آزمون تنفسی اوره آز و غیره رضایت بخش نیست. در این آزمایش آزمون اختصاصی و حساس PCR-ELISA به عنوان آزمون ترجیحی برای تشخیص هلیکوباکتر پیلوری از نمونه های مدفوع و بیوپسی به کار می رود.مواد و روش ها67 نمونه مدفوع از 127 بیماری که براساس علایم بالینی در بیمارستان حضرت رسول اکرم، دانشگاه علوم پزشکی ایران، تهران مورد آندوسکوپی گوارش و بیوپسی معده قرار گرفته بودند، جمع آوری شد. DNA از تمامی نمونه های مدفوع و بیوپسی استخراج و سپس آزمون PCR برای ژن ureC هلیکوباکتر پیلوری انجام شد. سپس آزمون PCR-ELISA نیز انجام و نتایج مقایسه شد.نتایجدر آزمایش PCR بین 67 نمونه مدفوع و بیوپسی به ترتیب 31 (1/46 درصد) و 34 (7/50 درصد) نمونه دارای نتایج مثبت و مابقی منفی بود. همچنین در آزمایش PCR-ELISA از بین 67 نمونه مدفوع و بیوپسی به ترتیب 42 (6/62 درصد) و 47 (1/70 درصد) نمونه دارای نتایج مثبت بود.نتیجه گیرینتایج این مطالعه نشان می دهد که تشخیص هلیکوباکتر پیلوری در نمونه های مدفوع توسط روش PCR-ELISA دارای حساسیت و ویژگی بالایی بوده و می تواند به عنوان آزمون اولیه در شناسایی این ارگانیسم به کار رود.
کلید واژگان: هلیکوباکتر پیلوری, نمونه های مدفوع و بیوپسی, PCR, ELISA, ژن ureC}ObjectiveHelicobacter pylori is to blame for one of the most common chronic infections in humans and can cause peptic ulcer, gastritis, duodenitis and non-ulcer dyspepsia. Developing a reliable test to detect the infection is of great importance. For a variety of reasons, the existing tests including the stool culture, biopsy, PCR, and urea breath test are not up to par. The PCR-ELISA test is a preferably specific and sensitive approach to detect Helicobacter pylori in stool specimen and biopsy.Materials And MethodsSixty-seven stool samples were collected from 127 patients who had undergone gastrointestinal endoscopy and stomach biopsy at Hazrat Rasool Akram Hospital, of Iran University of Medical Sciences based in Tehran. DNA was extracted from the samples before they were subjected to PCR of ureC gene. PCR-ELISA test was conducted and the results were compared.ResultsStool-PCR test 31 (46.1%) of the 67 patients in question were positive and the same test on biopsies showed that 34 patients (50.7%) were infected while the rest tested negative. But the PCR-ELISA test on stool samples suggested that 42 patients (62.6%) were infected, and the same test on biopsies showed that 47 patients (70.1%) were positive.ConclusionThe results of these tests showed that detection of Helicobacter pylori through PCR-ELISA test on stool samples has high specificity and sensitivity and could be used as initial test to detect Helicobacter pylori infection. -
هدفروش تداخل RNA یا RNAi بهترین روش خاموش کردن ژن ها در سطح ترانس کریپتومی شناخته شده است، سرطان ها و بیماری های ژنتیکی اهداف مهمی برای توسعه روش های درمانی مبتنی بر RNAi به شمار می روند. برای حل مشکل خاموشی موقتی سیستم های siRNA، RNA های سنجاق سری یا shRNA ها ابداع شدند و نسل جدید shRNA ها به نام shRNAmir است. سازه خاموش گر با ساختار سنجاق سری شبه microRNA (shRNAmir)، رفتاری مشابه یک microRNA طبیعی را درون سلول تقلید می کند. کمک فعال کننده گیرنده استروئیدی (SRA) یکی از تنظیم کننده های گیرنده استروئیدی از جمله گیرنده استروژنی (ER) است. بافت های پروستات، رحم و سینه بیان پایینی از SRA دارند، در حالی که طی تومورزایی آن ها بیان SRA افزایش می یابد، بنابراین امکان شرکت SRA در تومورزایی یا پیشروی توموری وجود دارد.مواد و روش هادر مطالعه حاضر از روش RNA تداخل گر یا RNAi برای خاموش نمودن ژن SRA استفاده شد و سازه خاموش گر SRA طراحی و توسط Soe-PCR ساخته شد و سپس در پلاسمید pEGFPC1 که یک ناقل بیانی است کلون گردید. رده سلولی انسانی سرطان پستان (MCF7) با پلاسمید حاصل ترانسفکت شد و بیان SRA در زمان های 24، 72 ساعت و 10روز بعد با Real-Time PCR بررسی شد.نتایجکاهش 60 درصدی در بیان نسبی SRA در تیمارهای 72 ساعت و 10روز بعد مشاهده شد که نشان می دهد shRNAmir-SRA با موفقیت توانسته است بیان ژن هدف مطالعه حاضر را به طور نسبتا پایداری خاموش کند.نتیجه گیریبا توجه به موفقیت در طراحی و ساخت یک سازه shRNAmir و خاموشی نسبتا پایدار ژن هدف، این سازه برای مطالعات مختلفی در آینده آماده و مناسب به نظر می رسد.
کلید واژگان: RNA تداخل گر, shRNAmir, کمک فعال کننده گیرنده استروئیدی, (SRA), سرطان پستان}ObjectiveRNA interference (RNAi) is the most potent technique for gene silencing in eukaryotic cellular system at transcriptomic level. Genetic disorders and cancers are important targets for therapeutic development of this technique. In order to bypass the temporary dpwnregulation by siRNA, a new generation of shRNA named shRNAmir has developed. Silencing construct with structure similar to microRNA (shRNAmir), mimics a natural microRNA pathway inside the cell. Steroid receptor RNA activator (SRA) is one of the regulators of steroid receptor like ER. Prostate, uterus and breast tissue express a low level of SRA, there is an increase of expression during their tumorgenesis. So SRA may participate in tumorgenesis or proliferation of tumors.Materials And MethodsWe used RNAi technique to silence expression of SRA. The SRA silencer was designed and constructed by Soe-PCR, then cloned into an expression vector pEGFPC1. Human breast cancer (MCF7) cells were transfected with silencer plasmid then the changes in the SRA expression estimated by Real-Time PCR at 24, 72 hours and after 10days.ResultThe results showed about 60% decrease in relative expression of SRA gene, after 72 hours and 10 days, which shows that shRNAmir–SRA could successfully knockdown the expression of target gene.ConclusionIt seems that the designed shRNAmir may be a suitable tool for a variety of applications because it could stably knockdown the expression of target gene. -
هدفلیستریا مونوسیتوژنز باکتری بی هوازی اختیاری و گرم مثبت است که در خاک، آب، سبزیجات پوسیده، شیر خام و محصولات لبنی آلوده یافت می شود. لیستریا مونوسیتوژنز عامل بیماری لیستریوز است. این بیماری از طریق مدفوع یا لبنیات آلوده از حیوان به انسان منتقل می شود. این باکتری باعث بیماری شبه سرماخوردگی یا انتریت خود محدود شونده می شود. اما در سالمندان، نوزادان، زنان باردار و افرادی که نقص سیستم ایمنی دارند، منجر به بیماری جدی می شود. در صورتی که زنان باردار با لیستریا مونوسیتوژنز آلوده شوند، احتمال این که نوزاد ناقص یا زودهنگام به دنیا بیاید یا سقط شود، زیاد است. به علت اهمیت باکتری در سلامت زنان باردار و نوزادان، مطالعات زیادی روی این باکتری انجام شده است. کشت دادن باکتری مشکل و وقت گیر است و حداقل به 5 روز زمان برای تایید نیاز دارد. هدف ما از انجام این تحقیق تعیین یک روش مولکولی برای ردیابی سریع این باکتری درنمونه های واژن است.مواد و روش هادر این مطالعه 100 نمونه واژن بررسی شد. تمام نمونه ها کشت داده شدند و به روش PCR نیز بررسی شدند.نتایجدر بین نمونه های مورد بررسی، 7 نمونه با استفاده از روش کشت و 36 نمونه با استفاده از روش PCR آلوده به لیستریا مونوسیتوژنز شناخته شدند.نتیجه گیریاین مطالعه نشان داد که PCR روش سریع تر، حساس تر و دقیق تری در مقایسه با روش کشت برای تشخیص حضور این باکتری در نمونه های واژینال است.
ObjectiveListeria monocytogenes is a facultative, gram-positive bacterium which is found in soil, water, decaying vegetables, raw milk, and contaminated dairies. Listeria monocytogenes causes listeriosis. Listeriosis is a zoonosis disease, which transfers from animals to humans by animal feces and contaminated dairies. Listeriosis causes the flu like disease or self-limited enteritis, but it leads to serious disease in elderlies, new-borns, pregnant women and immunocompromised persons. If pregnant women are infected by Listeria monocytogenes, the newborn probably will be miscarried, prematured or stillborn. For the importance of the bacteria on pregnant women’s and newborn’s health, there are so much concentration and studies on it. Culturing of the bacteria is so difficult and time-consuming and it needs at least 5 days to confirm. Our goal in this survey was to develop an PCR based molecular method for fast detection of the bacteria from the vaginal samples.Materials And MethodsIn this survey 100 vaginal samples were examined. All of the samples were cultured and assayed with PCR method.ResultsAmong them, 7 samples for culture and 36 samples by PCR were positive for Listeria monocytogenes.ConclusionIn this study we showed that the PCR is a faster, more accurate and sensitive than culture method for the detection of Listeria monocytogenes in vaginal samples. -
هدفبا توجه به اهمیت مولکول های اینتگرین در لانه گزینی و عدم اطلاعات کافی در الگوی بیان این مولکول ها در مراحل مختلف چرخه استروس بررسی این مولکول ها در اندومتر موش طی مراحل مختلف چرخه استروس ضروری به نظر می رسد.مواد و روش هاحیوانات مورد مطالعه در این تحقیق موش های بالغ نژاد NMRI تعداد 15 سر با سن 6- 8 هفته بودند. ابتدا مراحل مختلف چرخه استروس پرواستروس، استروس، مت استروس و دی استروس از طریق بررسی سلول شناسی اسمیر واژینال تعیین شد. موش ها به تعداد حداقل سه راس در هر مرحله با جابه جایی مهره های گردنی کشته شده و نمونه بافتی از میانی هر یک از شاخ های رحمی در هر مرحله تهیه شد، سپس نمونه ها به دستگاه کرایواستات منتقل شده و برش هایی به ضخامت 8- 10 میکرون از آن ها تهیه شد. این لام ها برای مطالعات ایمونوهیستوشیمی و ارزیابی بروز اینتگرین های 4، 1، v، 3 و لیگاند آن ها استئوپونتین به کار گرفته شدند.نتایجمطابق یافته ها بیان مولکول های اینتگرین در اندومتر موش تنها در مرحله مت استروس مثبت بود و در مکان های متفاوتی از اندومتر بیان شد. اینتگرین vα تنها در پوشش غددی و اینتگرین 3β فقط در غشای قاعده ای هر دو نوع پوشش خود را نشان داد در حالی که بیان 4α برای هر دو نوع پوشش و هر دو غشاء مثبت بود. 1β تنها اینتگرینی بود که بیان آن هم در پوشش سطحی و غددی و هم در استروما ملاحظه شد. استئوپونتین فقط در غشای راسی هر دو پوشش دیده شد و در نقاط دیگر اندومتر دیده نشد.نتیجه گیریبه نظر می رسد که ظهور اینتگرین ها در اندومتر براساس اهمیت و اولویت نقش آن در پدیده لانه گزینی باشد، بنابراین مولکول های 4α، 1β و استئوپونتین که در پوشش سطحی بیان می شوند، می توانند در اتصال و چسبندگی سلول به سلول و اینتگرین های vα، 3β و 1β که در پوشش غددی و استروما بیان می شوند، می توانند در گسترش و نفوذ جنین مداخله کنند.
ObjectiveConsidering the importance of integrin molecules in the implantation and lack of sufficient information in the expression pattern of these molecules in various phases of estrous cycle. It seemed to be necessary to investigate these molecules in mouse endometrial during the various phases of oestrous cycle.Materials And MethodsFemale NMRI mice (n=15) aged 6-8 weeks were studied. Various phases of estrous cycle including: proestrus, estrus, metestrus and diestrus were determined by vaginal smear. The mice were sacrificed (at least 3 per each phase) by cervical dislocation and the tissues were obtained from the middle 1/3 part of their uterine horns at each phase then the cryosections at thicknesses between 8-10 μ were obtained. Then the immunohistochemistry were done for integrins of 4, 1, v, 3 and their ligand osteopontine.ResultsThe integrins were expressed only in the metestrous phase of oestrous cycle in the different locations of mouse endometrium. The positive reactions were observed for αv, α4 and β3 in the apical and basal membrane of glandular epithelium. Also the positive reaction for β1 was found in surface and glandular epithelium as well as stroma. The osteopontin expression was seen in the apical membranes of surface and glandular epithelium and was not seen in other locations. Conclousion: It seems that expression of integrins in endometrium is based on their role in the implantation, therefore the molecules α4, β1 and OPN that are expressed on the surface epithelial may be involve in the adhesion of cell to cell and integrins of αv, β3 that are expressed in the glandular -
هدفتوکسوپلاسما ممکن است ایجاد آسیب در جنین و از انگل های فرصت طلب در بیماران با ایمنی سرکوب شده می باشد. استفاده از روش های مولکولی برای تشخیص بیماری حساس تر از روش های سرولوژیک است. استفاده از روش PCR-ELISA حساسیت و ویژگی بالا، زمان تشخیص توکسوپلاسموزیس نیز سریع تر است. در این پژوهش از روش PCR-ELISA با استفاده از قطعه DNA RE، برای تشخیص توکسوپلاسموزیس به کار رفت. از مزایای این روش حساسیت و اختصاصی بودن و در نهایت تشخیص سریع توکسوپلاسموزیس می باشد.مواد و روش هادر این مطالعه از روش کمی PCR-ELISA برای تشخیص توکسوپلاسموزیس در 15 سر رت استفاده شد. بدین منظور PCR-ELISA برای تشخیص سریع توکسوپلاسموزیس راه اندازی شد. در این روش آغازگرهای اولیگونوکلئوتیدی برای هدف گیری ژن RE مربوط به تاکی زوئیت به طول 138 جفت باز انتخاب شده و برای تکثیر DNA توکسوپلاسما گونده ای، از فرایند PCR و نشاندار کردن همزمان محصول به دست آمده از آن با دیگوکسی ژنین استفاده شد. قطعه نشاندار شده با DIG، با پروب اولیگونوکلئوتید بیوتینیله شده اختصاصی هیبرید می شود و سپس به استرپتاودین پوشش دار شده در بلیت اضافه می شود. هیبرید DNA-DNA ایجاد شده با اضافه کردن آنتی بادی ضد دیگوکسی ژنین کنژوگه شده با پراکسیداز و با روش کلریمتری قابل شناسایی است.نتایجبا استفاده از سیستم PCR-ELISA، ژن RE توکسوپلاسما گونده ای در مدت 4 ساعت و با حساسیت بالا مورد شناسایی قرار گرفت. در ضمن آزمایش هایی برای بررسی حساسیت روش به کار برده شده، انجام گرفت و منحنی استاندارد مربوط به حساسیت روش نیز رسم شد. DNA توکسوپلاسما پس از 4 ساعت قابل شناسایی است و در این روش عوامل دیگر دخالت ندارند؛ بنابراین فقط این انگل تکثیر و شناسایی می شود.
نتیجه گیریکارایی PCR-ELISA ارزیابی شد و ارزیابی ها نشان داد که از مزیت های این روش سریع، حساس، مطمئن و ساده بودن آن است؛ بنابراین می توان از آن به عنوان یک روش تشخیصی استفاده کرد.
کلید واژگان: توکسوپلاسموزیس, رت, PCR, ELISA, ژن RE}ObjectiveToxoplasmosis may cause significant damage to the developing fetus and is a life-threatening opportunistic infection in immunocompromised persons. Molecular methods are known to be more sensitive and more specific than serological assays for diagnosis of toxoplasmosis. Application of quantitative PCR has evolved sensitive, specific, and rapid method for the detection of RH strain of Toxoplasma gondii DNA.Materials And MethodsIn the present study, quantitative PCR-ELISA (Polymerase Chain Reaction-enzyme linked immunosorbent assay) was used for quantization of Toxoplasma gondii in the blood of 15 rats (Rattus norvegicus) infected experimentally with the parasite. In this regard Polymerase PCR-ELISA was developed for rapid detection of Toxoplasma gondii. Specific primers targeting RE gene were selected and used for the amplification of toxoplasmic DNA. DIG-labeled (digoxigenin-labeled) amplicons were hybridized with a specific biotinylated oligonucleotide probe in solution phase and subsequently transferred to streptavidin coated plates. The captured DNA-DNA hybrids were colorimetrically detected by the addition of anti-digoxigenin antibody peroxidase conjugate and substrate.ResultsDNA of Toxoplasma gondii were efficiently detected within 4 hours and no interference was encountered in the amplification and detection of the parasite.ConclusionEfficiency of the PCR-ELISA system was evaluated we found with several advantages in terms of sensitivity, rapidity and simplicity in this system. -
هدفعفونت با هلیکوباکتر پیلوری در سطح جهان گسترده است و بیشترین عامل بیماری زایی در عفونت های سوء هاضمه التهاب معده (گاسترودئودنال) است. گاهی شیوع آن تا 80 درصد بعضی از جمعیت ها را در بر می گیرد اما تنها 10 تا 20 درصد از این افراد به بیماری های مرتبط با این باکتری مبتلا می شوند. همچنین عفونت های حاصل از هلیکوباکتر پیلوری مانند زخم گوارشی، التهاب معده، التهاب دوازدهه و سوء هضم است و تفاوت در بیماری زایی هلیکوباکتر پیلوری به عوامل میزبان و بیماری زایی باکتری وابسته است. هلیکوباکتر پیلوری براساس ژن های vacA و cagA به سویه (تیپ)های متعددی تقسیم بندی می شود که بیماری زایی متفاوتی دارند. وجود این ژن ها در سویه های هلیکوباکتر پیلوری ممکن است برای تشخیص نوع باکتری بیماری زا و غیر بیماری زا به کار برده شود. هدف این تحقیق بررسی فراوانی ژن تولیدکننده سیتوتوکسین واکوئلی (vacA) در ژنوتیپ سویه های هلیکوباکتر پیلوری است که از میان بیماران مراجعه کننده به مجتمع آموزشی، پژوهشی و درمانی حضرت رسول اکرم (ص)، پذیرفته شده در بخش داخلی همراه با عفونت های زخم گوارشی، التهاب معده، التهاب دوازدهه و سوء هاضمه انجام گرفت.مواد و روش هادر این مطالعه نمونه بیوپسی ناحیه آنتروم معده از180 بیماران مراجعه کننده به بخش داخلی مجتمع آموزشی، پژوهشی و درمانی حضرت رسول اکرم (ص)، وابسته به دانشگاه علوم پزشکی ایران در تهران که به طور معمول تحت آندوسکوپی گوارشی- معدی قرار گرفته اند، جمع آوری شد. پس از کشت و جداسازی سویه های مثبت هلیکوباکتر پیلوری با آزمایش های استاندارد و استخراج DNA باکتری، حضور ژن vacA و نیز تیپ های مختلف آن با استفاده از روش PCR تعیین شد.نتایجدر این مطالعه از نمونه های 180 بیمار بیوپسی 92 سویه هلیکوباکتر پیلوری جدا (51 درصد) و توسط روش های بیوشیمیایی تعیین هویت شد. نمونه ها از زخم گوارشی (79 درصد)، التهاب معده (60 درصد)، التهاب دوازدهه (90 درصد) و سوء هاضمه (30 درصد) بود که 87 سویه هلیکوباکتری پیلوری (94 درصد) دارای ژن vacA هستند و بیشتر ژنوتیپ ها هم در ژن vacA است. همچنین 59 نمونه سویه ها (64 درصد) ژنوتیپ m2/s1 را نشان داده است. 57 (62 درصد) سویه از این 92 سویه هلیکوباکتر پیلوری متعلق به تیپI بوده و 31 (33 درصد) سویه ها در تیپIV و 3 (26/3 درصد) نمونه در تیپ II و 2 (17/2 درصد) نمونه در تیپ IIIقرار گرفتند.نتیجه گیرینتایج این مطالعه، تفاوت بین فراوانی تیپ I وIV، نشان دهنده بیماری زایی بیشتر سویه های تیپ I (62 درصد) است و در بیماران مبتلا به زخم گوارشی درمقایسه با سایر عفونت ها، به طور معنی داری اختلاف دارد (01/0P≤).
کلید واژگان: PCR, هلیکوباکتر پیلوری, vacA cytotoxin}ObjectiveHelicobacter pylori is a major etiological agent in gastro-duodenal disorders, and has spread in the world. The prevalence of infection with H. pylori is more than 80% in some populations, but only 10% to 20% of them are infected with this organism. Also infection with this pathogen is associated with peptic ulcer disease (PUD), Gastritis (G), Duodenitis (Du), and non-ulcer dyspepsia (NUD). The development of diseases depends on the virulence of the infecting H. pylori strain and the susceptibility of the host. The vacuolating cytotoxin and the cytotoxin associated protein, encoded by vacA and cagA genes are important virulence determinants of H. pylori which are divided into different pathogenic types, to cause varities of infections. This may be used as a marker of infection and could be used to distinguish between pathogenic and nonpathogenic strains of H. pylori in Iran. The aim of this study was to assess the prevalence of vacA genotype of H. pylori and its development of PUD, G, Du, and NUD from Iranian patients who were admitted to Hazrat Rasoul Akram (peace upon him) as an educational and research society, affiliated to Iran University of Medical Sciences and Health Services (IUMS) in Tehran, Iran.Materials And MethodsDuring this study specimen biopsies were collected from 180 patients who underwent routine gastrointestinal endoscopies to the internal medicine ward, Hazrat Rasoul Akram Hospital, IUMS, Tehran, Iran. Positive H. pylori strains were identified by cultured isolates, standard biochemical methods, and molecular typing was performed by PCR technique to detect vacA gene and its alleles.ResultIn this study out of 180 samples of 92 H. pylori strains were isolated and identified by -
سابقه و هدفتمایز سلول های بنیادی جنینی در شرایط کشت، سیستم آزمایشی را برای بررسی اثرات فرضی فاکتورهای رشد فراهم می کند. امروزه پیدا کردن فاکتورهای رشد و عوامل محیطی مورد نیاز برای خون سازی اهمیت دارد. هدف از این مطالعه مشخص کردن اثر دوزهای مختلف EPO و BMP4 بر تمایز سلول های بنیادی جنینی و ارزیابی تعداد و اندازه کل کلنی ها و تعداد کلنی های اریتروییدی بود.مواد و روش هامطالعه انجام شده از نوع تجربی بود. در این مطالعه از سلول های اجسام شبه جنینی 4 روزه با منشا سلول های بنیادی جنینی رده CCE استفاده شد. سلول ها به وسیله EDTA-Trypsin از هم جدا شدند و در دو گروه آزمایشی حاوی دوزهای مختلف(ng/ml 80، 40، 20، 10، 5، 0) BMP4 و (ng/ml 160، 80، 40، 20، 10، 0) EPO در محیط نیمه جامد حاوی متیل سلولز کشت داده شدند. پس از گذشت 10 روز، دو گروه از لحاظ اندازه کلنی ها، تعداد و درصد کلنی های بنزیدین مثبت مورد ارزیابی قرار گرفتند.یافته هاپس از جمع آوری اطلاعات، مشخص شد تمام دوزهای BMP4 و EPO از لحاظ آماری به طور معنی داری باعث افزایش اندازه کلنی ها شده بودند. مقایسه دوزهای مختلف BMP4 نشان داد که با افزایش دوز، تعداد کل کلنی کاهش می یابد و با گروه کنترل اختلاف معنی داری دارد (0.05نتیجه گیریدر مجموع به نظر می رسد که از بین دو فاکتور بررسی شده، EPO در تحریک سلول های بنیادی جنینی و تمایز آن ها به سمت کلنی های اریتروییدی مناسب تر است و دوز ng/ml 20 EPO نسبت به بقیه دوزها بهترین تاثیر را دارد.
کلید واژگان: سلول های بنیادی جنینی, Bone Morphogenetic Protein 4, اریتروپویتین} -
مقدمهمخمرهای فرصت طلب جنس مالاسزیا متعلق به شاخه بازیدیومیکوتاها و خانواده کریپتوکوکاسه می باشند که به طور طبیعی روی پوست انسان و حیوانات خونگرم ساکن هستند. این مخمرها تحت شرایط خاصی قادر به ایجاد بیماری نظیر تینه آورسیکالر، درماتیت سبوره،... و حتی عفونت های سیستمیک است. در سال های اخیر در پی استفاده از آزمایشات بیوشیمیایی، مورفولوژیکی و روش های مولکولی 9 گونه از جنس مالاسزیا شناسایی شده است.مواد و روش هاتحقیق اخیر با هدف به کارگیری روش های PCR-RFLP برای شناسایی این گونه ها و بررسی سوش های شایع در ایران پایه ریزی شد. ابتدا نمونه های به دست آمده بر اساس تست های متداول میکروسکوپی و ماکروسکوپی و خصوصیات بیوشیمیایی در حد گونه شناسایی شدند و در آزمایشات مولکولی الگوهای واحدی برای هر یک از 3 گونه شایع مالاسزیا به دست آمد.نتایجقطعات تولیدی PCR در حدود 600bp تا 800bp طول داشتند. محصول PCR مالاسزیا سیمپودیالیس 600bp) تا (700bp کوچکتر از محصول PCR سایر گونه های مالاسزیا بود و از این رو به راحتی و تنها از روی باند مربوط به PCR که با استفاده از پرایمرهای ITS1 و ITS4 به دست آمده، از سایر گونه های مالاسزیا قابل افتراق بود. محصول PCR دو گونه مالاسزیا گلوبوزا و مالاسزیا فورفور کاملا مشابه هم بوده و افتراق این دو گونه بر اساس قطعات تولیدی ITS1/4PCR تقریبا غیر ممکن است. برای شناسایی و افتراق دو گونه مزبور از الگوی RFLP با آنزیم ECOR1 استفاده شد.
بحث: استفاده از روش های مولکولی، شناسایی سریع و دقیق گونه های مختلف مالاسزیا را امکان پذیر می سازد. نتایج به دست آمده از روش RCR-RFLP با نتایج به دست آمده از روش های روتین آزمایشگاهی، کاملا مطابقت داشت.
کلید واژگان: شناسایی, مالاسزیا, چربی دوست, PCR, RFLP}BackgroundLipophilic yeasts of the genus Malassezia has been placed among the Basidiomycota phylum in the family of Cryptococcaceae. The genus Malassezia comprises yeasts with a natural habitat of the skin of many warm-blooded vertebrates, and human, but they are also associated with several skin diseases such as tinea versicolor, seborrehoeic dermatitis and even systemic infections. The genus Malassezia has recently been revised to include nine species by biochemical, morphological and molecular findings.Materials And MethodsThis study was aimed at the development of a DNA-based procedure applicable to rapid laboratory confirmation and identification of each Malassezia species. At first, conventional identification methods based on macroscopic, and microscopic features and physiological properties was performed. In the molecular findings a specific and unique restriction pattern was determined for each of the three currently recognized Malassezia species.ResultsThe primers ITS/4 produced a large amplificon (about 800 bp for M. furfur, and M. globosa) and the other amplificon is smaller (about 600 bp for M. sympodialis). For further species distinction with this amplicon, one restriction endonuclease proved tobe useful. Restriction patterns obtained by ECOR1 digestion of amplified products from the ITS region was distinguish.ConclusionApplication of polymerase chain reaction (PCR) technology for molecular diagnostics allows early and accurate identification of Malassezia Spp. The PCR-RFLP results were well correlated with those obtained from traditional identification procedures. -
سابقه و هدفبتاتالاسمی یک اختلال اتوزومال مغلوب می باشد که در اکثر موارد بوسیله موتاسیون های نقطه ای در ژن بتا-گلوبین ایجاد می گردد. موتاسیون های IVS-I-5 و IVS-I-110 موتاسیون های شایع در میان جمعیت ایران بوده و حدود 12% از اختلالات بتاتالاسمی را شامل می شوند. در این مطالعه با طراحی استریپ، تکنیک هیبریدسازی معکوس نقطه ای RDB، به عنوان یک روش غیررادیواکتیو و سریع برای تشخیص این دو موتاسیون شایع ژن بتاگلوبین گسترش داده شد.روش بررسیپس از استخراج DNA ژنومی از خون کامل، واکنش PCR با پرایمرهای اختصاصی Forward و Reverse روی ناحیه ای از ژن بتا-گلوبین حاوی دو موتاسیون مورد نظر انجام گرفت. برای تهیه استریپ، پروپ اولیگونوکلئوتیدی بر روی غشاء نایلونی حاوی گروه های کربوکسی Biodyne C از طریق فعال سازی غشاء تثبیت گردید. عمل هیبریداسیون به همراه 10 میکرولیتر از محصول دناتوره نشاندار شده با DIG-11-dUTP در دمای °42 سانتیگراد به مدت یک ساعت انجام شد. به دنبال آن عمل بلاکینک غشاء با 0.1 BSA(Bovine serum albumin) درصد انجام و سپس با 5 یونیت آنتی بادی Anti DIG متصل به آلکالین فسفاتاز به مدت 30 دقیقه در دمای اتاق مجاور گردید. ظهور رنگ با سوبسترای نمک نیتروبلوتترازولیوم (NBT/BCIP) به مدت 2 ساعت انجام گردید.یافته هاحضور یک توالی خاص DNA بوسیله ظهور یک لکه روی غشا شناسایی شد. افراد نرمال لکه ها را تنها در مقرهای تثبیت پروبهای طبیعی، افراد هتروزیگوت، یک لکه در مقر تثبیت پروب طبیعی و یک لکه در مقر تثبیت پروب موتانت، و افراد هموزیگوت تنها یک لکه در مقر تثبیت پروب موتانت نشان دادند.نتیجه گیریدر این تحقیق یک استراتژی سریع و ساده به منظور تشخیص موتاسیون های متداول بتاتالاسمی ایران بر اساس PCR و بدنبال آن هیبریدسازی معکوس راه اندازی گردید.
کلید واژگان: استریپ, موتاسیون, بتاتالاسمی, هیبریدسازی نقطه ای معکوس}Medical Science Journal of Islamic Azad Univesity Tehran Medical Branch, Volume:15 Issue: 2, 2005, P 79BackgroundBeta-thalassemia is an autosomal recessive disorder that most commonly caused by point mutations in the beta-globin gene. IVS-I-5 and IVS-I-110 are the most frequent mutations found among Iranians comprising 12% of all mutations. In this study, we develop the implementation of the reverse Dot-Blot (RDB) hybridization technique as a rapid and simple method for the detection of the two common mutations in the beta-globin gene.Materials And MethodsTotal genomic DNA was extracted and PCR with specific primer (forward and reverse primer) was performed on region of beta-globin gene consisting the two mutations. Labeled dNTPs with DIG-II-dUTP were used in PCR mixture therefore PCR product contained DIG labeling formed. The oligonucleotide probe was immobilized onto a Biodyne C nylon membrane via activation membrane. The strips were hybridized with 10 microliters of denatured PCR product labeled to DIG at 42°C for 60 minutes. After blocking strip with the blocking buffer, the strip exposed to 5 unit anti-DIG antibody conjugates with alkaline phosphatase for 30 minutes at room temperature. The color detection was performed with nitroblue tetrazolium salt (NBT/BCIP) substrate for 120 minutes.ResultsThe presence of a particular DNA sequence was detected by the appearance of a dot on the membrane. Normal individuals (N/N) showed dots with each wild-type sequence but not with any mutant probe. Heterozygotic individuals showed the appearance of a single mutation dot in addition to all the normal dots and homozygous individuals revealed dots with each mutant probe but not with any wild-type sequence.Conclusionwe described a rapid and simple strategy to detect beta-thalassemia mutations based on PCR followed by reverse Dot-Blot hybridization. -
مقدمهعفونت با هلیکوباکتر پیلوری عموما با التهاب معده همراه است؛ اما تنها در برخی مواقع منجر به ایجاد بیماری های دارای اهمیت بالینی مانند زخم دوازدهه و زخم معده می شود. توسعه بیماری به بیماریزایی سویه هلیکوباکتر پیلوری عفونی کننده فرد، حساسیت میزبان و عوامل کمکی محیطی بستگی دارد. پروتئین وابسته به سیتوتوکسین (cytotoxin associated gene protein) که توسط ژن cagA کد می شود، عامل بیماریزایی مهمی است که تنها توسط دسته ای از سویه های هلیکو باکتر پیلوری کد می شود و در بعضی از جمعیتها به صورت مارکر بیماریزایی سویه های هلیکوباکتر پیلوری استفاده شده است. هدف از این مطالعه، بررسی شیوع CagA در میان سویه های هلیکوباکترپیلوری جداشده از بیماران مبتلا به بیماری های دستگاه گوارش فوقانی و بررسی ارتباط حضور این ژن و شدت بیماری در بیماران ایرانی است.مواد و روش هادر این تحقیق از 180 بیمار، نمونه بیوپسی از ناحیه آنتروم معده گرفته شد. پس از جداسازی سویه های هلیکوباکترپیلوری از نمونه بیوپسی بیماران، DNA بآکتری به روش استاندارد استخراج گردید و حضور ژن CagA با استفاده از روش PCR مورد بررسی قرار گرفت.نتایجاز مجموع 180 بیمار 92 سویه هلیکوباکتر پیلوری جدا شد و توسط واکنش های بیوشیمیایی تعیین هویت گردید. 70% سویه های دارای ژن CagA بودند. تمام 19 بیمار با زخم دوازدهه و عفونت هلیکوباکتر (100%) در حالی که 24 بیمار از 72 بیمار با سوهاضمه و عفونت هلیکو باکتر(CagA (61% مثبت داشتند (p<0.01).نتیجه گیریتفاوت معنادار بین فراوانی ژن CagA می تواند نشان دهنده افزایش خطر ابتلا به زخم های گوارشی در افراد عفونی با سویه های هلیکوباکترپیلوری دارای این ژن باشد.
کلید واژگان: هلیکوباکتر پیلوری, زخم گوارشی, cagA}Introduction andAimsHelicobacter pylori commonly is associated with gastritis: but only sometimes it causes clinically significant diseases such as gastric and duodenal ulcer. The development of disease depends on the virulence of the infecting H. pylori strain, the susceptibility of the host, and environment co-factors. The cytotoxin associated protein encoded by cagA gene is an important virulence factor that is produced by some H. pylori strains, and has been used as virulence marker in some populations. The aim of the study was to examine the prevalence of cagA gene in the isolated strains of H. pylori from patients with dyspeptic disease and to investigate the association of cagA gene and the severity of H. pylori related diseases in Iran.Materials And MethodsIn this study, biopsy specimens were obtained from the antrum of 180 patients. After isolation of H. pylori and its DNA by standard methods, polymerase chain reaction (PCR) technique was used for detection of cagA bacterial gene.Results92 out of the 180 patients had H. pylori strains. 70% were cagA gene positive. All patients with peptic ulcer (100%) and 44 out of 72 (61%) patients with non-ulcer dyspepsia were cagA positive (p<0.01).ConclusionsThere was significant difference in frequency of cagA gene in peptic ulcer disease and non-ulcer dyspepsia (p‹0.01). It showed that the risk of PUD in patients with cagA+ H. pylori infection may be higher than in those with cagA- H. pylori infection.Keywords: Helicobacter pylori, PUD, CagA}
بدانید!
- در این صفحه نام مورد نظر در اسامی نویسندگان مقالات جستجو می‌شود. ممکن است نتایج شامل مطالب نویسندگان هم نام و حتی در رشته‌های مختلف باشد.
- همه مقالات ترجمه فارسی یا انگلیسی ندارند پس ممکن است مقالاتی باشند که نام نویسنده مورد نظر شما به صورت معادل فارسی یا انگلیسی آن درج شده باشد. در صفحه جستجوی پیشرفته می‌توانید همزمان نام فارسی و انگلیسی نویسنده را درج نمایید.
- در صورتی که می‌خواهید جستجو را با شرایط متفاوت تکرار کنید به صفحه جستجوی پیشرفته مطالب نشریات مراجعه کنید.
©2000-2024 magiran.com All Rights Reserved.