فهرست مطالب ali nazari shirvan
-
پیش زمینه و هدف
دیفتری یک بیماری حاد دستگاه تنفسی قابل کنترل با واکسن است که عامل آن باکتری گرم مثبت کورینه باکتریوم دیفتریه است. ازآنجایی که تهیه، تخلیص و سمیت زدایی واکسن این بیماری شامل مراحل متعدد و پیچیده ای است، بنابراین، تحقیق حاضر باهدف کوتاه کردن مراحل مختلف تخلیص توکسویید، انجام گرفت.
مواد و روش هابرای این منظور و با روش مقایسه ای و مداخله ای، ابتدا بهینه سازی سه فاکتور مقدار آهن محیط کشت، دمای کشت و میزان دور شیکر برای تولید هر چه بیشتر توکسین انجام شد. در هر مورد آزمایش سه بار تکرار شد و مقادیر Lf و Kf جهت ارزیابی تولید توکسین تست شدند. پس از غیر فعال سازی توکسین و تولید توکسویید، جهت تصفیه و تخلیص توکسویید از تقلیل مرحله ای با کنترل فاکتورهای کیفی استفاده گردید. در این روش از مراحل اولترافیلتراسیون، ترسیب، دیالیز و کروماتوگرافی با ستون سفادکس G-25 استفاده شد. در شرایط تقلیل مرحله ای نیز در حالت اول مرحله دیالیز، در حالت دوم مرحله کروماتوگرافی و در حالت سوم هر دو مرحله دیالیز و کروماتوگرافی حذف شدند. نتایج هر روش با انجام SDS-PAGE و بررسی خلوص با نرم افزار Minitab 18 ارزیابی گردید ((p‹0.05.
یافته هانتایج حاصل برای بهینه سازی محیط کشت نشان داد که مقدار آهن با غلظت 1 میلی گرم در لیتر، دمای 35 درجه سانتی گراد و دور شیکر rpm 200 منجر به تولید بیشترین مقدار توکسین می شوند (p‹0.05). در آزمایش های مربوط به تقلیل مراحل تصفیه و تخلیص توکسویید، بهترین نتایج در سری نمونه های تخلیص شده با مراحل اولترافیلتراسیون، ترسیب و کروماتوگرافی ستونی به دست آمد.
بحث و نتیجه گیریازآنجاکه در تولید صنعتی، زمان و هزینه دو فاکتور کلیدی هستند، لذا با حذف مرحله دیالیز که به طور تقریبی دو هفته به طول می انجامد، می توان تولید توکسویید برای واکسن دیفتری را با هزینه کمتر و در زمان کوتاه تر انجام داد.
کلید واژگان: دیفتری, تخلیص, تقلیل مرحله ای, توکسوئید}Background & AimDiphtheria is an acute vaccine-controlled respiratory disease caused by the gram-positive bacterium Corynebacterium diphtheria. Since the preparation, purification, and detoxification of the vaccine against this disease involves many and complex steps, the present study aimed reduction of time of various stages of toxoid purification.
Materials & MethodsFor this purpose, three factors were first optimized for the concentration of iron in the culture medium, incubation temperature and rotation speed to produce more toxins. In each case, the experiment was carried out in triplicate and Lf and Kf values were tested to evaluate toxin production. After toxin inactivation and production of the toxoid, step reductions were performed to purify the toxoid. For this, ultrafiltration, precipitation, dialysis and chromatography with Sephadex G-25 column are used. In step reduction conditions, dialysis, chromatography or both of them were removed in the first, second and third cases, respectively. The results of each method were evaluated by SDS-PAGE and the quantitative data was analyzed using Minitab 18 (p‹0.05).
ResultsThe results for optimizing the culture medium showed that highest amounts of toxin were produced at an iron concentration of 1 mg/l, a temperature of 35 °C, and a rotation speed of 200 rpm(p‹0.05). In the reduction experiments related to toxoid purification steps, the best results were obtained in a series of purified samples with ultrafiltration, precipitation and column chromatography steps.
ConclusionSince time and cost are two key factors in industrial production, toxoid production for the diphtheria vaccine can be produced at a lower cost and in less time by eliminating the two-week dialysis phase.
Keywords: Diphtheria, Purification, Step Reduction, Toxoid} -
نشریه تحقیقات دامپزشکی و فرآورده های بیولوژیک، سال سی و سوم شماره 1 (پیاپی 126، بهار 1399)، صص 118 -127مارها یکی از مفیدترین حیوانات این کره خاکی برای تولید انواع دارو، سرم ها و واکسن ها هستند. زهر مار عمدتا برای بی حرکت کردن و کشتن شکار می باشد و از نظر دفاعی احتمالا اهمیت حیاتی دارد. زهر مارها کاربردهای درمانی فراوانی دارد و در تحقیقات بیوشیمی بسیاری استفاده می شود. این مایع روغنی شکل، دارای رنگی سفید تا زرد و با pH اندکی اسیدی می باشند و مخلوط پیچیده ای از پلی پپتیدها، پروتئین های سمی، آنزیمی و مواد غیر پروتئینی هستند. غده سمی مار از نظر تشریحی شبیه به غده تغییر شکل یافته پاراتیروئید انسان است. این غده در اغلب مارها در فضایی واقع در پشت چشم و روی استخوان فک بالایی که به سمت پایین و عقب چشم امتداد دارد. به عبارت دیگر بین چشم و گوشه دهان قرار می گیرد. با حرکت سریع استخوان های سرو فشار وارده توسط ماهیچه ها به غده سمی، مقداری زهر از راه کانالی که به دندان سمی متصل است به شکار منتقل می شود. زهر همه ی مارها یکسان نیست اگرچه این عقیده وجود دارد که زهر مارها از اجداد بیولوژیکی مشترک به وجود آمده است. هدف در این مطالعه تشخیص و تعیین میزان فعالیت آنزیم پروتئاز در زهر مار شاخدار ایرانی از مناطق مختلف می باشد. در این پژوهش بر روی زهر مار شاخدار ایرانی از سه منطقه سمنان ، کرمان و خوزستان تحقیق و بررسی به عمل آمد. ابتدا غلظت پروتئین های زهر این مار با استفاده از روش های لوری و برادفورد، تعیین گردیدکه میزان mg/ml 95/. گزارش گردید. در مرحله بعد، تعداد پلی پپتیدها و وزن مولکولی این پروتئین ها با استفاده از الکتروفورز عمودی مشخص گردید که به دو صورت احیایی و غیر احیایی انجام شد، و محدوده وزن مولکولی 15 تا 190 کیلودالتون تخمین زده شد که این پروفایل پروتئینی در خوزستان ، کرمان و سمنان دارای تشابه نسبی بودند. انجام الکتروفورز Native و زیموگرافی با سوبسترای کازئین، فعالیت پروتئولیتیک زهر مار شاخدار را تایید نمودو سنجش کمی فعالیت پروتئازی زهر با دو روش هضم کازئین و سوبسترای BAPNA معادل با U/ml 56/11 تعیین گردید.کلید واژگان: پروتئاز, زهر, فعالیت آنزیمی و مار}Snakes are one of the most useful animals in the world for the production of medicines, sera and vaccines that are made from the venom. Venomous snakes have many therapeutic applications and are very useful in biochemical research. Snake venom is an oily liquid, white to yellow with a slightly acidic pH and is a complex mixture of polypeptides, toxic proteins, enzymes, pharmaceuticals and non-protein substances. Venom of all snakes is not the same, although it is believed that venom of snakes originated from common biological ancestors.The aim of this study was to determine the activity of protease enzyme in venom of horned snake from different regions. In this study, the venom of the horned snake from three regions of Semnan, Kerman and Khuzestan was investigated. At first, the venom protein concentration of this snake was determined using Lowry and Bradford methods, which was reported to be 950 mg / ml (95%). In the next step, the number of peptides and molecular weight of these proteins were determined by vertical electrophoresis, which were performed in both reducing and non-reducing methods. And the molecular weight range of 15 to 190 kDa was estimated to have relative similarities in Khuzestan, Kerman and Semnan. Native electrophoresis and casein substrate electrophoresis confirmed the proteolytic activity of ruminant venom and quantitative determination of venom proteolytic activity was determined by BAPNA dilution and casein digestion 11.56 U/ml.Keywords: protease, Venom, Enzymatic activity, Snak}
-
پرتوسیس توکسین مهمترین عامل ویرولانس باکتری Bordetella pertussis است که از نوع اگزوتوکسین های پروتئینی AB5 می باشد و آنتی ژن محوری درساخت واکسن های غیر سلولی سیاه سرفه است. به دلیل ملاحظات اقتصادی روش های تخلیص پرتوسیس توکسین بطور کامل منتشر نشده است. هدف از این تحقیق، راه اندازی و اصلاح روش تخلیص پرتوسیس توکسین از مایع رویی کشت باکتری و زیست سنجی آن توسط آزمون CHO-cell بود. سویه واکسینال 509 B. pertussis و سلول CHO از موسسه رازی تهیه گردید. کشت باکتری در فرمانتور 300 لیتری در دمای 35 درجه سانتیگراد و در محیط B2 به مدت 44 ساعت صورت پذیرفت. سپس مایع رویی جدا سازی گردیده و به ترتیب با فیلتر 45/0 میکرومتر تصفیه گردید و سپس با دستگاه اولترافیلتراسیون (cut off 10 kDa) تغلیظ شد. تخلیص توکسین توسط کروماتوگرافی میل ترکیبی با فتوئین سفاروز انجام گردید. پس از اعمال توکسین تخلیص شده بر منولایر سلولی CHO، فرایند خوشه ایشدن سلول ها از ساعت نخست پدیدار گردید و در مشاهدات ساعت دوازدهم به بعد متوقف شد. میزان توکسین تخلیص شده IU/ml 43/0 ±53/2 محاسبه گردید. طی تولید واکسن های سلولی، پس از جدا سازی جرم سلولی، فاز مایع دور ریخته می شود، حال آنکه نتایج بررسی حاضر نشان داد این فاز محتوی مقادیر قابل توجه توکسین می باشد. با توجه به آنکه استحصال پرتوسیس توکسین، رکن اصلی در توسعه و ساخت واکسن های نوین غیر سلولی است لذا تحقیقات تکمیلی در خصوص استفاده از سایر سویه ها و بررسی شرایط مختلف کشت باکتری پیشنهاد می شود.کلید واژگان: سیاه سرفه, بوردتلا پرتوسیس, پرتوسیس توکسین, کروماتوگرافی میل ترکیبی, CHO, cell test}Pertussis toxin (PT), the main virulence factor of Bordetella pertussis is a protein-based AB5-type exotoxin. Methods of pertussis toxin purification are not available exactly because of economic considerations by vaccine companies. The aim of this study was to setup and modify an in-house method for the PT purification based on affinity chromatography to develop acellular pertussis vaccine in future. B. pertussis and CHO cells were provided from Razi Institute (Karaj, Iran). The bacteria were grown in a 300L fermenter (44 h, 35o c, in B2 medium). The fermentation broth was clarified and concentrated by 0.45 µm membrane filter and 10 KDa molecular weight cut-off membrane respectively. Isolation of pertussis toxin was performed based on affinity chromatography by Fetuin Sepharose column. Immune dot blot test showed significant amounts of pertussis toxin qualitatively. The clustering of CHO- cells mono-layer were observed after first hour of applying the purified pertussis toxin and stopped after the twelfth hour. The average amount of extracted PT was 2.53 IU/ml± 0.43. Among the production procedure of whole cell pertussis vaccine, culture broth is discarded, whereas, results showed it was a suitable source for extraction of pertussis toxin. Finally examine other strains and bacterial culture methods to obtain desired pertussis toxin are recommended.Keywords: Whooping cough, Pertussis toxin. Bordetella pertussis, Affinity chromatography, CHO-cell test}
- در این صفحه نام مورد نظر در اسامی نویسندگان مقالات جستجو می‌شود. ممکن است نتایج شامل مطالب نویسندگان هم نام و حتی در رشته‌های مختلف باشد.
- همه مقالات ترجمه فارسی یا انگلیسی ندارند پس ممکن است مقالاتی باشند که نام نویسنده مورد نظر شما به صورت معادل فارسی یا انگلیسی آن درج شده باشد. در صفحه جستجوی پیشرفته می‌توانید همزمان نام فارسی و انگلیسی نویسنده را درج نمایید.
- در صورتی که می‌خواهید جستجو را با شرایط متفاوت تکرار کنید به صفحه جستجوی پیشرفته مطالب نشریات مراجعه کنید.
©2000-2024 magiran.com All Rights Reserved.